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1、 “动物营养实验技术” 材料 2012动物营养实验技术（硕士）讲稿 教学大纲一、课程性质和任务本门课程的实践性很强，全部教学内容要求在实验室完成。学完本课程后，要能够根据特定实验项目进行实验用品计划和建立新实验室；能够根据所掌握的技能对饲料原料、配合饲料产品及其半成品进行营养成分分析和品质鉴定；结合动物实验对饲料原料、配合饲料等进行生物学评定；掌握一些精密仪器的工作原理和使用方法等。二、主要教学内容1.动物营养实验基础药品的规格、合理使用和管理；容量器的使用和校正；实验室常用洗涤剂的配制；指示剂的配制；标准溶液的配制和标定。2.饲料样品的采集与制备样品的采集与制样方法（采集样品的目的要求，采集
2、方法原则，制备样品方法等）；风干样品的制备；主要内容为制样过程和方法；半干样品的制备（附：初水分测定）；样品的登记与保管。3.饲料营养成分分析饲料干物质（水分）的测定；饲料粗灰分测定；饲料粗蛋白质测定；饲料粗脂肪测定；饲料粗纤维测定；饲料无氮浸出物计算；饲料钙测定；饲料总磷测定；饲料水溶性氯化物测定。4.消化、代谢试验（串讲或幻灯片演示）猪的消化实验；鸡代谢实验；动物营养实验方法简介。5.精密仪器和贵重仪器的使用安捷伦6890N气相色谱仪的熟悉与化学工作站的简单操作、测热仪的使用、紫外分光光度计等的演示。三、教学基本要求1.掌握动物营养与饲料分析必备的一般实验室操作技能，概略养分分析法和某些纯
3、养分测定法；了解饲养分析实验室的要求及各实验所需仪器，药品的规格、数量等，能够进行实验用品计划和建立新实验室。2.消化代谢实验。3.能根据文献所提供的方法做出未做过的实验；能编写实验指导书；能指导本、专科学生进行动物营养学和饲养学实验.4.创新性设计实验，对现有实验方法有所改进。四、参考学时分配序号课程主要内容学时分配第一讲动物营养实验基础4第二讲饲料样品的采集与制备2第三讲饲料营养成分分析26第四讲消化、代谢试验2第五讲精密仪器和贵重仪器的使用2合 计36五、主要参考书目及文献1饲料分析与饲料质量检测技术，杨胜主编，中国农业大学出版社，1993。2实用饲料分析手册，宁开桂编，中国农业科技出版
4、社，1993。3畜禽营养与饲料学技能教程，宋金昌等编，中国农业科技出版社，1999。4饲料生物学评定技术，中国饲料工业协会、中国农业科学院饲料研究所编，中国农业科技出版社，1996。5饲料质量分析检验，夏玉宇、朱丹编，化学工业出版社，1994。6.http:/ http:/ http:/ http:/ 动物营养实验基础一、药品的规格、合理使用和管理1、规格（见表1；详细的见附表3）表1 药品的规格等级1级2级3级4级符号G.RA.RC.PL.R纯度级别优级纯分析纯化学纯实验室用标签颜色绿色红色蓝色蓝色纯度最高次之更次之最差用途精密分析基准物质、分析一般定性、化学分析一般化学实验另外还有光谱纯试
5、剂、生物试剂、指示剂、层析用试剂等，有各自的要求。2、合理使用一个实验室内同一种化学药品应具备各种规格，以便按需使用，纯度低的不能代替纯度高的，否则影响实验精度；如果可以使用纯度低的，不用纯度高的，节约实验成本。另外，实验室还需准备一些工业试剂，如配制洗液，干燥用硫酸，酒精灯用酒精等。3、保管1）化学药品均应装于蜡封口的玻璃瓶或塑料瓶中保存，遇光分解的物质，应保存于棕色瓶中，放于暗室内；2）固体、液体、挥发性、易燃易爆试剂应分别放置，毒品应有专人专柜保管；3）化学药品在药品柜中要按一定的顺序排列，以便取用、查找方便，最好按照英文字母顺序排列；4）放置化学药品的库房应干燥、阴凉、无阳光直射。放置
6、有挥发性试剂的库房应特别注意通风良好，应有灭火设备。二、烘箱等加热仪器的使用方法注意升温的控制方法，应先将温度定在需要温度的80%左右，最初升温会超温，等温度下降到暂定温度并控温，然后将温控调到需要温度，最好是分多次控温后调到需要温度。三、容量器的使用和校正（重复做两次）目的：掌握容量器的使用和校正方法。主要有滴定管、移液管和容量瓶原理：称量容量器中所容纳水的重量，结合水的密度（表2）计算出容量器的实际容积。表2 水的密度表温度（）密度（g/L）温度（）密度（g/L）温度（）密度（g/L）10998.3917997.6524996.3811998.3218997.5125996.1712998
7、.2319997.3426995.9313998.1420997.1827995.6914998.0421997.0028995.4415997.9322996.8029995.1816997.8023996.60几个概念标准温度：量器的容积与温度有关，规定一个共同的温度293K。标称容量（293K）：量器上标出的标线和数字。量器的容量允差（293K）：允许存在的最大差值。校正要求：容、量器有一定的允许偏差，如果偏差在允许偏差范围内，则不必校正。见表3和表4。表3 滴定管、移液管（量器）的允许偏差范围表容积（mL）滴定管（mL）移液管（mL）50.010.01100.020.02250.030
8、.04500.050.051000.100.08表4 容量瓶的允许偏差范围表容积（mL）255010025050010002000允许偏差（mL）0.030.050.100.100.150.300.501、滴定管的使用和校正1）使用：准备、洗涤（内壁不挂水珠）、涂油(滴定管活塞涂油的量要合适，活塞不能漏水，但也不能涂多。若出现凡士林堵塞管口，轻则用针通，重则用洗耳球吸放热洗涤液的方法疏通，再洗至纯水后使用)、检查是否漏水(练习纯水自然流出，待液面降到10mL以上约5mm处，等30S后10S内调整至10mL的操作)、读数(准确)；（特别注意洗涤酸式滴定管时一定要从其下面放出洗液或水）活塞涂油时要
9、注意：（1）活塞、活塞槽用软纸擦干；（2）滴定管（包括活塞槽部分）平放在桌上；（3）凡士林量合适：在活塞的两头涂以少量，或在孔的两边沿圆周涂一薄层（不涂孔）；（4）活塞插入活塞槽后向同一方向转动，直到全部透明，操作时滴定管平放在桌上；（5）涂凡士林合适后，套上橡皮筋或橡皮圈，防止活塞落地打碎。活塞操作方法：（1）左手的无名指、小指放在活塞下尖嘴管的左边；（2）中指和食指拿活塞柄的两端，大拇指邦忙；（3）手腕稍向上抬（1）、（3）的操作使活塞小头不与手掌接触，避免顶松活塞而漏水；（4）转动活塞时稍向里扣，避免活塞松动而漏水，但不能扣得过分，否则转动困难。控制加液速度：控制手转动的程度和速度可控制
10、加液速度准确读数：（1）滴定管垂直：用右手大拇指、食指拿滴定管上部无刻度处，让其自然下垂；（2）视线与弯面以最低点成水平；（3）读至0.01mL(实际读到0.05就可以的)。50mL滴定管的读数可准确至( 0.1ml )（估读到0.01ml）,滴定时,为使测量的相对误差小于0.1%,滴定消耗体积须大于( 10ml )2）校正：在50mL滴定管中，装满蒸馏水并调节至刻度0处，放出一段水于已知重量的铝盒中，记录读数，称重。再放出一段水于同一铝盒中，再称重，如此逐段放出和称重，直到刻度50处为止。由各段水重除以实验温度时水的密度，就可以求出滴定管每一段的真实容积。以滴定管读数为横坐标，总校正值为纵坐
11、标，将所得结果绘成曲线，便于查阅。见表5。 表5 记录示例表滴定管读数读数容量（mL）瓶与水重（g）水重（g）真正容量（mL）校正值（mL）总校正值（mL）10.1010.1039.2810.0810.12+0.02+0.0220.079.9749.199.919.95-0.020.0030.1410.0759.2610.0710.10+0.03+0.0340.1710.0369.249.9810.01-0.02+0.0150.009.8379.079.839.86+0.03+0.04校正曲线绘制（略）*注意：（1）分段校正滴定管时，滴定管每次放出的纯水体积不一定是整数，但尽量接近于整数10.
12、00mL，20.00mL；（2）读数准确；（3）不能超过50.00mL*校正时，外壁不能有水。校正前擦净外壁的水，校正中若手、外壁有水应擦净。内壁有水，对测定没有影响。*旋开活塞任水自然流出，要待液面降到10mL以上约5mm处，关闭活塞等30S后，在10S内调整至10mL（这是规定的滴定管等待时间，使残留在内壁上的水相等）。*若放水超过50mL，重新装水至40mL，校正4050mL段*处理滴定管下端的悬滴:（1）初读前的悬滴去掉；（2）校正时，加10mL水的锥形瓶称量后发现滴定管下端有悬滴，则靠在锥形瓶内壁，继续进行下一段的校正；（3）滴定管下端有悬滴，白瓷板上有少量水，则靠去悬滴，擦去白瓷板
13、上的水，滴定管重新读数记录后，进行下一段的校正；（4）白瓷板上水多，这说明活塞漏水严重，滴定管须重新涂油，检漏后再进行校正。2、移液管的使用和校正1）移液操作规范：特别注意液面的调节，（1）微松食指使液面缓缓下降，才能控制液面随需而停；（2）眼晴视线与液面水平，液面最低点与刻线相切。溶液自然流出后，等待15S。2）校正：用移液管吸取蒸馏水至刻度处，放于已知重量的铝盒中，称重，计算真实容积，偏差如果不在允许范围内，则需校正。例如：如果真实容积小于规定容积，说明刻度线偏下。贴方格纸于刻度上方，再装水到一定位置（方格的格数），然后放出水，再称重，计算容积，求出每一格所代表的水的容积，在规定容积的方格
14、处标上记号。如果真实容积大于规定容积，说明刻度线偏上，相似的方法。3、容量瓶的校正直接称量法：将要校正的容量瓶清洗、烘干，称重；将室温（室温1小时以上）的蒸馏水注入容量瓶，定容，称重；测定水温，查该水温下的密度，计算体积是否与容量瓶一致；若不一致，根据体积和密度在已知重量的容量瓶中秤水的质量；在校正体积的液面（下）贴一圈纸条涂蜡，用针在纸条上划圈，涂上氢氟酸，几分钟后洗去氢氟酸，除去纸条和石蜡，就有新刻度；重复的做法，取平均值，算出体积，标允差。间接称量法：取一只容量大于被检量器的空容器，放在天平上进行空秤量平衡；准备检定用的纯水或蒸馏水，检查水温与室温之差，应小于2 ；将检定用的水注入被检量
15、器中，到达标定线后倒进空容器中进行称量，得到纯水的质量值m0；用温度计测量水温t，参照规程附录求其质量值m 按公式式计算被检量器在20时的实际容量。四、实验室常用洗涤剂的配制1.铬酸洗液15g研细的工业用重铬酸钾或重铬酸钠用水湿润后，溶于500mL工业用浓硫酸中。保存在加塞的密封玻璃瓶中，可除去玻璃仪器的油污和有机物，可以反复使用（当颜色变绿时，说明被还原成三价铬离子的硫酸根络合物，表示已经失效，必须重新配制）。使用时要防止该洗涤液与有机溶剂接触。2.碱醇洗液120g粗氢氧化钠或氢氧化钾溶于120mL水中，用酒精（燃烧用）冲到1000mL，混匀备用。可除去油脂类污垢。四、指示剂的配制（一般是有
16、机溶剂配置，常用95%的酒精）1、0.1甲基红乙醇指示剂0.1g甲基红+100mL95乙醇。称取0.2000g甲基红；在玛瑙研钵中研细，倒入一定量的酒精，研磨后，将上清液过滤到200mL容量瓶中，反复几次，直到研钵中的甲基红全部冲入容量瓶。注意：过滤是防止杂质和没有研细的颗粒进入，影响浓度，然后用酒精冲洗滤纸3次，最后定容。2、0.5溴甲酚绿乙醇指示剂0.5g溴甲酚绿+100mL95乙醇。配法同“1”。3、0.05%甲基橙指示剂0.05g甲基橙溶于100mL蒸馏水中。配法同“1”。4、0.5%酚酞乙醇指示剂0.5g酚酞溶于100mL95乙醇。配法同“1”。五、标准溶液的配制1、配制1）直接法：
17、溶质为基准物质在分析天平上准确称取一定量的已经干燥的基准物质，溶于水，转入已经校正的容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀即可。*作为基准物质的条件：纯度在99.99以上；组成与化学式完全相符；稳定性好，不易吸水，不易被空气氧化等；物质的量大，可以减少称量误差。*常用的基准物质有（详细的见附表1）：邻苯二甲酸氢钾、草酸钠、硝酸银。2）标定法很多物质不符合基准物质的条件，如浓盐酸中的氯化氢很容易挥发；固体氢氧化钠很容易吸收空气中的水分和二氧化碳；高锰酸钾不易提纯等。这些物质不能直接配制标准溶液，可以使用标定法来配制，具体方法为:先用这些物质配制成近似所需浓度的溶液，再用基准物质标定其准确浓度。即准确称取
18、一定量的基准物质，溶于水后用待标定的溶液滴定，至反应完全，根据所消耗的待标定溶液的体积和基准物质的质量，计算出待标定溶液的准确浓度。标定要同时作23个平行，取平均值。2、常用标准溶液 标准溶液要保留4位有效数字，要参与计算或保持严格的反应环境，因此配制浓度一定要准确，下面1）、2）是直接配制标定的，参与计算的就这样配；有些标准溶液的浓度要求很严格，前面的方法几乎达不到，因此要配制标定浓度大的标准溶液，然后再稀释到特定浓度，如3）、4）。1）0.02 mol/L盐酸溶液：浓盐酸的含量36%，比重1.18，分子量36.5，根据容量瓶的体积计算取样配制粗溶液。再用碳酸钠或碳酸氢钠基准物质标定，或者用
19、碱标准溶液标定。2）0.05mol/L高锰酸钾溶液：称取高锰酸钾约1.6g，溶于1000mL蒸馏水中，煮沸10分钟，冷却，静置过夜，用玻璃丝过滤（最初的数滴废弃），保存于棕色瓶中。标定时将分析纯草酸钠约10g，130烘1h后，放在硫酸干燥器中冷却，准确称取3份草酸钠，每份重0.1g，放在两个250mL的三角瓶中，各加入50mL蒸馏水，再加1：3的硫酸溶液10mL，加热到7585，用配制的高锰酸钾溶液（酒精灯保温）滴定至出现淡红色，半分钟不褪色为好，滴定完后，溶液温度应该仍在60以上。同时做试剂空白实验。注意：KMnO4溶液可用还原剂作基准物来标定。H2C2O4 .2H2O、Na2C2O4等都可
20、用作基准物。其中草酸钠不含结晶水，容易提纯，是最常用的基准物质。浓度的确定：配制0.05M的溶液，称取1.6g（1摩尔是158.03g，反应中Mn由正7价转变为正2价，转移5个电子，配制时计算高锰酸钾的量=158.03*0.05/5=1.58g1.6g）溶于1000ml 水中，然后标定。标定的条件：温度：在室温下此反应的速度缓慢，因此应将溶液加热至75-85；但温度不宜过高，否则在酸性溶液中会使部分H2C2O4发生分解。酸度：溶液保持足够的酸度。一般在开始滴定时，溶液的酸度约为0.5-1mo1/L。滴定速度：滴定开始时，加入的第一滴KMnO4溶液褪色很慢，所以开始滴定时滴定速度要慢些，在KMn
21、O4红色没有褪去以前，不要加入第二滴。等几滴KMnO4溶液已起作用后，滴定速度就可以稍快些，但不能让KMnO4溶液像流水似地流下去，否则加入的KMnO4溶液来不及与C2O42-反应，即在热的酸性溶液中发生分解。应用示例：钙的测定 Ca2+ + C2O42- = CaC2O4 (碱性) +酸 C2O42-2MnO4- + 5C2O42- + 16H+ 2Mn2+ + 10CO2 + 8H2O3）0.1275mol/L（1.25%的酸）硫酸溶液（测定样品中粗纤维）：理论值是7mL浓硫酸稀释至1000（浓硫酸加入水中，切忌相反）；也可以先配成浓的硫酸溶液再稀释成所需浓度，然后再标定。用已经标定好的氢
22、氧化钠溶液标定，指示剂为甲基红，当溶液由黄色变成橙红色即为终点。但实际很难配制到要求的浓度，只能先配制浓度高的硫酸标准溶液（如2或3M）,标定后再稀释要求浓度的稀标准溶液。3）0.313mol/L（1.25%的碱）氢氧化钠溶液（测定样品中粗纤维）：首先粗配浓度高的氢氧化钠溶液（如3M）。然后根据溶液的大致浓度确定称量（滴定是20-30 mL）邻苯二甲酸氢钾（先在100105烘1小时，干燥器中冷却30分钟），加入蒸馏水100mL，用酚酞作指示剂，用氢氧化钠溶液滴定，当无色变为淡红色即为终点，计算其标准浓度。再稀释成需要浓度。3、标准溶液配制、标定及使用注意事项* 酸标准溶液和碱标准溶液的配制和标
23、定必须在无酸气和无氨气的环境中进行；* 盛酸标准溶液的玻璃瓶用严密玻璃塞塞好，盛碱标准溶液的玻璃瓶用橡皮塞塞好，高锰酸钾标准溶液需装于棕色玻璃瓶中，保存于不见光的柜中；* 标准溶液必须放置于阴凉而空气清洁的实验室；* 标准溶液取用前，必须使劲将瓶中的溶液摇匀。使瓶颈上的水汽与溶液混匀；* 标准溶液倒出后，切勿倒回原瓶；* 盛标准溶液的玻璃瓶上必须贴上标签，写明标准溶液的名称、浓度、标定日期以及标定者姓名；* 标定过程中加入的指示剂量，不能超过必需之量，以保证有一鲜明变色；* 标准溶液的有效日期：即标定过的标准溶液过一定时间后需重新标定。几种标准溶液的有效日期如下： 各种酸溶液（各种浓度）：3个
24、月 氢氧化钠溶液（各种浓度）：2个月 高锰酸钾溶液（0.05mol/L）：1个月硝酸银溶液（0.10mol/L）：3个月* 标定时，基准物质的取量应依据最后的滴定量所决定。一般最后的滴定量在20mL30mL之间为宜，则基准物质的取量（g）25*C待标定溶液*MB（基准物质的毫物质的量）标定酸碱的基准物质见附表1。第二章 饲料样品的采集与制备一、样品的采集1、目的样品的采集与制备是评定饲料营养价值关键的第一步骤，采样比分析更为重要。采样的目的就是使样品具有代表性。2、要求1)具有足够的代表性 样品的代表性直接影响分析结果的正确性，由生产现场和试验场等大量的分析对象中采集的部分样品，其组成成分必须
25、能代表整个分析对象的平均组分，如果样品不能代表整批分析物料，那么无论分析多少个样品的数据，其意义都不大。2)分类采样 评定饲料营养价值需采集的样品较多，有来自饲料原料，配合饲料，畜禽粪尿，畜产品，微生物等方面。因分析的目的不同又可分为不同样品，分析对象的均匀性质不同，也应分类采样。3)保证样品的稳定性 分析前样品的前处理操作，应保持样品的稳定性。严防样品变质，水分含量的变化及强烈光照等影响。避免样品受虫蛀，霉菌或细菌的污染，新鲜饲料的自身呼吸等影响。因此，采样后应立即称重，置于密闭的容器里或塑料袋中，并尽快测定干物质和水分含量。4)均匀性 样品要保证性质均匀一致，以防部分损失，如，采集干草类饲
26、料，应避免叶子的脱落。5)新鲜性 测定维生素、氨基酸的样品应用新鲜样，即鲜草是刚刈割采样的；青贮饲料用刚出窖的；谷实糠麸类用未经加工处理的样品。6)时间性 在进行常规成分分析时，一般应在两周之内分析完毕。否则，样品会因吸水或失水，霉变等影响分析结果。7)采样记录 采样后要及时记录样品名称、采样地点、规格型号、批号、产地、采样部位、采样人、采样日期、生产厂家名称及详细通讯地址等内容。8)采样人员 采样人员责任性要强，业务熟练，能按照国家标准进行采样，采样人员要严格按操作程序进行采样。9)采样工具 采样工具包括手动或自动，要正确地设计和安装，制作工具的原料要耐磨损而且应是不易损坏的材料。3.样品的
27、分类1)按采样、分析和检验过程分类 按照采样、分析和检验过程通常将样品分为以下三类：原始样品：在生产现场如田间、牧地、仓库、车间、青贮窖、试验场等大量的分析对象中采集的样本。数量一般不少于平均样品的8 倍。平均样品：从原始样品中平均地分出一部分样品，供实验室全面地分析品质之用的样品。其数量一般不少于1.0 kg 。试验样品：从平均样品中地分出一小部分样品，供实验室分析一项或某几项品质之用的样品，简称试样亦称分析样品，其数量根据检验项目和分析方法而定。2)按样品的不同用途分类 按照样品的不同用途，在实践中把各类样品分类如下：核对样品：是指把同一个样品分为若干份样品后，再分别送往各个实验室分析测定
28、，根据化验结果的方差来核对某一测定方法的准确性。混合样品：把来自同一个批货物（如一船、一车皮等）的多个样品混合以后，用来定这批货物的平均组成成分 。单一样品：采自一小批货物料的物品，用于分析该批物料的成分变异或混合均匀度等。平行样品：将同一个样品也分为二，分别送往两个不同的实验室进行分析测定。常用来比较两个实验室之间分析结果的差异。官方样品：指有政府采取的样品。常用于制定规格。商业样品：是指由卖方发货时，一同送往买方的样品。仲裁样品：指由公正方采样员采取的样品，然后送往仲裁实验室分析化验，以有助于买卖双方在商业贸易工作中达成协议。参考样品：指具有特定性质的样本，在购买原料时可作参考比较，或用于
29、鉴定成品与之有关的颜色、结构、及其他表现特征上的区别。备用样品：指在发货后留下的样品，供急需时备用。标准样品：是由权威实验室仔细分析化验后的样品。如再有其他实验室急需分析化验，可用标准样品来校正或确定某一测定方法或某种样品的准确性。化验样品：亦称“工作样品”，指送往化验室或检验站分析的样品。4.采样的方法1)基本方法采样的基本方法有两种：几何法和四分法。几何法：是指把整个一堆物品看成一种有规则的几何形状（立方体、圆柱体、圆锥体），取样时首先把这个主体分为若干体积相等的问部分，从总样部分中取出体积相等的样品，这部分样品称为支样，再把支样混合，即得原始样品。四分法：（1）散装颗粒或粉状饲料或原料的
30、采样仓装按面积分区，按高度分层，每区不超过50平方米，分为5点。料层0.75米，取三层，上（1015）、中、下（20）料层0.75米，取二层，上、下园仓按高度分层，每层按仓直径分内（中心）、中（半径的一半处）、外（距仓边30）三圈。直径8米，每层分别设1、4、8共13点采样。（2）袋装中小颗粒料如玉米、大麦抽样的袋娄不少于总袋数的5%，粉状饲料抽样的袋数不少于3%，也可以根据计算得出。表2.1-1 袋装饲料采集方案饲料包装单位取样包装单位（袋）10个以下每袋取样1010010袋100以上10袋为基础，每增加100个，多取3个包装单位编织袋 内衬塑料袋或纺织袋采用拆线法 粉料 颗粒料2)饼粕类大
31、块：1吨至少取5块；小块：10块捶碎混合四分法500g。3)青、粗饲料（1）青贮将表面50的青贮料除去，通过四分法缩至5001000g。井型窖沟式窖（2）干草和秸秆至少5个部位采样点，每点取200g左右，由于叶子易脱落，应尽量避免，将原始样放在纸或塑料上剪成12cm长，充分混合取分析样品300g，粉碎过筛，切不可随意丢弃某部分。（3）牧草天然牧草：划区分点采样，每区取5点以上，每点1m2范围，离地面34割草，除去不可食部分，将原始样品剪碎，混合取样5001500g。草地及田间采样示意图栽培牧草：每点采1至数株、切碎后取样分析。4)块根、块茎瓜果类各部位随机抽取样品15kg，按大、中、小分别称重
32、求出比例，按比例取5公斤水洗（不损伤外皮）拭去表面水每个块根进行纵切为，直至适量的分析样品（500g左右）。5)糟渣类采取多点分层取样与颗粒或粉状饲料相同（分三层，每层取510点），每点100g，水分含量高的样品如豆腐渣、粉渣等要特别注意汁液的流失。将各点随机抽取的样品充分混合后，随机取分析样品约1500g，并将其制成风干样。6)液体或半固体饲料（1）桶装采样表2.1-2 采样方案样品数量采样数量7桶以下不少于5桶10桶以下不少于7桶1050桶不少于10桶51100桶不少于15桶100桶以上不少于15%的总桶数采样每桶应取3点，取样前应混均。（2）散装的采样分三层，上层距液面4050，下层距池
33、底4050处，三层采样数的比例为1:3:1（卧式液池），车槽为1:8:1，采样数量规定如下 ：表2.1-3 采样方案样品数量采样数量500吨以下1.5kg50001000吨2.0kg1000吨4.0kg将原始样品混合，分取1kg作为平均样品备用。7)动物性饲料用采样器分点采样，或按照样品的堆放形状选几何点采样。五.样品的制备样品的制备是对采集到的样品分取、粉碎、混合、装瓶等过程。制样的目的是保证样品的均匀性，二、样品的制备制样的目的：样品的制备是对采集到的样品分取、粉碎、混匀、装瓶等过程。样品制备的目的是保证样品的均匀性。使得分析样品时取任何部分都能代表被测组分的全部性质，确保分析结果的准确性
34、。样品制备时注意不应造成待测成分的损失或污染，不应带来干扰物质。制样的仪器设备：粉碎机、碾槽、研钵、筛子等。 风干样品的制备：主要内容为制样过程和方法。风干法（没有烘箱或样品太大时）：采样后先称重，然后阴干（薄层，防止发霉），直至重量不变时称重。 半干样品的制备（初水分测定）*烘干不回潮法：在洗净、烘干并已知重量的磁盘中称200g300g的鲜样，放入100130的烘箱中烘15分钟灭酶（防止酶分解），然后迅速将磁盘转移到6070烘箱中烘812小时，在室温下冷却30分钟，称重，再烘2小时，称重，直至恒重（0.5g）。*烘干回潮法：在洗净、烘干并已知重量的磁盘中称200g300g的鲜样，放入1001
35、30的烘箱中烘15分钟灭酶（防止酶分解），然后迅速将磁盘转移到6070烘箱中烘812小时后，放于室内24小时，充分回潮后，再称重，再放入6070烘箱中烘2小时，充分回潮后，再称重，直至恒重（0.5g）。 样品的粉碎粒度：常规饲料营养成分分析要求过40目筛（0.45mm），但粗纤维除外，粗纤维GB/T6434-94要求过18目筛（1mm）。三、样品的登记与保管样品的来源、采集时间等等。第三章 饲料营养成分分析一、饲料干物质（水分）的测定原理：样品在105烘干，烘掉吸附水，其原因是非游离的水分在100以下不能烘干。半干（风干）样品干物质吸附水100105但是象水果和糖类等含糖多的样品不宜在105烘
36、，因糖在高温时容易分解，尤其是果糖。所以测定含糖多的样品时都采用减压低温烘箱干燥法，用烘干法测定的水分中还包括有少量芳香油、醇及有机酸等物质。步骤：盛样器的处理：（铝盒）洗净，在105烘箱中烘1h，干燥冷却30，称重。称样：在已经恒重的盛样器（铝盒）中准确称取2g左右（准确至第四位小数点后）样品，放入105烘箱中烘56h，干燥冷却30，称重，再恒重（称后马上放入105烘箱中再烘1h，干燥器中冷却30后称重，两次称重的误差在0.002g即为恒重，要是超出要求误差，重复，直到恒重）。注意：不同样品所需的时间和条件不同。如粮食可以在130烘1h，结果与105烘4h一样；而鲜果和糖必须在50100mm
37、汞柱的减压烘箱内干燥。测定粘稠品，如蜂蜜、油脂等的水分时，可以采用1：1盐酸浸后洗净的大粒砂子掺入样品中，并用玻璃棒在烘干的时候时常搅拌，才能得到好的结果。用减压低温测定水分的时间比空气烘箱烘的时间长，一般第一次都在10h以上。平行样品的测定值相差不得超过0.2，否则应重做。二、饲料样品中粗灰分测定原理：待测样品在550600高温条件下有机物灼烧掉，剩下的为无机物，主要是氧化物和盐类还有砂石等杂质，称粗灰分，如下图。半干（风干）样品粗灰分有机物550600步骤：坩埚的处理：将坩埚洗净，在105的烘箱中烘干，然后在550600高温炉中灼烧30分钟，待高温炉的温度降到200后将坩埚取出，置于干燥器
38、中冷却30分钟，称重，直至恒重（0.001g）；样品的处理过程：称样2g左右（准确至1/10000或0.0001 g）于已知重量的坩埚内；炭化；在550600的高温炉中灰化56小时；降温；干燥器中冷却30分钟；称量；恒重（恒重时，两次的称重误差在0.001g）。注意：在坩埚上编写号码时用0.5的氯化铁墨水溶液（0.5g FeCl36H2O溶于100ml蓝色墨水中），编号经灼烧后由蓝变红，成永久号。灰化时间46小时，主要由坩埚中灰分的颜色决定，而不是固定的。应该全部为白色为好，如果是灰白色，则说明有碳质，还须继续灼烧；如果是红色，说明含有铁，如果是蓝色，说明含有锰，不须再灼烧；灼烧温度不得超过6
39、00，否则磷酸盐会熔化，凝结为固形物，其中所含的碳粒不易氧化。温度过高，钾、氯等元素也能挥发，使所得的结果产生误差。粗灰分含量在5以上时，允许相对偏差为1；在5以下时，允许相对偏差为5。三、饲料粗蛋白质测定原理：饲料中的有机物在催化剂的作用下，用浓硫酸消化使其中的氮转化为氨气，并被浓硫酸接收转化的硫酸铵。然后消化液在浓碱中反应放出氨气被硼酸溶液接收，并转化为四硼酸按，然后以甲基红和溴甲酚绿为指示剂，用盐酸标准溶液滴定，根据盐酸溶液的用量求出氮含量，再转化为粗蛋白的量。步骤：消化：称取0.50.8g（准确至0.0001g）样品装入消煮管中，然后加入按比例混合好的无水硫酸钠和硫酸铜的混合物2.6g
40、左右（无水硫酸钠2.5g+硫酸铜0.13 g，约一牛角勺），玻璃珠两粒，再加入浓硫酸10ml，将消煮管放在消煮炉上进行消化。开始时将温度调到100左右，待泡沫停止产生以后，再将温度调到300以上，直至消煮管中的液体澄清（消化时应经常转动消煮管）。消化完毕后，将消煮管冷却，加入蒸馏水，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗消煮管数次，转移到同一容量瓶中，定容，同时应做空白。蒸馏：在三角瓶中，加入10ml 1的硼酸溶液，再加入甲基红和溴甲酚绿指示剂各一滴，将三角瓶置于冷凝管下，管口浸入硼酸溶液中。然后在反应室中加入40或50的氢氧化钠溶液，蒸馏3分钟，冷凝管口离开液面再继续蒸馏1分钟，蒸馏结束取下
41、三角瓶时用蒸馏水冲洗冷凝管口外壁。滴定：用约0.02mol/L的盐酸溶液滴定，记录盐酸的用量。样品的取量，根据样品中粗蛋白质的含量（平均含量，查表可知）确定，见表6。 表6 饲料中蛋白测定时定容量、蒸馏量与盐酸标准溶液用量的估计风干样品中CP(%)样品取量（g）消化液冲淡量（ml）蒸馏消化液取量（ml）滴定盐酸预期量（ml）1100.5250200.44.410200.2250202.24.420400.2250102.24.440700.2500102.24.470900.2500102.94.0注：上表中的数据均按样品取量0.5g,消化液稀释量100ml，消化液取量10 ml，请倒换滴定是盐酸的用量？催化剂及其作用：无水硫酸钠（或无水硫酸钾）的作用