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1、1.1 掌握涂布平板法、稀释倒平板法、划线分离法分离微生物的操作技术； 1.2 掌握微生物样品稀释法。 1.3 初步掌握无菌操作技术和平板菌落计数法。,实验二 从土壤中分离和纯化微生物,1 实验目的,2.1 什么是微生物的纯培养,从固体培养基中分离微生物的方 法有哪些? 2.2 为什么可以根据菌落数目来计算样品中微生物的数量?,2 实验原理,3.1.1 土壤样品：按无菌操作要求有目的地取某一类型的土壤。 3.1.2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏一号培养基，马铃薯培养基（上次实验成果） 3.1.3 无菌生理盐水。 3.1.4 其它物品： 无菌培养皿，无菌吸管，洗耳球，无菌玻璃涂棒，无菌报纸，
2、药勺，10酚溶液。,3 材料与方法,3.1 实验器材,3.2 方法（A.稀释涂布平板法）,各管4.5mL无菌水,依次0.5mL，注意更换枪尖,10-4、10-5、10-6；各平板0.1mL,3.2.1 制备土壤稀释液,振荡20 min,三角烧瓶中为什么要加玻璃珠?,取土壤过程中怎样减少杂菌污染?,3.2.2 倒平板,将培养基加热熔化，冷至5560，(在高氏1号培养基中加入 10%酚数滴)，(在马铃薯培养基中加入链霉素溶液至终浓度为 30ug/mL，)混匀后倒入平板。 （操作方法，教师示范）,每平板12 mL,3.2.3 涂布,标记浓度,取菌液 0.1mL,玻璃涂棒灭菌,涂布,静置510min,
3、3.2.3 培养,细 菌,霉 菌,放线菌,28培养箱,37培养箱,倒置培养24-48h,倒置培养3-5天,3.2.4 平板菌落计数,选取平板上长有50200个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量， 同一稀释度的三个重复平板上菌落数应相差不大，且不同稀释度 计算的数据也不应相差太大。,3.2 方法（B.稀释倒平板法）,取样 （0.1mL),倒平板 （45，12mL，旋动) 教师示范,倒置培养,3.2 方法（C.平板划线分离法）,倒平板,划线 （教师示范）,倒置培养,实验报告,1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法.,2 实验结果。观察菌落数目、菌落形态特征，数据可设计表格表示。注意用三线表，要求有表格名称，项目清晰。,3 实验分析。比较涂布平板法和稀释倒平板法两种操作方法的结果？作为初学者更适合用什么方法？实验操作中存在什么问题，应如何改进？,