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1、免疫组化抗原修复简介,为何要进行抗原修复 抗原修复的种类 抗原修复的原理 抗原修复的操作 抗原操作的应用,为何要进行抗原修复,常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林固定和石蜡包埋，虽然上述过程能良好的保存标本在光镜下的形态，但是会不同程度地破坏组织的抗原，降低组织的抗原与抗体的免疫反应率。,抗原修复的种类,热修复（HIER） 蛋白酶修复（PIER） 双修复（特殊抗原和双染） 不修复,抗原修复的原理,抗原修复目前常用的有热修复（HIER），蛋白酶修复（PIER）和不修复。不同的修复的原理不同。 热修复的原理 蛋白酶修复原理,热修复(HIER)的原理,“石说”：固定通过改变蛋白结构降低免疫反应性，AR
2、逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰，冷却后，会重建“近天然”的结构，免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。,热修复的特点,易于施行 易于标准化,蛋白酶修复(PIER)原理,蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联，实现抗原的修复。 该方法的缺点是：破坏组织的完整性，会破坏抗原，而且酶的浓度，反应时间，反应温度造成很大的差异，标准化难度较大。,抗原修复的操作,热修复（HIER） 蛋白酶修复（PIER） 双重修复,热修复（HIER）,高压修复 煮沸法修复 微波修复 水浴加热,高压修复,切片先脱蜡水化 将修复液注入高压锅，将液体煮沸 放入切片（甩开水分） 盖上盖子，等喷气，计时1.52分钟（800W1
3、000W） 冷却，冲洗玻片上的修复液,1.5-2min,10min,高压锅直接修复,高压锅隔水间接修复,煮沸法修复,将修复液注入不锈钢锅中 煮沸后，加入切片（甩干水分） 用保温档，处理20分钟左右 冷却，冲洗玻片上的修复液,蛋白酶修复（PIER）,切片脱蜡水化 切片上滴加酶，放入孵育盒，处理一定时间 时间到，取出切片，冲洗。,双重修复,脱蜡水化后，对切片进行胰酶消化 然后，对切片进行热修复,抗原操作的应用,时间 温度 冷却 细节,MOC31（上皮糖蛋白-2，EGP-2),EGFR(CLONE:EGFR.113),HBcAg(兔多抗),C/H,NO,结论,正确的修复对抗体的表达十分重要 抗原修复是一个个性化的方法，由抗体的克隆号，病理标本的类型等决定。 合适的修复方法才能获得最佳的修复效果。,谢谢！,