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1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减阿霉素对人胃癌细胞GST表达的影响（作者:_单位: _邮编: _） 作者：蒋丽娜 张从胜 齐效勇 薄爱华 张晓丽【摘要】 目的：探讨阿霉素对人胃癌细胞的杀伤作用及致GST表达的变化。方法：利用人胃癌BGC823细胞株，CO2培养箱进行培养过程中，加入阿霉素注射液继续培养5h或10h。然后用HE和免疫组化染色。光镜下观察并进行图象分析。结果：实验组BGC823细胞变形，GST表达位置和灰度有明显变化。结论：阿霉素作用5h可对胃癌细胞有杀伤作用，使胃癌细胞形态和GST基因表达有明显变化。 【关键词】 阿霉素;胃肿瘤/细胞;谷胱甘肽s转移酶;免疫组织化学 【ABS
2、TRACT】 Objective:To study the killing function of Adriamycin to human gastric carcinoma cells and its influence to the expression of GST.Methods：While BGC823 gastric carcinoma cells were educated in CO2 training box，Adriamycin was injected in human gastric carcinomal cells to educate continuously fo
3、r 5h or 10h，then stained with HaematoxylinEosinc（HE）and dyed with immunohistochemical method.The result was observed and analyzed with optical microscope.Results：BGC823 cells was deformed in experimental group,and expressive location and ash degree of GST had obvious changes.Conclusion：Adriamycin ha
4、s killing function on carcinoma cells and it can make Gastric carcinoma cells deformed and change the expression of GST. 【KEY WORDS】 Adriamycin（ADM）;Stomach neoplasms/Cell;GST;Immunohistochemical 阿霉素（Adria mycin，ADM或Doxovubicin ，DOX）又称多柔比星，是一类在临床上广泛使用的具有光谱高效抗癌活性的薏环类抗生素1，在多种癌瘤的化疗方案中可见到阿霉素，如治疗白血病、乳腺癌、
5、肺癌及恶性淋巴瘤等的方案中。目前，人们对ADM的抗癌机制报道很多，但关于ADM对基因表达的影响很少报告。为探讨ADM对谷胱甘肽s转移酶（GST）表达的影响，我们利用细胞培养和SP免疫组化的技术，观察了ADM对人胃癌BGC823细胞株GST表达的影响，为深入认识ADM的作用途径和癌细胞耐药机制提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 材料 AMD由深圳市万乐药业有限公司生产，BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组织化学试剂盒及鼠抗人单克隆抗体GST、DAB显色剂由中杉金桥生物技术有限公司提供。 1.2 方法 将5104个cell/mL浓度的BCG823胃癌细胞，装入无菌96孔板中，
6、置37 5%CO2培养箱中培养24h，细胞贴壁爬片(盖玻片)，对照组不加AMD培养,实验组加入ADM注射液15L(含AMD 0.0015mg)，然后继续培养5h或10h,取出贴壁细胞,4%多聚甲醛固定30min,然后用PBS(pH7.2)清洗,其中一片滴抗,室温过夜,常规SP法,抗、抗分别37孵育30min。阴性对照PBS代替I抗，阳性对照用已知胃癌阳性切片。 1.3 统计学处理 利用彩色图象分析系统，每组计数50个阳性细胞检测其着色灰度，以灰度表示着色深浅（深者即含量高者灰度值低，浅者灰度值高说明含量越低）。通过SPSS软件分析，计算方差值，再进行独立样本t检验。 2 结果 2.1 HE染色
7、后光镜下观察，可见对照组BGC823细胞呈梭形、多边形；胞核圆形呈紫兰色，边界清晰，核仁可见，胞质均匀，多呈弱嗜酸性，实验组5h组823癌细胞的胞质突消失，菱形细胞减少，很多细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多；胞核多呈固缩状态，着色较深，实验10h组，大部分癌细胞胞质消失，少部分癌细胞胞质水肿，HE染色时胞核固缩。 2.2 免疫组化结果 表1 阿霉素对胃癌细胞GST表达的影响 （灰度值）注：*与对照组和10h组比较有显著性差异（P0.01） 3 讨论 阿霉素是一种广谱、高效的抗肿瘤抗生素，在多种肿瘤的化学治疗中占有重要的地位。关于阿霉素的药理作用机制，目前主要有两种观点：一种观点认为ADM直接与
8、DNA相互作用（即经典的嵌入结合）而导致对DNA复制及转录过程的抑制2；另一种观点认为ADM可诱导氧自由基的形成，从而导致对核酸的切割3。近有学者采用DNA修饰的金电极表面电化学方法对AMD与DNA相互作用进行了研究4，结果发现，在酸性溶液中，AMD带正电荷，dsDNA带负电荷，两者之间的相互作用主要是静电结合，随着pH值的增加，在中性溶液中，AMD与dsDNA的相互作用是嵌入结合。BGC823细胞突起消失，胞质中空泡增多，可能与AMD与癌细胞中的DNA作用所致。 GST是由一系列同工酶组成的一个家族,可分为5种基因家族，其中有4种在胞浆中,为、。另一种为结合在胞膜上的微粒体GST5。GST不
9、仅能够催化一系列的疏水亲电子化合物，如胆红素、胆酸、类固醇激素、致癌物质与谷胱甘肽（GSH）进行结合，以促进这些化合物的转变、代谢、解毒和排泄，而且GST本身还可以与亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进其排泄，降低抗肿瘤化疗药物的细胞毒作用，保护免受细胞毒的损害6。GST与恶性肿瘤的关系最为密切，其减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，是在肿瘤组织中通过催化方式降解药物，并且还可抑制烷化剂等化疗药物引起的癌细胞DNA交联，从而造成癌细胞耐药，其高表达对化疗耐药有重要影响7。 在本实验中，ADM作用5h或10h后胞质GST灰度无明显变化，其灰度与对照组相比虽然稍降低，但二者相比较无显著性差异（P0
10、.05）。ADM对胞核中GST的影响明显，作用5h胞核中GST含量增高甚至比对照组中胞核含量还要高，10h组含量明显降低（P0.05）。实验结果说明，ADM对蛋白质代谢和基因功能有明显影响并随时间变化，胞核中GST含量变化较明显，阿霉素抗肿瘤作用机理复杂，有待于进一步研究。【参考文献】 1 冯硕，李正平，张淑红,等.阿霉素与DNA相互作用的研究初探J.河北职工医学院学报,2004，21（2）:4344 2 Frederick CA，William SLD，Vghettv G，et al.Strctural comparison of anticancer drugDNA complexes A
11、dria mycin and dannomy cinJ.Biochemistry，1990，29（10）：25382549 3 Powis G.Free vadical formation by antitumor quinwonesJ.Free Rad Biol Med，1989，6（）：6365 4 Zhou XL，Zhang HM.DNA modified gold surface electronchemical method for determining the interaction of adriamycin with DNAJ.中国分子心脏学杂志，2004，4（4）:1992
12、03 5 Chiper DI，Wagen mans MJ，Peters WH,et al，Gluththione Stransferases in gastric epithelium；immunohistochemical and biochemical analysesJ.Anticancar Res，1996,16（16B）：37213724 6 董继俊，耿振宏，李方广,等.P糖蛋白，GST及TOPOII在胃癌组织中的表达及意义J.山东医药杂志，2003，43（15）：4445 7 刘丽梅，闫晓初，郭德玉,等.耐药表型GST、Pgp及TopoII在大肠癌中的表达及其临床意义J.消化外科杂
13、志，2004，3（2）:118121 2.2 免疫组化结果 表1 阿霉素对胃癌细胞GST表达的影响 （灰度值）注：*与对照组和10h组比较有显著性差异（P0.01） 3 讨论 阿霉素是一种广谱、高效的抗肿瘤抗生素，在多种肿瘤的化学治疗中占有重要的地位。关于阿霉素的药理作用机制，目前主要有两种观点：一种观点认为ADM直接与DNA相互作用（即经典的嵌入结合）而导致对DNA复制及转录过程的抑制2；另一种观点认为ADM可诱导氧自由基的形成，从而导致对核酸的切割3。近有学者采用DNA修饰的金电极表面电化学方法对AMD与DNA相互作用进行了研究4，结果发现，在酸性溶液中，AMD带正电荷，dsDNA带负电荷
14、，两者之间的相互作用主要是静电结合，随着pH值的增加，在中性溶液中，AMD与dsDNA的相互作用是嵌入结合。BGC823细胞突起消失，胞质中空泡增多，可能与AMD与癌细胞中的DNA作用所致。 GST是由一系列同工酶组成的一个家族,可分为5种基因家族，其中有4种在胞浆中,为、。另一种为结合在胞膜上的微粒体GST5。GST不仅能够催化一系列的疏水亲电子化合物，如胆红素、胆酸、类固醇激素、致癌物质与谷胱甘肽（GSH）进行结合，以促进这些化合物的转变、代谢、解毒和排泄，而且GST本身还可以与亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进其排泄，降低抗肿瘤化疗药物的细胞毒作用，保护免受细胞毒的损害6。GST与恶
15、性肿瘤的关系最为密切，其减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，是在肿瘤组织中通过催化方式降解药物，并且还可抑制烷化剂等化疗药物引起的癌细胞DNA交联，从而造成癌细胞耐药，其高表达对化疗耐药有重要影响7。 在本实验中，ADM作用5h或10h后胞质GST灰度无明显变化，其灰度与对照组相比虽然稍降低，但二者相比较无显著性差异（P0.05）。ADM对胞核中GST的影响明显，作用5h胞核中GST含量增高甚至比对照组中胞核含量还要高，10h组含量明显降低（P0.05）。实验结果说明，ADM对蛋白质代谢和基因功能有明显影响并随时间变化，胞核中GST含量变化较明显，阿霉素抗肿瘤作用机理复杂，有待于进一步研究。【参
16、考文献】 1 冯硕，李正平，张淑红,等.阿霉素与DNA相互作用的研究初探J.河北职工医学院学报,2004，21（2）:4344 2 Frederick CA，William SLD，Vghettv G，et al.Strctural comparison of anticancer drugDNA complexes Adria mycin and dannomy cinJ.Biochemistry，1990，29（10）：25382549 3 Powis G.Free vadical formation by antitumor quinwonesJ.Free Rad Biol Med，19
17、89，6（）：6365 4 Zhou XL，Zhang HM.DNA modified gold surface electronchemical method for determining the interaction of adriamycin with DNAJ.中国分子心脏学杂志，2004，4（4）:199203 5 Chiper DI，Wagen mans MJ，Peters WH,et al，Gluththione Stransferases in gastric epithelium；immunohistochemical and biochemical analysesJ.Anticancar Res，1996,16（16B）：37213724 6 董继俊，耿振宏，李方广,等.P糖蛋白，GST及TOPOII在胃癌组织中的表达及意义J.山东医药杂志，2003，43（15）：4445 7 刘丽梅，闫晓初，郭德玉,等.耐药表型GST、Pgp及TopoII在大肠癌中的表达及其临床意义J.消化外科杂志，2004，3（2）:118121