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1、阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及机制研究,设计成员：,研究背景,阿司匹林: 解热镇痛抗炎药； 对血小板聚集有抑制作用，阻止血 栓形成； 临床可用于预防暂时性脑缺血发作、心肌梗塞、心房颤动、人工心脏瓣膜、动静脉瘘或其他手术后的血栓形成,研究背景,血栓：活动物机体在心脏或血管内某一部分因血液成分发生析出、凝集和凝固所形成的固体状物质 血栓形成的机理： 心、血管内膜损伤 血流状态改变 血液性质改变,研究背景,抗血栓药分为： 抗凝血药、抗血小板聚集药和溶血栓药 抗血小板聚集药分为三代： 阿司匹林为第一代，噻氯匹啶为第二代，血小板糖蛋白b/a受体拮抗剂为第三代。其中，血小板糖蛋白b/a受体拮抗剂的问世
2、是抗血小板治疗中的一个重要里程碑。,实验目的,探讨阿司匹林抗血小板的聚集和抗血栓作用及机制,实验材料,实验动物：雄性SD大鼠40只,体重200g左右 实验器材：微循环观察分析系统，冷光源， ChronoLog 591全血血小板聚集仪及配套设备， TXB2和6-keto-PGF1放射免疫分析测定盒，低速离心机，聚苯乙烯离心管，一次性无菌塑料注射器，温浴槽，胃管，开口器 实验药品：0.25mg/ml二磷酸腺苷（ADP），3.8%枸椽酸钠(柠檬酸钠),阿司匹林注射液，生理盐水，孟加拉红溶液，0.3%戊巴比妥钠,TXB2和6-keto-PGF1放射免疫分析测定盒,ChronoLog 591全血血小板
3、聚集仪,实验步骤,复制血栓大鼠模型 尾部静注孟加拉红溶液15mg/kg； 0.3%戊巴比妥钠麻醉60mg/kg； 耳部平铺，观察并记录大鼠耳廓目标血管的血流状态； 用波长为540nm的冷光源照射大鼠耳廓目标血管，观察并记录血流状态，以不同时间点血流速度及血流完全停止的时间作为评价血栓形成的指标。,实验步骤,阿司匹林抗血小板聚集测定 1. 分组及给药 （30只SD雄性大鼠称重标记，随机分为6组，每组5只） 2血小板聚集率测定 （取阿司匹林灌胃前自每组大鼠腹腔取血0.5ml测定血小板聚集率） 3TXB2、6-keto-PGF1测定,原理,膜磷脂,磷脂酶A2,环氧酶COX-1,花生四烯酸,PGG2,
4、PGH2,TXA2合成酶,PGI2合成酶,PGI2,TXA2,促进血小板聚集；收缩血管,抑制血小板凝集;扩张血管,TXB2,6-keto-PGF1a,TXB2、6-keto-PGF1测定,在以上结果中找出阿司匹林抗凝效果最佳时剂量。 取十只老鼠分两组，a（空白组），b（治疗组），按原方法复制大鼠模型。 第一天，空腹静脉抽血0.5ml，试管3500r/min离心20min，取上清液，放射免疫法测定TXB2、6-keto-PGF1水平。 a组大鼠生理盐水灌胃7d，按上面选出的最佳时剂量;b组大鼠阿司匹林注射液灌胃7d，按上面选出的最佳时剂量。 第8天，按照上述方法重复测定TXB2、6-keto-P
5、GF1水平。,免疫组化SP法测定COX一1在血小板中表达,空腹，腹腔静脉采血5 mL； 离心分离富血小板血浆； 血小板制片 SP染色 光镜下结果判断：血小板染色呈棕褐色或棕黄色为阳性(cox-1的定位)，每张切片高倍镜下随机取5个视野，经图像分析仪进行定量吸光度扫描，求其阳性信号平均吸光度值。,观察记录,阿司匹林抗血小板作用凝集率,组别 灌胃前 灌胃后（min）,1 2 3 4 5 0,观察记录,治疗前后TXB2，6-keto-PGF2含量比较,组别,A B,TXB2 6-keto-PGF2,治疗前 治疗后 治疗前 治疗后,组别,对照组 低凝组 中凝组 高凝组,吸光度值,1 2 3 4 5 平均值,COX-1蛋白染色后吸光度测定值记录表,预期结果,血小板聚集率的测定中，对照组的聚集率最大，实验组都不同程度地降低； TXB2明显下降，6-keto-PGF1a轻微下降； 各组血小板COX一1表达水平(即吸光度值)大小不一，其中对照组吸光度最小、其余三组吸光度值随所测血小板凝聚率值的增大而增大,预期结论,阿司匹林具有抗血小板凝集作用； 阿司匹林是环氧化酶（COX）抑制剂，主要通过抑制cox-1活性而减少TXA2的合成发挥抗血小板凝集作用，从而发挥其抗血栓作用。,Thanks！,