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1、霍乱等感染性腹泻采送样要求,济阳县疾病预防控制中心 检验科,标本采集的重要性和原则 霍乱等肠道传染病采样要求 感染性物质的包装运送要求 存在的问题和对策,主 要 内 容,标本是进行一切实验室检测的基础； 所有实验室检测的结果都依赖于所得到标本的质量； 直接关系到实验室检测的准确性与效率；,标本采集和运送的重要性,影响到处置事件的评估与策略制定。 疫情处理：疫情的判断与防控策略的制定 监测与普查：流行状况的评估 病例诊断：治疗方案制定、病人预后、疾病负担,标本采集和运送的重要性,标本采集的好坏，对整个检验工作的质量影响很大； 粪便或呕吐物等标本的采集应争取在发病早期、服用抗菌药物之前； 尽快送到
2、检验室检验； 在全部采样检验过程中，接触样本人员要严格执行生物安全操作的有关规定。,标本的采集、送检的原则,标本的采集、送检和保存注意项,血液标本处理：不同采血管要求：室温孵育、及时动； 不明原因疾病标本 ：无菌、无抗生素保存管； 用于细菌检测：避免盲目增菌、转运培养基 （污染标本：切忌无选择性增菌） 用于病毒检测：病毒保存液 保存运输温度 用于病毒检测：低温（-20） 用于细菌检测：4或室温（弧菌），禁零下。,腹泻病人必须在肠道门诊内由医护人员采集粪便标本，做好标本登记，实行有泻必采、有样必送。 医院微生物检验室设立霍乱弧菌检测实验室或专区，开展霍乱弧菌检测。 分离的霍乱弧菌要速送到属地疾控
3、中心进行复核和鉴定。 分离的伤寒和副伤寒菌株、其它沙门氏菌、痢疾杆菌和大肠O157等，要及时送到属地疾控中心复核。,霍乱等采样及检测要求,水样便的腹泻病人 集体聚餐引起的腹泻病人 来自霍乱疫区的腹泻病人 发现病人或带菌者的自然村、居委会和单位范围内 要在使用抗生素以前，采集吐泻物或其污染的物品，按检验规程作霍乱弧菌快检，再按检验规程作霍乱弧菌培养。,霍乱等采样及检测要求,在标本采集过程中，注意使用一次性隔离服、手套、防护口罩（以免飞溅）等防护措施 在标本采集过程中,严格采取预防措施，防止针头等锐器刺伤（尤其是已经采集过病人血液的针头） 采样人员恰当防护，防护过度可能造成人群的恐慌，出现不必要的
4、麻烦,生物安全防护问题,霍乱标本的采集、送检和保存,依据为霍乱防治手册 粪便：标本的采集以病人粪便为主 ，水样便采取13mL，成形便采取指甲大小的粪量。 直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内35cm处采取。 急性期病人取水样便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种于碱性琼脂、TCBS琼脂培养基。 带菌者粪便都应接种碱性蛋白胨水增菌，放37增菌68h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于碱性琼脂、TCBS琼脂培养基。,霍乱标本的采集、送检和保存,采集的标本不能立即检查的，要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基中； 标本与保存液比例约为15
5、； 送检标本时应填写“标本送检单”写明姓名、地址、发病时间、采集时间、临床诊断、用药信息等； 运送过程中双层包装，勿污染容器口外壁，专人运送，送检箱每次用后须做消毒处理,霍乱弧菌外环境标本检索,样品的采集处理 （1） 水样标本：取水样450ml1mol/LNaOH调PH至8.4-9.2。加浓10倍碱性蛋白胨水中，再加入1%亚碲酸钾0.5-1ml ； （2）食品标本：食品 50g样品碾碎，加到PH9.2 ，250ml 碱性胨水中； （3）水生动物标本：贝壳类取可内组织，鱼类取腮部和肠内容物。,O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存,粪便标本的采集应争取在发病早期，服用抗菌药物之前并尽快送到
6、检验室。 采集腹泻病人粪便以血性水样便为主，也可以用直肠棉拭或采便管采取，肛拭标本应染有粪便。 腹泻病人血性水样便标本从采集到送检不得超过24h, 采集的标本应插入卡里-布莱尔（Cary-Blair）半固体保存培养基中，立即送试验室接种于培养基。 培养基要定期调换，保持培养液新鲜。,O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存,水、食品、环境检验标本：采集应在24小时内送至实验室进行增菌、培养、分离； 特殊样品的采集：应遵循不重复的原则。如采集苍蝇标本：可以选择公厕、酒店、垃圾场、市场、定点屠宰市场及养殖场等。生熟肉制品：可以选择市场、超市、加工厂等； 特殊样品的处理：畜、禽等的生、熟肉样品尽
7、快无菌将样品剪碎、研磨并加入增菌液中；苍蝇等样本直接研磨后加入增菌液中。,O157:H7大肠杆菌标本的采集、送检和保存,样品检验单应填写完整，与样品一起送实验室。必须提供与分离菌株相对应的患者的临床资料和流行病学资料； 使用免疫磁珠富集技术和山梨醇麦康琼脂或科玛嘉琼脂分离肠出血性大肠杆菌O157：H7； 按照山梨醇不发酵、 O157：H7特异性血清初筛、生化反应、PCR进行肠出血性大肠杆菌O157：H7的初筛和鉴定； 初筛阳性的菌落和可疑菌落应该保存下来，交上级进行分子生物学等鉴定和分型。,志 贺 氏 菌标本的采集、送检和保存,以新鲜粘液血便为主( 亦可采用肛拭子取 )。最好在服药前采便 ,取
8、便后应及时送检验室接种培养，否则应将粪便标本或肛拭子放入带有保存液的管内，或置 Cary-Blair 运送培养基内； 送检验室培养或放置 4-8冰箱暂存，在收到送检标本后，应即刻接种培养； 慢性痢疾患者或带菌者粪便、食品等标本 ,可先置有保存液或运送培养基内,取标本接种于 GN 肉汤中，在室温 25 时即有增菌作用,接种量不能超出1 :10。增菌时间不能超过 6 小时。,伤寒、副伤寒标本的采集、送检和保存,血培养：确诊依据，第一周阳性率可达90%，第三周降为3040%，第四周时常阴性。用含胆汁的培养基，已用抗生素的患者可取血凝块做培养； 骨髓培养：阳性率高，用抗菌素后有效； 尿、粪便培养 十二
9、指肠引流液（胆汁）培养 玫瑰疹的刮出物或活检切片培养,伤寒、副伤寒标本的采集、送检和保存,标本采集 按不同病期采集不同种类的标本。 粪便：发病第2到3周； 尿：发病第2到3周； 血液、骨髓:发病第1到2周； 食品、水、其他标本如玫瑰疹刮取物,胆汁,媒介昆虫苍蝇类尽快采取。,其它肠道传染病样本采集,小肠结肠炎耶尔森氏菌； 空 肠 弯 曲菌 致 腹 泻 原 虫 腹泻病毒亦为重要病原 轮状病毒（5岁以下儿童严重腹泻的最普遍病原，占腹泻住院儿童的2060%） 杯状病、星状病毒（2%9%） 肠道腺病毒（2.8%8.7%）,菌株保存与移交,每分离出一株细菌，即建立菌株保存档案，详细记录菌 株的来源、分离的
10、时间和地点及取材病人的基本信息和流行病学特征；同时准备2支半固体，每管加3.5ml半固体； 用接种针挑取菌落接种半固体，37培养18小时。管内加入石蜡使其隔绝空气，室温或4避光保存。一管保存在当地实验室，另一管菌株附档案逐级上送疾病预防控制中心复核； 上送菌株经初步鉴定后，填写菌株上送登记表及送检单，按照感染性样本运送要求进行，每次移交均填写交接记录。基层对首发病例分离的霍乱菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查，建议常温下保存送检,不主张冷(冻)藏送检霍乱菌种或样品。,感染性物质的包装运送要求,高致病性病原微生物标本运输流程,感染性物质包装分类,国际民航组织危险物品航空安全运输技术细则中将
11、感染性物质分为A、B两类。 名录要求：通过其他交通工 具运输的可参照以上标准包装 禁止使用公共电/汽车和城市铁路(地铁/轻轨)运输病原微生物菌(毒)种或样本！,感染性物质包装分类,感染性物质包装分类,A类： 对健康人或动物造成永久性残疾或致命疾病的感染性物质。 包装：最耐用的三层包装，并附上完整的危险品申报单。 培训运输人员。,感染性物质包装分类,航空运输A类包装（ UN号2814）,感染性物质包装分类,B类： 不符合列入A类标准的感染性物质 运输专用名称为诊断标本或临床标本或生命物质B类。 包装：三层包装,不需要危险品申报单。 。,感染性物质包装分类,航空运输B类包装（ UN号3373,A类
12、、 B类包装的共同点,三层包装 第一层包装要求用保存标本的原始容器（外螺旋管），需将盖口密封。 第二层包装可以采用专用二级包装桶或耐高压塑料袋。 第三层包装是将密封好的第二层包装放入运输包装盒，运输包装盒要求有保持冷藏低温功能。 主容器和辅助包装，必须能承受在-40至+55温度范围内95kPa的内部压力而无渗漏。 完整的包装必须能通过危险物品航空安全运输技术细则规定的跌落试验，跌落高度不低于1.2m。 外包装标识、联系人、地址清楚,A类、 B类包装的区别,感染性物质运送时应随身携带生物危害物质溢出紧急处理箱,标本包装系统要求,容器,材料,标识,密封,无菌,三防,两耐,生物危险,警告用语,提示用
13、语,放置方向,高/低温-4055（液氮-196）,高压（95kPa）,水,破损,泄漏,单位内部感染性物质运送要求,A类包,单位内部不同建筑物间感染性物质运送应使用两层包装系统。 （如：病房与病房之间、采样点到实验室以及大楼内部的样品转移,11年工作中存在的主要问题 和今后工作对策,11年工作中的主要问题,腹泻病检测工作不平衡 缺少部分检验工作必备的诊断血清、培养基，疟疾镜检设备不全，血片抽检及保留记录不完整； 部分医疗卫生单位实验室腹泻病检测工作薄弱； 痢疾菌株的分离、上送部分单位重视程度还要加强，有一株多传现象； 辖区所抽检医疗单位部分存在检验登记不全，霍乱快诊率、培养率未达标， 痢疾杆菌分
14、离培养率低等； 食源性疾病样本相关诊治大夫缺乏及时留存意识； 部分乡镇医院的腹泻病检测工作还须规范。,2012年工作中的问题- 对策,领导重视，增强责任心，进一步加强实验室自身能力建设： 人员培养管理、实验室设备、实验室耗材运行支持、项目建设等； 对辖区进行有效培训，按照工作意见要求跟踪检查督导，实验室应全程参与； 为辖区医疗单位作好技术支持，保持有效的沟通，建立示范单位，促进其他单位整体检测工作的提升； 规范培训、抽查、督导和检测原始记录。,2012年工作要求,加强培训，认真学习相关法规、标准： 实验室生物安全通用要求GB 19489-2004 病原微生物实验室生物安全管理条例 可感染人类的
15、高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定 人间传染的病原微生物名录 加强微生物实验室规范化建设： 根据卫办疾控发2004108号省、地、县级疾病预防控制中心实验室检验能力和设备装备标准， -微生物鉴定仪器设备；样品的采集、运输、保藏设备；提高实验室人员检测技能；加强实验室检测质量控制；逐渐完善应急检测项目储备,2012年工作要求,必须建立至少1间符合标准的二级生物安全实验室；-按照2004年11月5颁布的中华人民共和国国务院第424号病原微生物实验室生物安全管理条例规定，要求各区县并进行生物安全实验室的使用和生物安全知识的培训。 加强分离菌（毒）及传染性样品管理：按照相关规定对实验室质控菌种和分离样本、或菌种进行保存，并将分离菌种及时按要求逐级上送。 结合本辖区往年传染病发生情况，积极主动开展常见传染病病菌和食源性疾病病原体的检测和分离工作。 加强对辖区医疗单位实验室检测技术指导和工作督导 县及县级以上医院（包括同级别的企业、民营医院） 配备就诊病人登记表、采样用品和样品保存液或增菌液等。,谢 谢 ！,；密码jnwsws,