02核酸的结构与功能.ppt

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1、第一章 核酸的结构与功能,主要内容：介绍核酸的分类和化学组成，重点讨论DNA和RNA的结构特征，初步认识核酸的结构特征与其功能的相关性；介绍核酸的主要理化性质和核酸研究的一般方法。,思考,核酸的结构与功能,第一节 核酸的研究历史和重要性 第二节 核酸的分类和基本结构单位核苷酸 第三节 DNA的分子结构 第四节 RNA的分子结构 第五节 核酸的某些理化性质及核酸研究常用技术 第六节 人类基因组计划简介,question,核酸分类和分布,脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）:遗传信息的贮存和携带者，生物的主要遗传物质。在真核细胞中，DNA主要集中在细胞核内，线粒体和

2、叶绿体中均有各自的DNA。原核细胞没有明显的细胞核结构，DNA存在于称为类核的结构区。 核糖核酸（ribonucleic acid, RNA）：主要参与遗传信息的传递和表达过程，细胞内的RNA主要存在于细胞质中。,核酸的研究历史和重要性,1869 Miescher从脓细胞的细胞核中分离出了一 种含磷酸的有机物，当时称为核素（nuclein）,后称为核酸（nucleic acid） 1944 Avery 等通过肺炎球菌转化试验证明DNA是遗传物质 1953 Watson和Crick提出DNA结构的双螺旋模型 1958 Crick提出遗传信息传递的中心法则 70年代 建立DNA重组技术 80年代以

3、后 分子生物学、分子遗传学等学科突飞猛进发展，实施人类基因组计划（HGP）,核酸的基本结构单位核苷酸,1 核酸分子中核苷酸的化学组成与命名 (1) 碱基、核苷、核苷酸的概念和关系 (2) 常见碱基的结构与命名法 (3) 常见（脱氧）核苷酸的基本结构与命名 (4) 稀有核苷酸 2 细胞内游离核苷酸及其衍生物,5-磷酸核苷酸的基本结构,（N = A、G、C、U、T）,H,H,(O)H,1,2,N,OH,CH2,H,H,5,4,3,P,O-,O,O,O-,碱基、核苷、核苷酸的概念和关系,Nitrogenous base,Pentose sugar,Phosphate,基本碱基结构和命名,嘌呤,嘧啶,

4、Adenine (A),Guanine (G),Cytosine (C),Uracil (U),Thymine (T),核苷酸的结构和命名,腺嘌呤核苷酸（ AMP） Adenosine monophosphate,脱氧腺嘌呤核苷酸（dAMP） Deoxyadenosine monophosphate,OH,H,常见（脱氧）核苷酸的结构和命名,鸟嘌呤核苷酸（GMP）,尿嘧啶核苷酸（UMP）,胞嘧啶核苷酸（CMP）,腺嘌呤核苷酸（AMP）,脱氧腺嘌呤核苷酸（dAMP）,脱氧鸟嘌呤核苷酸（dGMP）,脱氧胞嘧啶核苷酸（dCMP）,脱氧胸腺嘧啶核苷酸（dTMP）,几种稀有核苷酸,cAMP(cGMP)的

5、结构,Cyclic adenylie (Guanine)acid,核糖和脱氧核糖,细胞内游离核苷酸及其衍生物,多磷酸核苷酸 环核苷酸 辅酶类核苷酸。,腺苷酸及其多磷酸化合物,AMP Adenosine monophosphate,ADP Adenosine diphosphate,ATP Adenosine triphosphate,第三节 DNA的分子结构,一、 DNA 一级结构 二、 DNA的二级结构 三、 DNA的三级结构,DNA 的一级结构, DNA分子中各脱氧核苷酸之间的连接方式（3-5磷酸二酯键）和排列顺序叫做DNA的一级结构，简称为碱基序列。一级结构的走向的规定为53。不同的DN

6、A分子具有不同的核苷酸排列顺序，因此携带有不同的遗传信息。 一级结构的表示法 结构式，线条式，字母式 一级结构测定,DNA一级结构的表示法,DNA酶法序列分析的原理,酶反应,电泳方向,5,3,引物,dATPdCTPdGTPdTTP,+ddATP,dATPdCTPdGTPdTTP,+ddTTP,dATPdCTPdGTPdTTP,+ddGTP,dATPdCTPdGTPdTTP,+ddCTP,A C G T,DNA的二级结构,（1） DNA的双螺旋结构(Watson-Crick模型) DNA双螺旋结构特征及意义 （2） DNA双螺旋的多态性 （3）某些其它DNA螺旋结构 DNA回文结构 、 三股螺旋

7、,DNA的双螺旋结构的形成,DNA的双螺旋模型特点, 两条反向平行的多聚核苷酸链沿一个假设的中心轴右旋相互盘绕而形成。 磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架组成位于外侧，作为可变成分的碱基位于内侧，链间碱基按AT，GC配对（碱基配对原则，Chargaff定律） 螺旋直径2nm，相邻碱基平面垂直距离0.34nm,螺旋结构每隔10个碱基对（base pair, bp）重复一次，间隔为3.4nm,碱基堆集力 氢键 磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和,DNA的双螺旋结构稳定因素,DNA的双螺旋结构的意义,该模型揭示了DNA作为遗传物质的稳定性特征，最有价值的是确认了碱基配对原则，这是是DNA复制、转录

8、和反转录的分子基础，亦是遗传信息传递和表达的分子基础。该模型的提出是本世纪生命科学的重大突破之一，它奠定了生物化学和分子生物学乃至整个生命科学飞速发展的基石。,DNA双螺旋的不同构象,三种DNA双螺旋构象比较,A B Z,外型 粗短 适中 细长,螺旋方向 右手 右手 左手,螺旋直径 2.55nm 2.37nm 1.84nm,碱基直升 0.23nm 0.34nm 0.38nm,碱基夹角 32.70 34.60 60.00,每圈碱基数 11 10.4 12,轴心与碱基对关系,2.46nm 3.32nm 4.56nm,碱基倾角 190 10 90,糖苷键构象 反式 反式 C、T反式，G顺式,大沟 很

9、窄很深 很宽较深 平坦,小沟 很宽、浅 窄、深 较窄很深,DNA双螺旋构象的类型,A-DNA,DNA回文序列及几种结构形式,回文序列,发夹式结构,十字形结构,中心区域,DNA二级结构的多样性,Holliday结构,Southern印迹法,DNA分子,限制片段,限制性酶切割,琼脂糖电泳,转移至硝酸纤维素膜上,与放射性标记DNA探针杂交,放射自显影,带有DNA片段的凝胶,凝胶,滤膜,用缓冲液转移DNA,吸附有DNA片段的膜,DNA三链间的碱基配对,DNA分子间的三链结构,DNA的三级结构,在细胞内，由于DNA分子与其它分子（主要是蛋白质）的相互作用，使DNA双螺旋进一步扭曲形成的高级结构. 实例：

10、超螺旋 染色体（ chromosome） 病毒（virus）,DNA超螺旋结构的形成,核小体盘绕及染色质示意图,组蛋白与DNA的结合,真核生物染色体DNA组装不同层次的结构,DNA （2nm）,核小体链（ 11nm，每个核小体200bp）,纤丝（ 30nm，每圈6个核小体）,突环（ 150nm，每个突环大约75000bp）,玫瑰花结（ 300nm ，6个突环）,螺旋圈（ 700nm，每圈30个玫瑰花）,染色体（ 1400nm， 每个染色体含10个玫瑰花200bp）,噬菌体T2结构,DNA,动物病毒切面模式图,被膜（脂蛋白、碳水化合物）,衣壳（蛋白质）,核酸,突起（糖蛋白）,病毒粒,（DNA或R

11、NA）,第四节 RNA的分子结构,一、 RNA一级结构 和类别 二、 tRNA 的分子结构 三、 rRNA的分子结构 四、 mRNA的分子结构,RNA的一级结构,RNA分子中各核苷之间的连接方式（3-5磷酸二酯键）和排列顺序叫做RNA的一级结构,RNA与DNA的差异 DNA RNA 糖 脱氧核糖 核糖 碱基 AGCT AGCU 不含稀有碱基 含稀有碱基,RNA的类别,信使RNA（messenger RNA，mRNA）：在蛋白质合成中起模板作用； 核糖体RNA（ribosoal RNA，rRNA）：与蛋白质结合构成核糖体（ribosome）,核糖体是蛋白质合成的场所； 转移RNA（transfo

12、r RNA，tRNA）：在蛋白质合成时起着携带活化氨基酸的作用。,tRNA 的结构,二级结构特征： 单链 三叶草叶形 四臂四环,三级结构 特征： 在二级结构基础上 进一步折叠扭曲形成倒 L型,酵母tRNA Ala 的二级结构,3,5,tRNA的三级结构,rRNA的分子结构,特征： 单链，螺旋化程度较tRNA低 与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能,5sRNA的二级结构,mRNA的分子结构,原核生物mRNA特征： 先导区+翻译区（多顺反子）+末端序列 真核生物mRNA特征： “帽子”（m7G-5ppp5-N-3p）+单顺反子+“尾巴”（Poly A）,原核细胞mRNA的结构特点,真核细胞mRNA的

13、结构特点,第五节 核酸的某些理化性质及 核酸研究常用技术,一、 核酸的两性解离性质 二、 核酸的紫外吸收特性（max=260nm） 三、 核酸的变性、复性和分子杂交 四、核酸的熔解温度（Tm） 五、 核酸的沉降特性 沉降系数（s）的概念,DNA的紫外吸收光谱,天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值,1 2 3,DNA的变性过程,加热,部分双螺旋解开 无规则线团 链内碱基配对,核酸的变性、复性和杂交,变性：在物理、化学因素影响下， DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开，这是一个是跃变过程，伴有A260增加（增色效应）,DNA的功能丧失。 复性：在一定条件下，变性DNA 单链间碱基重新配对恢复双螺

14、旋结构，伴有A260减小（减色效应）,DNA的功能恢复。,分子杂交的原理示意图,不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间只要有碱基配对的区域，在复性时可形成局部双螺旋区，称核酸分子杂交（hybridization）制备特定的探针（probe）通过杂交技术可进行基因的检测和定位研究。实例：southern印迹法,Tm：熔解温度（melting temperature）,DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程中A260达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度，用Tm表示。 Tm的大小与DNA分子中（G+C）的百分含量成正相关，测定Tm值可推算核酸碱基组成及判断DNA纯度

15、。,1,2,3,第六节 DNA研究进展,一、人类基因组计划简介 （Human Genome Project，HGP） 二、DNA芯片技术简介 （DNA chip）,人类基因组计划简介 （Human Genome Project，HGP）,该计划是美国科学家在1985年率先提出，1990年正式启动。美、英、德、法、日先后参加了此项工作，1999年我国成为 HGP的第六个成员国。 HGP旨在阐明人类基因组DNA所具有的3109核苷酸的序列，发现所有的人类基因并阐明其在染色体上的位置，破译人类的全部遗传信息，使得人类第一次在分子水平上全面地认识自我。 到目前为止，已完成了人类基因组的框架图，测序的工

16、作已基本完成。 HGP的实施，揭开了生命科学新的一页，它可以造福于人类，但也面临的伦理的挑战。,HGP取得的成就, 完成了人类基因组工作草图绘制,揭示了人类基因组若干细节 基本上测定了人类基因组上的碱基序列 一些模式生物(果蝇、拟南介等)和作物（如水稻）基因草图绘制成功，测序基本完成 促进了生物信息学、蛋白质组学、糖组学的迅猛发展 人类基因组草图绘就，中国科学家功不可没,HGP面临的挑战, 基因的隐私权问题 基因资源问题 基因知识的滥用问题,DNA芯片技术简介,DNA芯片(DNA chip)技术是采用寡核苷酸原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针片段有序地固化于支持物表面上，产生二维D

17、NA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速、并行、高效地检测或诊断。 由于常用硅芯片作为固相支持物，且在制备过程中运用了计算机芯片的制备技术，所以称为DNA芯片技术。,人类将进入生物经济时代,基因操纵生命的工具 基因组潜藏着巨大的经济价值 基因技术21世纪的投资热点,谁掌握了人类基因图谱，就等于谁破译了人类的生命密码，获得了操纵生命的工具。 与互联网相比，网络只是对人类的信息沟通带来了巨大的革命，而基因领域的革命则能够从根本上改变人类的命运，基因工程所带来的商业机会将会大大超过网络。,肺炎球菌转化实验图解,光滑型细胞（有毒）,粗糙型细胞（无毒）,破碎细胞,D

18、NAase降解后的DNA,粗糙型细胞接受光滑型DNA,只有粗糙型,大多数仍为粗糙型,少数光滑型细胞被转化,S,S,R,R,R,+,DNA,沉降系数（S）,生物大分子在单位离心力场作用下的沉降速度称为沉降系数。即沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到达极限速度所需要的时间。其单位用Svedberg，即s表示，s=110-13秒。,沉降系数（S）与分子量（M）的关系,Svederg方程:,问答题,1、某DNA样品含腺嘌呤15.1%（按摩尔碱基计），计算其余碱基的百分含量。 2、DNA双螺旋结构是什么时候，由谁提出来的？试述其结构模型。 3、tRNA的结构有何特点？有何功能？ 4、DNA和

19、RNA的结构有何异同？ 5、嘧啶、核苷、核苷酸和核酸在分子结构上的关系 6、 E.chargaff定则的内容是什么？,1、有一DNA片段是pCTGGAC，另有两条片段互补，条对还是条对 pGACCTC pGTCCAG 因为DNA片段是53，互补就应该是从35，所以对。 2、如果Tm高，那么A+T的量是高还是低，Tm高说明G+C含量高，G+C三个H键熔解温度比A=T二个氢键的高。 3、DNA一个螺旋有几个碱基对？10个，若某DNA的分子量是3107，每一对碱基的分子量是670，问这DNA的长度是多少？要计算长度先必须算碱基对 一个碱基对上升高度是34A所以，3.444776=15.2210-4c

20、m,那么这一段有多少个螺旋?等于4478个螺旋.,填空题 1、tRNA的二级结构呈（ ）型。 2、DNA变性后，紫外吸收（ ）。 3、核苷由（ ）和（ ）组成。 4、维持DNA双螺旋稳定的作用力是（ ）。 5、 碱基当量定律： A =（ ）、G =（ ）。 6、 DNA的一级结构是指DNA中各种脱氧核苷酸之间的（ ）和（ ）。 判断题 1、核酸变性后其分子量也发生改变。 2、RNA主要分布于细胞核中。 3、稀有核苷酸主要存在于tRNA中。 4、DNA的三级结构呈倒 L 型。 5、原核生物的mRNA是单顺反子。 6、分子杂交只发生于不同分子的DNA之间。 7、B-DNA是反平行双链右手螺旋。 8、DNA链一级结构的读向是3 5,名词解释 变性和复性 分子杂交 增色效应和减色效应 Tm cAMP Chargaff定律,