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1、期刊文献血吸虫感染小鼠及家兔抗Sj23kDa膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)的抗体IgG应答模式及其免疫诊断价值张伟，王玠，余传信*，宋丽君，殷旭仁，钱春艳，沈双，金一，柯雪丹，姚媛，高玒，许永良，杨静寄生虫病预防与控制新技术研发室，卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室，江苏省血吸虫病防治研究所，无锡，214064，中国摘要 目的 探讨日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段（Sj23HD）的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法 构建血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物，采集尾蚴感染前，感染后、治愈后各不同时间点小鼠及家兔血清。以酵母表达的纯重组S
2、j23HD蛋白为抗原，通过间接ELISA方法，检测感染前、感染后与治愈后不同时间点血吸虫感染小鼠和家兔血清中抗Sj23HD抗体IgG应答水平的动态变化，观察Sj23HD在小鼠及家兔的抗体反应应答模式及其疗效考核潜能。同时，通过间接ELISA方法，以Sj23HD-HSA融合蛋白分别检测132份血吸虫、30份肝吸虫、10份肺吸虫、以及80份健康人血清样本，观察该重组抗原用于血吸虫病诊断的价值，并将抗可溶性虫卵抗原的抗体应答反应作为对照。结果 血吸虫感染小鼠及家兔体内抗Sj23HD蛋白的抗体反应呈短寿抗体反应应答模式，抗Sj23HD抗体IgG反应随着感染时间的延长呈上升趋势，治愈后的初期继续上升，至
3、治疗后2-4w达到最高水平，随后逐渐下降，至治疗后16周，部分小鼠、家兔的抗体水平可达到阴性阈值，但下降幅度存在个体差异。抗SEA抗体水平在治疗后有轻度下降的趋势，而未治疗小鼠、家兔血清中抗Sj23HD、SEA的抗体反应均无明显下降。重组Sj23HD -HSA和SEA检测132基金项目 国家自然科学基金(30972581)；江苏省自然科学基金（BK2008110）；国家重大科技专项（2008ZX10004-011）；江苏省卫生厅科技项目（H201066）；江苏省血地寄项目（X201115）；江苏省预防医学项目（YZ201030） ；作者单位 江苏省血吸虫病防治研究所新技术研究室（无锡 2140
4、64）； 作者简介 张伟，男，硕士研究生。研究方向：寄生虫病免疫诊断王玠，女， 助理研究员。研究方向：血吸虫病分子免疫与诊断* 通信作者：; ; 为共同第一作者。份血吸虫病人血清，阳性率分别为88.64%和97.73%；检测10份肺吸虫病人血清，交叉反应率为50%和90%；检测30份肝吸虫病人交叉反应为0%和16%；检测80份健康人血清，均无交叉反应。结论 本研究证明血吸虫感染小鼠、家兔血清中抗Sj23HD蛋白的抗体反应为抗原依赖的短寿抗体反应，检测参与这一特异性短寿抗体反应的抗体具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能。与SEA相比，重组Sj23HD蛋白用于血吸虫病诊断具有较好的特异性，但对于来自肺吸
5、虫流行区的患者仍需注意鉴别诊断。关键词 日本血吸虫；23kDa膜蛋白大亲水肽段；短寿抗体反应；免疫诊断；疗效考核 The antibody response pattern of Sj23HD in mice and rabbits infected with Schistosoma japonicum and immunodiagnostic valueZHANG Wei, WANG Jie, YU Chuan-xin*, SONG Li-jun, YIN Xu-ren, QIAN Chun-yan, SHEN Shuang, JING Yi, KE Xue-dan, YAO Yuan, G
6、AO Hong, XU Yong-liang, YANG JingDepartment of Novel Biotechnology of Parasitic Disease Prevent and Control, Jiangsu Institute of Parasitic Diseases; Key Laboratory on Technology for Parasitic Disease Prevention and Control, Ministry of Health, Wuxi 214064, China* Corresponding author, These authors
7、 contributed equally to this work.【Abstract】 Objective To investigate the antibody response pattern of the large hydrophilic doman of 23 kDa membrane protein in mice and rabbits infected with Schistosoma japonicum, and observe the value of immunodiagnosis and evaluating chemotherapeutic effect of th
8、e recombinant fusion protein of Sj23HD-HSA for schistosomiasis japonica. Methods The sera of mice and rabbits infected with Schistosoma japonicum before infection, during infection and after cure with PZQ at different time were prepared. To observe the antibody response pattern of Sj23HD in mice and
9、 rabbits infected with Schistosoma japonicum and the potential of evaluating chemotherapeutic effect of schistosomiasis, the dynamics of antibody response against Sj23HD before infection, during infection and after cure with PZQ at different time were detected by indirection Enzyme Linked Immunosorb
10、ent Assay (ELISA). Meanwhile, to evaluate the immunodiagnostic value of recombinant Sj23HD-HSA, sera of 132 schistosomiasis, 30 clonorchiasis, 10 paragonimiasis, 80 healthy were detected by indirection ELISA with recombinant Sj23HD-HSA. For experimental control, the antibody IgG against soluble egg
11、antigen (SEA) in sera was detected by the same indirection ELISA in the same time. Results The antibody response against Sj23HD rose along with the infection duration extension, and enhanced continually to peak in 2-4w post PZQ treatment, then declined gradually, the level of antibody response of pa
12、rtial mice or rabbits reached the negative cut off value at 16 w PZQ post treatment, but the decline extent of antibody response in different individuals was different. There was a slight decline of antibody response against SEA in mice and rabbits of treated group, but no decline of antibody respon
13、se against Sj23HD and SEA in mice and rabbits of untreated group. The positive rate of antibody IgG against Sj23HD-HSA or SEA in 132 schistosomiasis sera was 88.64 percent or 97.73 percent respectively; The cross reaction rate of antibody IgG against Sj23HD-HSA or SEA in 10 paragonimiasis sera was 5
14、0 percent or 90 percent respectively and in 30 clonorchiasis sera was naught percent or 16 percent respectively; No false positive of antibody IgG against both Sj23HD-HSA and SEA in 80 healthy sera was found. Conclusion The antibody response pattern of Sj23HD protein in mice and rabbits infected wit
15、h Schistosoma japonicum is shorted lived antibody response. It is potent by detecting the antibody involved in this short lived antibody response against Sj23HD-HSA for diagnosis and evaluating chemotherapeutic effect of schistosomiasis japonica. Compare to SEA, the recombinant Sj23HD-HSA is more sp
16、ecific for schistosomiasis diagnosis, but for patients from the endemic area of paragonimiasis, it is still need to pay attention to distinguish with other parasitic diseases.Keywords Schistosoma japonicum; Large hydrophilic domain of 23kDa membrane protein; Short lived antibody response; Immunodiag
17、nosis; Evaluation of chemotherapeutic effect系列的研究结果表明，日本血吸虫23kDa膜蛋白分子（Sj23）的血清抗体水平与患者体内血吸虫成虫虫荷量呈相关性，检测这一抗原特异性抗体具有高度的特异性，具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能1-2。这些研究成果提示血吸虫病患者体内抗Sj23分子抗体IgG的产生是抗原依赖的，抗体水平随体内Sj23含量变化而变化，呈短寿抗体反应特征。为验证上述设想，本研究在前期采用酵母外分泌表达技术，在制备了纯化的重组日本血吸虫23kDa膜蛋白分子大亲水肽段（Sj23HD）分子的基础上，进一步观察了血吸虫感染模型小鼠及家兔体内治疗与不
18、治疗小鼠体内抗Sj23HD蛋白抗体IgG水平的动态变化，证实了其反应模式为短寿抗体反应，为进一步发展高效的检测参与短寿抗体反应抗体的血吸虫病诊断与疗效考核方法提供了实践依据。材料与方法1 材料与试剂1.1 实验动物及抗原体重20 22 g 6W龄ICR小鼠购自扬州大学医学动物中心；血吸虫感染性钉螺由江苏省血吸虫病防治研究所钉螺室提供；纯化酵母表达重组日本血吸虫23kDa膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白（Sj23HD-HSA）和日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）由本室制备，-80 保存。1.2 血清标本血吸虫病人血清来自江西省、湖北省血吸虫病流行区，经SEA-EL
19、ISA、DDIA和粪检均为阳性；肝吸虫病人血清来自广西壮族自治区肝吸虫病流行区，经ELISA和粪检证实为阳性；健康人血清来自无锡市血液中心；兔感染前，感染后、治愈后不同时间点血清样本由本室制备，-80 保存。1.3 试剂硝酸纤维素膜（Nitrocellulose membrane, NC）购自GE公司(美国 )；脱脂奶粉购自Oxoid 公司（英国）；预染蛋白分子量标志物购自Fermentas公司（立陶宛）；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗人IgG(H+L)购自Genescript公司（美国）；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG(H+L)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔Ig
20、G(H+L)购自bethyl公司（美国）；蒿甲醚片剂购自昆明制药集团股份有限公司；吡喹酮购自Sigma公司（美国）；单组分TMB显色底物购自欣博盛生物科技有限公司；SuperSignal West Pico化学发光显色底物购自Thermo Scientific（美国）。2 方法2.1 治疗前、后感染小鼠配对血清的制备将20只6 W龄ICR小鼠分为治疗组（A）和对照组（B）两组，编号A1-A10，B1-B10。A、B两组小鼠在感染前采血。每只A、B两组小鼠经腹部贴片法人工感染20条日本血吸虫尾蚴。感染后35d采血，分离血清。感染后37d，治疗组开始治疗，蒿甲醚300 mg/kg/d（含25%甘油
21、和1%聚氧乙烯蓖麻油的溶剂悬浮，配制21 mg/mL），喂药体积0.5 mL左右（每只35 mg左右），连续灌药2次，每天1次；不治疗组不予药物处理。感染后40d治疗组灌胃吡喹酮，用含2.5%聚氧乙烯蓖麻油的溶剂悬浮吡喹酮，300 mg/kg/d，配制21 mg/mL，喂药体积0.5 mL左右（每只35 mg左右），连续灌药2次，每天1次；不治疗组不予药物处理。治疗后，治疗组和不治疗组同时采血，治疗后前4w内每1w采血一次，随后每2 w采血一次，一直采血到治疗后16w。拉颈处死小鼠，解剖，检查肝脏及肠组织虫卵肉芽肿病变。用3%的柠檬酸三钠和7%的氯化钠溶液经心脏灌注冲虫，观察感染和治疗效果。2
22、.2 感染小鼠血清中抗Sj23HD蛋白抗体水平动态变化用pH9.6碳酸盐缓冲液稀释重组纯化蛋白至 10 mg/mL，以100 mL/孔包被酶标板，4 过夜。然后用PBST缓冲液注满酶标板孔，振荡器振荡30 s后拍干，重复3次。在每孔中加入300 mL 5%脱脂奶粉，37 孵育60 min。PBST洗涤一次后，分别加入1:100稀释的小鼠感染前、感染后及治疗后不同时间的配对血清各100 mL，同时设空白对照，37 反应60 min。PBST洗涤三次后，每孔加入 1：20000稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG二抗100 mL，37 ，60 min。PBST洗涤三次后，加入TMB底物50 m
23、L，室温避光显色约5 min，加入2M H2S04终止反应。酶标仪测定每孔A450nm吸光值，观察治疗组和不治疗组小鼠不同时间点血清抗Sj23HD抗体的水平变化。同时以相同的方法检测小鼠血清中抗SEA的抗体水平作为对照。2.3感染兔血清中抗Sj23HD蛋白抗体水平动态变化研究检测过程同2.2，血清来自感染500条尾蚴的6只新西兰大白兔，其中治疗组4只（R1-R6），不治疗对照组2只（RA、RB）。二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG，工作浓度为1：10,000。同时以相同的方法检测小鼠血清中抗SEA的抗体水平作为对照。2.4 Sj23HD-HSA用于日本血吸虫病人诊断效果分析分别取日本血吸虫病
24、人血清132份，肝吸虫病人血清30份，健康人血清80份，肺吸虫病人血清10份，采用间接ELISA的方法观察重组Sj23HD-HSA融合蛋白检测血吸虫病抗体IgG的敏感性与特异性，同时以SEA检测作为对照。检测过程同2.2，使用的二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG，工作浓度为1：10,000。同时以相同的方法检测小鼠血清中抗SEA的抗体水平作为对照。结 果1 小鼠感染和治疗的效果治疗后16周，解剖小鼠，通过心脏灌注冲虫。发现治疗组小鼠肝脏及肠壁没有明显的虫卵肉芽肿病变，心脏灌注未发现成虫，说明治疗很彻底。图1A。未治疗对照组小鼠肝脏、肠组织有明显虫卵肉芽肿结节，结节很多，呈肉芽肿病变，腹腔中
25、有大量的腹水。心脏灌注发现未治疗对照组有4-6对合抱成虫。图1B。 A 治疗组；B 未治疗组 A Treated group; B Untreated group图1 治疗组与未治疗组小鼠的肝脏、肠壁病变Fig.1 Pathologic changes of liver and intestine tissue of mice of treated and untreated group 2 感染小鼠血清中抗Sj23HD抗体IgG水平动态变化 分别以重组Sj23HD-HSA融合蛋白、SEA为抗原，采用间接ELISA的方法同时检测感染前，感染后（治疗前），以及治疗后不同时间点各小鼠血清中的抗Sj
26、23HD和抗SEA抗体IgG动态水平变化。结果显示，治疗组小鼠血清中抗Sj23HD的抗体IgG水平在治疗后1-2w持续上升，在治疗后2w达到峰值。但随着治疗后时间的推移呈逐步降低的趋势，到治疗后16w部分小鼠抗体水平已接近阴性临界值，但个体之间存在明显的差异（如图2）。未治疗对照组小鼠抗Sj23HD的抗体IgG水平随着时间的推移降低不明显（如图3）。图3 未治疗小鼠血清抗Sj23HD抗体IgG水平动态变化Fig.3 Dynamics of anti-Sj23HD antibody IgG of untreated mice 图2 治疗前、后小鼠血清抗Sj23HD抗体IgG水平动态变化Fig.2
27、 Dynamics of anti-Sj23HD antibody IgG of mice before and after treatment治疗组小鼠血清中抗SEA抗体IgG水平在治疗后4w达到最高峰，随着治疗时间的推移，虽然有降低的趋势，但仍维持较高的水平（如图4），而未治疗组小鼠血清中抗SEA抗体IgG水平随着时间的推移呈逐渐上升的趋势（如图5）。 图4 治疗前、后小鼠血清抗SEA抗体IgG水平动态变化Fig.4 Dynamics of anti-SEA antibody IgG mice before and after treatment图5 未治疗小鼠血清抗SEA抗体IgG水平动
28、态变化Fig.5 Dynamics of anti-SEA antibody IgG of untreated mice 3感染兔血清抗Sj23HD抗体IgG水平动态变化 采用间接ELISA方法同时检测感染前，感染后（治疗前）、治疗后不同时间点血吸虫感染兔血清中的抗Sj23HD和抗SEA抗体IgG水平动态变化，结果显示治疗后兔血清中抗Sj23HD的抗体IgG水平随着治疗后时间的推移呈逐渐降低的趋势，但下降的幅度存在个体差异，部分家兔在治疗后16w已达阴性阈值（如图6）。而未治疗组兔血清中抗Sj23HD的抗体IgG水平随着时间的推移无逐渐降低的趋势(如图7）。图7 未治疗家兔血清中抗Sj23HD
29、抗体IgG水平动态变化Fig.7 Dynamics of anti-Sj23HD antibody IgG of untreated rabbits图6 治疗前、后家兔血清抗Sj23HD抗体IgG 水平动态变化Fig.6 Dynamics of anti-Sj23HD antibody IgG of rabbits before and after treatment 治疗组和未治疗组家兔血清抗SEA抗体IgG水平随着治疗后时间的推移，在观察时间内均未出现逐渐降低的趋势。图8, 9。图8 治疗前、后家兔血清抗SEA抗体IgG水平动态变化Fig.8 Dynamics of anti-SEA an
30、tibody IgG of rabbits before and after treatment 图9 未治疗兔子血清中抗SEA抗体IgG水平动态变化Fig.9 Dynamics of anti-SEA antibody IgG of untreated rabbits 4 重组Sj23HD-HSA融合蛋白的日本血吸虫病人诊断效果分析以Sj23HD-HSA为检测抗原，以阴性对照平均吸光值的2.1倍值为阳性判断阈值，采用间接ELISA检测132份血吸虫病人血清，阳性率达88.64%；检测30份肝吸虫病人血清，交叉反应率为0%；检测10份肺吸虫病人血清，交叉反应率为50%；检测80份健康人血清，假
31、阳性率为0%。同时，以SEA为检测抗原，以相同的方法检测132份血吸虫病人血清，阳性率达97.73%；检测30份肝吸虫病人血清，交叉反应率为16%；检测10份肺吸虫病人血清，交叉反应率为90%；检测80份健康人血清，假阳性率为0%。表1。表1 重组Sj23HD-HSA和SEA检测病人血清抗体IgG效果的比较血清 Serum例数No.Sj23HD-HSA ELISASEA -ELISA阳性Positive阴性Negtive 阳性率(%）Positive rate阳性Positive阴性Negtive 阳性率(%）Positive rate血吸虫病人13211715 88.641293 97.73
32、肝吸虫病人30032 0525 16.67肺吸虫病人1055 5091 90健康人80080 0080 0讨 论早在80年代，Cruise 1和Mitchell2 等通过基于针对日本血吸虫菲律宾株23kDa膜蛋白分子的单抗I-134的竞争抑制放射免疫试验及酶联免疫试验证实了23kDa膜蛋白分子具有血吸虫病诊断价值与疗效考核潜能。这些研究结果显示的抗日本血吸虫23kDa膜蛋白分子抗体IgG水平与患者体内血吸虫成虫的虫荷量呈相关性，体内虫荷量大，则血清中抗Sj23kDa膜蛋白抗体IgG水平高，反之，患者体内虫荷量越少，则抗Sj23kDa膜蛋白抗体IgG水平越低，表现为患者体内抗Sj23kDa膜蛋白
33、抗体IgG水平与Sj23kDa膜蛋白的含量呈一种剂量依赖性的关系。抗日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白(Sj23)大亲水肽段（Sj23HD）抗体具有高度的特异性，并且在血吸虫感染早期即可出现在感染动物血清内，已证实检测抗日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白(Sj23)大亲水肽段（Sj23HD）抗体IgG具有诊断与早期诊断的价值3。但是，日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子在宿主体内诱导的特异性抗体反应模式及其是否具有疗效考核潜能尚有待于进一步深入研究。 抗体反应的产生是淋巴器官中的B细胞受到各种来源的抗原刺激后，分化增殖成能分泌针对刺激抗原的特异性抗体的浆细胞所致（其中一部分B细胞分化为
34、记忆性B细胞），是机体免疫力的一个重要组成部分。有的抗原诱导的抗体反应可长期存在于患者体内，称为长寿抗体反应（Long lived antibody response），有的抗原诱导的抗体反应在患者体内存在的时间则很短暂，称为短寿抗体反应抗体（Short lived antibody response）。抗体反应在宿主体内维持时间的长短是由抗原的性质所决定的。现有的研究成果显示，在体内长期维持抗体水平的记忆机制大致存在三种：1）长寿抗体反应，即抗原诱导B细胞分化成长寿的浆细胞，该浆细胞能长期存活于机体内，不断分泌抗体，甚至能终生维持4-5；2）短寿抗体反应，即抗原诱导B细胞分化为短寿的浆细胞，
35、这种浆细胞在体内存活时间短，当体内持续有抗原或交叉抗原存在，不断刺激记忆性B细胞分化为短寿浆细胞，可持续产生抗体6。这种短寿抗体反应的产生需要抗原的持续性存在，又称为抗原依赖性短寿抗体反应；3）记忆B细胞本身7-8或浆细胞前体9不断以抗原不依赖的方法增加浆细胞的数量，以维持抗体水平，其具体的分子机制还不清楚。抗原依赖的短寿抗体反应虽然不利于产生长期的抗病原体保护性免疫力，但宿主体内抗此类抗原的特异性抗体水平能反映体内抗原（或病原体）的存在与含量，当体内病原体含量减少或消失，这类抗体水平亦会随之而降低或消失，因而可作为现症感染的一种特异性指征，具有诊断与疗效考核价值。Alderete等人10报道
36、阴道毛滴虫感染者经药物治疗清除体内的毛滴虫后，血清中的抗阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶特异性抗体IgG迅速消失，提出以检测病人体内是否存在抗阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶抗体反应来对阴道毛滴虫感染进行诊断和对治疗效果进行评估的概念。Frh K11和Kinyanjui等人12也先后发现抗恶性疟原虫裂殖子一些抗原的抗体反应是短寿的，并认为抗原诱导抗体反应的类型与抗原本身的结构有关，发展长效疟疾疫苗需要选择能诱导长寿抗体反应（Long lived antibody response）的抗原分子作为疫苗候选抗原。Zang等13发现马来丝虫微丝蚴排泄分泌中的丝氨酸蛋白酶抑制剂Bm-SPN-2能被人和小鼠的T、B淋巴
37、细胞识别，能诱导Th1型炎症反应，其诱导的抗体反应一部分为短寿抗体反应。在药物治疗杀灭病人体内的微丝蚴，或经过6个月病人体内的微丝蚴自然消失后，病人血清中抗Bm-SPN-2蛋白的特异性IgG4抗体消失，IgG1抗体水平迅速下降但维持在一个很低的水平，而IgG2，IgG3的抗体水平下降不明显。相比之下，这批病人体内的微丝蚴被清除2年后，血清中抗丝虫及抗微丝蚴粗制抗原的抗体IgG1及IgG4水平依然维持在高水平，并没有明显下降。这一现象证明宿主与马来丝虫排泄分泌抗原之间的抗体应答存在短寿抗体反应与长寿抗体反应两种类型，短寿抗体反应是抗原依赖的，具有血清学诊断价值，尤其是抗Bm-SPN-2特异性Ig
38、G4抗体在病人体内微丝蚴被清除后迅速消失，被认为是马来丝虫感染血清学诊断的靶标分子。近年来，相应检测丝虫特异性IgG4抗体的丝虫病诊断试剂盒已经研发成功并获得广泛应用14-15。我国洪静婉等16发现治疗后小鼠血清抗虫卵某些抗原成分的抗体应答减弱或消失，华万全等17报道了治疗后家兔血清中抗虫卵107、121kDa蛋白组分的抗体应答消失较早，并称之为短程抗体。由于抗体在宿主体内的寿命是一致的，没有短程与长程之分，因此，应将这种现象统称为短寿抗体反应。以上研究结果均证明检测短寿抗体反应具有对病原体现症感染进行诊断与疗效考核的潜能。本研究观察了日本血吸虫感染小鼠、家兔体内抗日本血吸虫23 kDa大亲水
39、肽段（Sj23HD）抗体应答在治疗前、治疗后不同时间点的变化，发现在治疗后2周内抗体应答水平升高，随后抗体应答水平逐步下降。这种现象可能是因为虫体死亡时发生崩解，释放出大量的Sj23蛋白抗原，刺激机体产生更多的抗体应答反应，但随着虫体在宿主体内逐渐被排除，机体免疫系统受到抗原刺激逐渐减弱，抗Sj23抗体应答水平则逐渐下降，而不同小鼠及家兔个体之间这种抗体应答水平下降的速度存在一定的差异，有的迅速下降，治疗后16w即到达阴性阈值，而有的需要更长的时间才能下降到阴性阈值。未治疗组小鼠与家兔体内的抗Sj23HD抗体IgG应答水平随着感染时间的延长仍然维持在高水平状态。这个结果表明宿主抗血吸虫23kD
40、a膜蛋白的抗体应答模式是属于短寿抗体反应，抗体反应的强弱与体内Sj23蛋白抗原量相关，是一种特异性抗原依赖性的抗体反应。虽然，小鼠及家兔感染血吸虫经过治疗后体内抗可溶性虫卵抗原的抗体水平也有一定的下降趋势，但下降的幅度比较低，这种小幅度下降可能是由于可溶性虫卵抗原中存在一小部分诱导短寿抗体反应的抗原成分。因此，检测参与抗Sj23HD蛋白短寿抗体反应的特异性抗体IgG具有对血吸虫病进行疗效考核的潜能。但是，由于个体之间的遗传差异及感染度的不同，血吸虫感染后抗体反应的强度及治疗后抗体反应水平下降的速度亦不同，对于治疗后抗体反应未迅速转阴的个体，需要进行2次以上检测，如果抗体水平连续呈下降趋势则可以
41、判定为治愈。本研究使用重组Sj23HD-HSA抗原检测132份血吸虫病人血清，阳性率达89%；检测30份肝吸虫病人血清，交叉反应率为0%；检测80份健康人血清，假阳性率为0%。虽然该重组蛋白与肺吸虫的交叉反应比较重，高于文献报道的结果，可能与检测的样本数较少有关，但仍明显低于SEA的交叉反应率。这个结果表明酵母表达重组Sj23HD蛋白用于血吸虫病诊断具用良好的特异性和敏感性，与我们之前的结果相符，但对于来自肺吸虫病流行区的病人仍需要注意鉴别诊断。本研究初步证明了日本血吸虫23kDa膜蛋白刺激宿主免疫系统产生特异性抗原的短寿抗体反应，检测参与23kDa膜蛋白抗原特异性短寿抗体反应的抗体具有对血吸
42、虫感染进行诊断与疗效考核的价值。酵母外分泌表达的可溶性Sj23HD蛋白可为建立检测抗Sj23特异性抗体IgG的血吸虫病的诊断与疗效考核方法提供一种稳定的抗原来源。参考文献：1 Cruise KM, Mitchell GF, Garcia EG, et al. Sj23, the target antigen in Schistosoma japonicum adult worms of an immunodiagnostic hybridoma antibodyJ. Parasite Immunol,1983,5(1): 37-45.2 Mitchell GF, Premier RR, Gar
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