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1、陇东学院农林科技学院2014届毕业论文开题报告论文题目食品原料中真菌毒素的酶联免疫检测技术应用姓 名刘德政学 号2010311111班 级2010级食品科学与工程本科班指导老师韩雍来 源导师指定分类试验类一课题研究现状意义拟研究的主要问题重点难点研究方法和步骤预期效果(一) 课题研究背景和意义研究综述1.课题研究的背景、目的和意义1）研究的背景真菌毒素是真菌的二次性代谢产物，与真菌本身的生长发育无关，并不是所有代谢物都有毒， 一种真菌可能产生多种毒素，多种真菌可能产生同一种毒素。危害较大的有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、单端孢霉烯族毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素和麦角类生物碱等。 黄曲霉毒素是天然物
2、中致癌性最强的毒素，也是世界各地的农产品及食品最易受其污染的一种真菌毒素，联合国粮农组织估计全世界谷物供应的 25% 受真菌毒素污染。 这些真菌毒素会通过被污染的谷物、饲料和由这些饲料喂养的动物所提供的动物性食品进入我们的食物链，从而对人畜表现出致癌性、遗传毒性、致畸性。作为一级预防的主要措施，就是制定真菌毒素的限量标准，因此，准确检测真菌毒素含量的技术手段变得极为重要。2）研究的目的、意义食品原料中存在的真菌毒素一直是威胁我们生命安全的重要因素,需要对原料中存在的这些有毒有害物质进行有效的检测。在食品安全的日常监管中,这些检查必须能够快速进行,并且在非实验室条件下操作也能提供稳定的性能、且必
3、须具有一定的灵敏度和特异性,酶联免疫检测技术在这些方面具有广泛的运用。这一领域的发展趋势是基本检测方式的改变,常规分析一般只涉及在实验室使用色谱技术进行样品分析,这种传统的理化分析手段将为二级测试方法所替代,即先用简便、快捷的分析方法(如免疫法、生物传感器等)进行现场快速初级监测,然后对初级监测中呈阳性反应的样品进行实验确证,从而可大大减少分析工作量,提高分析效率。真菌毒素检测技术是真菌毒素污染控制的有效抓手,一直是国际关注和研究热点。我国历来重视真菌毒素检测技术研究与开发,近10年取得了重要进展,并在污染监测中发挥了重要作用。本文基于近年来研究进展和应用领域,阐述真菌毒素的酶联免疫检测技术在
4、食品原料中的应用。2.酶联免疫检测技术的应用研究综述酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosobent assay，简称ELISA）又称酶标法，是在免疫酶基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。由于ELISA具有选择性好、灵敏度高、检测结果准确、实用性强等优点，弥补了经典化学分析方法和其他仪器测试手段的不足，目前已广泛应用于临床医学生物学和分析化学等领域。近年来随着分子生物学技术、ELISA检测技术及其检测仪器设备的快速发展，其在食品安全检测中的应用也日益广泛。以下针对ELISA技术的应用研究做一综述。真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B1 、 M1 以及T-2毒素，脱氧雪腐镰刀
5、菌烯醇（呕吐毒素 DON），二乙酰草镰刀菌烯醇（DAS），玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A（OA）；农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等；其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素，苯并（a）芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白（Gliaclin），酱油蛋白（Soy protein），花生蛋白（Peanut protein），牛乳清蛋白（Borine Whey Protein）等。随着食品工业的发展，对分析检测的要求
6、越来越高，从而也使 ELISA 方法将更趋完善。一方面为提高 ELISA 方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和 ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到 DNA 分子结构水平，促使食品工业的健康发展。酶联免疫检测技术最早是从放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)发展而来的。放射免疫法的优点是特异性强、灵敏度高、精确、简便易行。它包括以标记抗原(Antigen, Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody, Ab)为特点的免疫放射分析(Immunoradiometric assay ,IRMA)。前
7、者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D和2,4，5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。 酶免疫法(Enzyme Immunoassay, EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用作标记物的酶有辣根
8、过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)。酶标试剂制备容易、稳定、价廉。酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)、酶免疫试验法(Enzyme-monitored Immunotest ,EMIT)、竞争结合酶免疫分析法(Competitive Binding Enzyme Immunosorbent Assay, EIA)和疫酶分析
9、法(Immunoenzymometric Assay, IEMA)。其中基于竞争吸附的ELISA已成为农药监测中的首选方法。美国环境保护机构(USEPA)开发了野外便携式和实验室ELISA方法，其主要目标是建立便于野外监测危险污染物的简便方法。监测的靶分析物包括多氯联苯、苯、甲苯和二甲苯混合物、硝基芳烃化合物、对硫磷、carbaryl和其它杀虫剂。美国食品药物管理局(USFDA)主要将ELISA集中于食品和饲料中农药残留的检测，开发了天然霉素(黄曲霉素)的免疫分析，目前正在研究用于检测phenamaphos和carbendazine 等化合物的检测方法。美国农业食品安全检查部门(USFSIS)
10、资助开发了除草菊酯、有机氯杀虫剂及其它化合物的免疫分析法，并采用现有的方法来完成其监测任务。近年来，Immunosystems Inc.已生产出了几种ELISA试剂盒，其靶分析物包括杀虫剂、杀菌剂和除草剂。这种试剂盒配上便携式分光光度计可实现野外定量快速测定，检测灵敏度为0.0325ppb。随着ELISA在农药监测中的应用范围的不断扩大，一些新方法也不断涌现。Hall等用EIA法检测了水样中的污染物2,4-D,三嗪，Merolachlor并将其与气相色谱分析结果进行比较。Roda等利用EIA对环境水样中苯并芘进行了测定。 Hong利用ELISA对土壤和水中三氮杂苯类除草剂进行了测定。Hutch
11、inson等利用ELISA检测土壤中的EPTC。Wittmann用酶免疫分析法检测残留在食品中的三嗪。Weller通过改变温育时间，提高了ELISA检测三氮杂苯类除草剂的灵敏度。我国的研究者也自行开发了一些ELISA法。刘长武应用ELISA对梨、苹果中的对硫磷残留进行了测定。余万俊制备了杀虫脒的特异性抗体，并以此抗体建立了大米中杀虫脒残留的单克隆抗体ELISA检测法。阳传和应用B淋巴细胞杂交瘤技术，研究出特异性强的T-2毒素的单克隆抗体，并建立了小麦T-2毒素的ELISA方法。周永新等进行了蓖麻毒素多克隆抗体的研究。ELISA的快速发展，主要是由于其高度的重现性、灵敏度和较短的分析时间所决定的
12、。许多环境化合物的特异性单克隆和多克隆抗体的制备及应用为ELISA的快速发展奠定了基础。（二）拟研究的主要内容重点和难点1. 拟研究的主要内容全文分为三个部分:1）引言 （第一章)：阐述本课题研究的背景、目的和意义；对酶联免疫检测技术的应用研究现状进行了综述；研究的主要问题；预期的研究成果。2）真菌毒素的相关理论、酶联免疫检测技术的基本原理和在食品检测中的应用（第二章)：真菌毒素的相关理论、酶联免疫检测技术的基本原理。概述真菌毒素的性质与分类；阐述酶联免疫检测技术的由来、基本原理、方法分类、与其他方法的比较优势。（第三章)：酶联免疫检测技术在食品原料检测中的应用。随着ELISA 技术在食品安全
13、检测中的逐步推广，针对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物、转基因成分和激素运用ELISA 技术进行检测。 3）结论与展望（第四章):分析影响ELISA的因素；展望ELISA 技术的发展趋势。2. 拟研究的重难点通过对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物、转基因成分和激素运用ELISA 技术，阐述ELISA 技术的优势；分析影响使用ELISA的因素。（三）研究方法和步骤预期效果1. 研究方法和步骤研究背景、意义和酶联免疫检测技术的应用研究综述研究内容、预期成果真菌毒素的性质与分类、酶联免疫检测技术的基本原理针对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物
14、、转基因成分和激素运用ELISA 技术进行检测分析影响ELISA的因素；展望ELISA 技术的发展趋势2 预期效果从多个方面叙述ELISA技术在食品原料中检测真菌毒素的应用，达到对酶联免疫检测技术应用的扩展。二论文提纲1引言1.1研究的背景、目的和意义1.2对酶联免疫检测技术的应用研究现状进行了综述1.3研究的主要问题、预期的研究成果2真菌毒素的相关理论2.1真菌毒素的性质2.2真菌毒素的分类介绍3酶联免疫检测技术的基本原理3.1酶联免疫检测技术的由来3.2基本原理3.3方法分类3.4与其他方法的比较优势4酶联免疫检测技术在食品原料检测中的应用4.1食品原料中有毒有害物质的检测4.2食品原料中
15、生理活性物质的检测4.3转基因食品原料的检测5结论与展望5.1分析影响ELISA的因素5.2展望ELISA 技术的发展趋势三准备情况和进度安排起止时间主要内容简述主要工作地点、方式和拟定达到目的2013-11-3至2013-12-22013-12-3至2014-2-22014-2-3至2014-5-32014-5-4至2014-6-1确定论文框架搜集论文所需相关资料撰写论文论文整理在图书馆充分利用网络及图书资源阅读相关文献，构建论文框架。通过做实研和收集并分析实验数据。在前面两个步骤基础上参考相关文献，撰写论文按照学校的论文格式对论文进行进一步完善总结。教研室审查意见 教研室主任（签字） 年 月 日