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1、SYBR Green I 工作原理,未结合的SYBR green I,结合解离曲线识别不同的PCR产物,95 15sec; 60 20sec; 95 15sec 在60 95 之间的Ramp time设为19:59,SYBR Green I的特点,可以用于不同的模板 使用方便，价格相对便宜 灵敏度很高 与非特异性产物结合 解离曲线 选择良好的引物和探针并优化反应条件,TaqMan Probes,TaqMan Probes工作原理,随着扩增循环数的增加，TaqMan探针释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系 TaqMan探针应用基因检测、病毒定量、细胞因子基因定量、癌
2、细胞基因微突变检测等 其结果都具有高特异性与高敏感性 但只适合于一个特定的目标,TaqMan MGB探针,因此，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高。 TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想。,分 子 信 标 (发夹型杂交探针),分 子 信 标 工 作 原 理,荧光基团,分子信标能特异性地检测感兴趣的目标DNA 分子信标可用于单核苷酸多态性的检测 特别适用于检测点突变 只能用于一个特定的目标 设计困难 价格较高,常 用 的 热 循 环 仪,ABI Prism 7700,可以在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增 一次可以测定96个样本，并且速度较快，一批样本的完成只需要23小时 用于水解探针、双链DNA结合染料、分子信标的分析 但是它不能实时对扩增结果进行分析，而只能在全部扩增结束后才进行数据分析,