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1、支原体,第19章,主讲人： 中 华 医 学 检 验 全 书 主 编 北华大学临床微生物学 教 授 海 南 医 学 院 外聘教授 李影林 2011年4月,目的要求,掌握：支原体的概念和生物学性状， 支原体与L型的主要区别。 熟悉：肺炎支原体、溶脲脲原体所致 疾病。 了解：冷凝集试验的原理和应用。,1.概念 支原体是一群无细胞些壁能独立生存的，介于病毒与细菌之间的原核生物界微生物。 2.特点 (1)体积很小（200nm）能通过滤菌器。 (2)有细胞结构，但无细胞壁，也无胞壁粘肽或其先质。 (3)可在无生命的培养基上生长（如营养丰富的琼脂培养基），形成微小菌落。 (4)呈二分裂繁殖。,第一节 概述,
2、分 类,目前已知150余种。其中寄生性支原体有90余种，而人体支原体至少有15种。 为软皮体纲（Mollicutes），支原体目（Mycoplamatales）， 支原体科（Mycoplasmaceae）。 无胆甾原体属（Acholeplasma） 厌氧原体属（Anaeroplasma） 无固醇原体属（Asterolplasma） 支原体属（Mycoplasma）：64个种 螺原体属（Spiroplasma） 脲原体属（Ureaplasma）：二个种 其中对人致病主要有5种，包括： 肺炎支原体（M.pneumoniae） 人型支原体（M.hominis） 生殖器支原体（M.genitalium
3、） 穿通支原体（M.penetraus） 溶脲脲原体（U.urealyticum）,支原体与细菌L型的区别,肺炎支原体 溶脲脲原体 人型支原体 生殖器支原体,泌尿生殖系感染、不育症,肺炎,主要致病支原体,第二节 主要致病支原体,一、肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia） 形态与结构 1.G-，不易着染，Giemsa染色呈 淡紫色/浅蓝色。 2.无固定形状，而呈多形性（球、 杆、丝、颗粒、星、螺分枝），其 典型形态似酒瓶状。 3.结构：无细胞壁，仅有细胞膜。 电镜观察：,4.大小： 0.20.3m, 为原核细胞界微 生物中最小者。 可通过除菌滤器。,内外两层蛋白质。 细胞由三 成
4、结构组成 中层脂质，其中胆固醇 占36%。 核糖体Pr合成的重要场所。 细胞浆 双链环形 DNA。 近细胞丝状体尖端有一球状的特殊结构，使支原体粘附于宿主上皮细胞表面。,培养特点 1.可在人工培养基上繁殖，但营养要求颇高。 2.偏硷环境（pH7.68.0）生长适宜，中性生长较差，酸性被抑制或死亡。但溶脲脲原体除外（pH6.06.5最适宜）。 3.有氧无氧均能生长。 4.固体培养基：经23d见小的集落犹如“油煎蛋样”集落中央长入培养基中（向内凹陷）边缘扁平贴附在培养基上。 5.繁殖速度缓慢（34h一代） 繁殖方式多样化。 (1)二分裂 (2)颗粒型 (3)丝状体 (4)出芽,生化反应 多数分解葡
5、萄糖产酸不产气，一般不分解蛋白质。通常根据能否利用葡萄糖、水解精氨酸和尿素与其他致病性支原体区别。,抗原构造：颇为复杂。 其主要Ag性来自细胞膜。胞膜外层蛋白质是主要型特异性Ag。其抗原性常用生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）鉴定。,GIT：将吸有型特异性抗血清 的滤纸片贴在接种过支原体的 平板上，孵育后，如有抑制生 长现象出现，则说明该支原体 与血清同型。,MIT：是将支原体接种在含有抗血清的葡萄糖（酚红）培养基中，若抗体与支原体型一致，则抑制该支原体不能分解葡萄糖产酸，酚红不变色。 用GIT和MIT可将支原体分成若干血清型。,若相应，则支原体生长、代谢受抑制，酚红不变色,代谢抑
6、制试验（MIT）,生长抑制试验（GIT）,有些和一般细菌的繁殖体相似，但多数比较娇嫩。 1.对热、干燥，一般重金属盐类和一般化学消毒剂 敏感 2.对表面活性 敏感 3.对青霉素、链霉素头孢菌素结晶紫，醋酸铊则有一定的抵抗力。,抵抗力（无细胞壁）,4.对作用于胆固醇的药物（二性霉素B等）和干扰蛋白质合成的药物（强力霉素、氯霉素、红霉素、链霉素等）敏感。,致病性与免疫性,致病物质 1.黏附因子P1蛋白的定植作用:可吸附于宿主呼吸道黏膜细胞、红细胞等表面的受体神径氨酸酶上,避免微纤毛运动将其排除。 2.毒性代谢产物损害宿主黏膜上皮细胞，出现肿胀，坏死和脱落，微纤毛运动减弱。 3.荚膜具有抗吞噬作用，
7、也有毒性。 4.糖脂抗原：与宿主细胞有共同抗原决定簇，故可引起变态反应，导致免疫损伤。,所致疾病,支原体肺炎,肺炎，症状轻重不一，婴幼儿较重。成人通常较细菌性肺炎轻，有时无明显症状。 支气管炎：陈发性咳嗽，胸部不适。 咽炎。 鼓膜炎鼓膜出现疱疹、常为出血性的。 神经系统及其它系统损伤，少数患者出现脑膜脑炎。,以隐性感染为主，可伴有呼吸道外症状，X线肺部呈羽毛状浸润 传播：飞沫,免疫性 病后免疫力短暂，可反复感染。,以体液免疫为主，细胞免疫也起作用。 1.早期感染 单核-巨噬细胞,刺激,产生,急性期炎症因子IL-1和 TNFa,可扩张血管 ；增强吞噬细胞的功能 诱导IL-6的产生 诱导肝细胞产生
8、急性期蛋白 激活补体,2.产生的抗体IgG1和IgG2有调理作用 促进单核M的吞噬作用 激活补体。,3.呼吸道黏膜分泌的SIgA有阻止肺炎支原体的吸附作用。 4.肺炎支原体与人类心、肺、脑和肾有共同抗原，可引起型变态反应（如溶血性贫血、血小板减少性紫癜、心肌炎、肾炎、脑膜炎和格林巴利综合征）。 5.IgG与相应抗原组成免疫复合物引起型超敏反应，如心肌炎和肾炎等。 6.肺炎支原体作为超级抗原可激活CD4+T细胞,微生物学检查法,标本的采集 通常采集病人咽拭子、鼻拭子、痰、支气管分泌物、含嗽液。其中以拭子为最佳。 注意事项： （1）因支原体对热、干燥敏感。取材后应立即接种； （2）如不能立即接种可
9、置于蔗糖磷酸盐缓冲液，4保存72h，-70可长期保存。,检验方法 1.标本直接检查 （）直接镜检 Gram染色G-不易着染。 标本涂片 电镜观察无细胞壁易与细菌区别。 （）核酸检测：用PCR法快速、敏感、特异操作中应特别小心、防止污染。 2.分离培养：慢阳性率不高对临床快速诊断意义不大，但对流行病学调查有一定意义。,3.血清学检查抗体检测。 （）ELISA特异、敏感、快速目前常用而可靠方 法可检测IgM和IgG。,（）生长抑制试验（） （）代谢抑制试验（）,（）补体结合试验（CF）常用 （）间接血凝试验 （）冷凝集试验是检测患者血清中冷凝集素的一种非特异性试验。但仅33%76%患者出现阳性。（
10、效价1：64），效价越高或4以上升高，近期感染的可能性大。 用病人血清与人O型红细胞或自身红细胞 混合4过夜，观察红细胞的凝集现象，37时凝集又分开，即冷凝集试验,.分子生物学检测：快速，敏感性高，特异性强 核酸探针、,预 防 死疫苗和减毒活疫苗的效果尚不肯定。 治 疗 红霉素、链霉素、螺旋霉素等。,防治原则,二、 溶脲脲原体 （Ureaplasma urealyticum，Uu）,是可引起泌尿生殖道感染的病原体 生物学性状 1形态结构：基本同肺炎支原体。 2培养特点 （1）营养要求较高 （2）固体培养基 95%N2、5%CO2 形成1550m颗粒状“荷包蛋”样小 菌落（放大200才能见到）
11、3生化反应 不分解葡萄糖和精氨酸 脲酶 +。 4.抗原结构（1）脂多糖Ag。 （2）蛋白质抗原。 （3）脲酶Ag种特异性Ag。 5抵抗力：基本同肺炎支原体。,致病性和免疫性,Uu多寄生在男性尿道、包皮和女性阴道。 1.上行引起男性前列腺炎或附睾丸。 2.女性阴道炎、宫颈炎并导致流产。 3.早产儿及低体重新生儿呼吸道和中枢N系统感染。 4.淋病患者损伤泌尿生殖道粘膜，有利于Uu的粘附，故淋病治愈后，有些人仍有症状遗留。,溶脲脲原体引起不孕症的原因,.吸附精子表面，阻碍精子运动； .产生神经氨酸酶样物质，干扰卵子与精子结合； .溶脲脲原体与精子有共同抗原，溶脲脲原体感染刺激机体产生的抗体对精子产生
12、损伤。,微生物学检查法,1标本的采集 （1）非淋菌性尿道炎患者中段尿。 （2）慢性前列腺炎患者前列腺液。 （3）原因不明的不育症患者精液。 （4）阴道炎、宫颈炎患者炎性分泌物、羊水、血液。 标本离心取沉淀物送检。,检验方法 1.标本直接检查 （1）核酸检测PCR法。快速简便、稳定可靠、敏感性高。 （2）ELISA特异性强、较敏感，有早期诊断意义。 （3）免疫斑点试验（IDT）：利用免疫斑点试验检测抗原提取物和Uu培养物。敏感、特异性强、快速，不需特殊仪器，易于推广。,2.分离培养 标本 接种于 pH6.0含酚红和尿素的液体培养基 37 观察颜色变化 . 3.抗体检测意义不大。,注意性卫生，感染
13、者用强力霉素，红霉素，氯霉素等,防治原则,三、穿透支原体 （M.Pentrans，MPe）,人们越来越证实MPe是加速AIDS进程的辅助致病因素。 1形态结构杆状或长烧瓶状结构与肺炎支原体相似 2培养特点 （1）营养要求高，培养基中需加血清。 （2）生长缓慢。 （3）在改良SP-4培养基上菌落呈“荷包蛋”样。 （4）液体培养基：无明显的混浊或沉淀，呈透明状。 3生化反应：发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素。 4Ag构造与其他支原体不同。 5抵抗力：红霉素、四环素、林可霉素敏感，但对青霉素不敏感。,致病性与免疫性,1致病因素 （1）MPe的尖形结构具有粘附和穿入或动物的红细胞、淋巴细胞和单核细
14、胞，在细胞中大量复制，导制细胞受损和死亡。 （2）MPe对HIV感染者T细胞的作用，可促进HIV的复制和病程发展。 （3）MPe对诱导肿瘤坏死因子TNF-（由巨噬细胞产生）的表达可能也是造成损伤细胞的主要因素。 2所致疾病：多数人认为Mpe感染是艾滋病的辅助致病因素。,微生物学检查法,1标本的采集取材对象为AIDS患者和HIV感染者。 （1）咽部粘液 （2）AIDS患者组织块作免疫组化或电镜技术检测。,37 每天观察颜色有无变化如由红变黄透明、无沉淀视培养可疑阳性再用滤过，滤液转种传代，当培养基颜色再次由红变黄则认为“初代培养阳性”。 （2）生化反应 葡萄糖发酵试验 精氨酸水解试验 脲素酶试验 （3）代谢抑制试验（MIT） （4）PCR,防治原则 要预防艾滋病等继发性免疫缺陷病。 治疗用大环内酯类抗生素。,思考题,名词解释： 支原体 问答题： 1、请比较支原体和细菌L型的主要区别？ 2、常见的支原体主要有哪几类？ 分别引起什么疾病？,