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1、第一节 基本原理,一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1分子的电子能级与激发过程,S0,S1*,T1*,电子能级的多重性 M2s1,（二）激发光谱与发射光谱,excitation spectrum 横坐标ex，纵坐标 发射光强度,fluorescence spectrum 横坐标em，纵坐标 发射光强度,溶液荧光光谱的特征,Stokes shift 荧光光谱的形状与激发波长无关 荧光光谱与激发光谱的镜像关系,二、荧光与分子结构,荧光寿命(f)和荧光效率 (f),Ft = F0 e -t /f,一般物质 f 01之间,有机化合物分子结构与荧光的关系,长共轭结构 刚性和共平面性 取代基,荧光试剂,
2、荧光胺 Dansyl-Cl 邻苯二甲醛(OPA) 测定无机离子的荧光试剂,三、影响荧光强度的外部因素,温度 溶剂 pH值 荧光熄灭 散射光,选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰,第二节 荧光定量分析方法,一、荧光强度与物质浓度的关系,F=K(I0-I),I=I010-ECL,F= KI0(1-10-ECL) = KI0(1-e-2.3ECL),若c很小，Ecl 0.05 则,F=2.3KI0Ecl=Kc,F=2.3KI0ECl=KC,ECl0.05 F C ECl 0.05 F 与C不成正比 荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法,F,A= - lgT = - lgI /I0,荧光法,紫外法,二、定量分析方法,1.标准曲线法 2.比例法（对比法） 3.多组分分析多组分分析,用空白溶液调零 用标准溶液调满刻度,第三节 仪器与其他荧光分析技术,一、荧光分光光度计,滤光片荧光计 滤光片单色器 荧光分光光度计,仪器的校正,灵敏度 波长 激发光谱和荧光光谱,以能被检出的最低信号来表示 在选定条件下用稳定荧光物质校正,用汞灯标准谱线校正,双光束仪器时，误差可抵消,二、其他荧光分析技术简介,1.激光荧光分析 2.时间分辨荧光 3.同步荧光分析 4.胶束增敏荧光,