血细胞分析自动化与形态学.ppt

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1、血细胞分析自动化 与形态学镜检,质量是科室的生命 质量是学科建设的根本 质量是科室管理的要素,学科建设永恒的主题质量,近年来，自动化仪器的应用不但提高了结果的精确度也提供新的参数。但由于对仪器的功能缺乏全面的了解及标本的大量增加而检验人员数量相对不足,忽视了形态学检查，影响了医疗质量。因此呼吁重视形态学检查，提高其基本技能是非常重要的,血形态学的检查的重要意义 形态学检查对于某些疾病是重要的诊断依据，对于某些疾病的鉴别诊断有重要的参考价值，对于某些疾病疗效的观察和预后估计有重要的临床意义。,一. 确诊白血病。 二. 贫血鉴别诊断的参考依据。 三. 了解疾病感染的程度。 四. 遗传性疾病血液依据

2、。,血涂片细胞形态学检查的意义,五. 提示血小板疾病。 六. 诊断血液寄生虫病。 七. 血液性分析仪质量的监控。,血涂片细胞形态学检查的意义,血细胞分析仪应用意义 1 提高血细胞技术精确性 2 增加了显微镜不能检测的参数 3 提供镜检细胞形态的筛选,仪器检测的镜检不能分析的参数,.红细胞体积分布宽度（） .血小板平均体积（） .网织红细胞“分群” .网织血小板计数 .红细胞直方图 6. 中性粒细胞平均体积 中性粒细胞体积分布宽度,红细胞体积分布宽度的临床意义,红细胞体积分布宽度（red blood cells volume distribution width 下称RDW）是反映周围血红细胞体

3、积异质性的参数，用所测单个红细胞体积的变异系数来表示（CV=SD/X也可用SD表示）。,红细胞体积分布宽度的临床意义,用于缺铁性贫血与轻型地中海的鉴别 有关缺铁性贫血的早期诊断与治疗 用于贫血的形态学分类(MCV/RDW) 某些慢性贫血的病因学分析,临床意义,红细胞体积分布宽度的临床意义,MPV测定的临床意义,鉴别血小板减少的原因：一般情况下，周围血小板破坏增多者MPV增高，骨髓损伤者血小板减少，MPV减低。,MPV测定的临床意义,估计出血倾向：大血小板代谢活跃，止血性也强，对胶原和凝血酶诱导血小板聚集期其速度及程度随MPV增加而增加。Eldor等发现有出血倾向的患者，MPV显著低于无出血倾向

4、者，即使严重血小板下降者，如MPV高于6.4fl，出血发生率也低。,解放军总医院,红细胞直方图的应用,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,解放军总医院,直方图的实用价值,VCS技术检测白细胞形态学参数临床价值,什么是VCS 技术？,VCS,什么是VCS 技术？,白细胞 VCS参数值表格,NE,LY,MO,EO,Volume 体积,Mean,平均值,Mean,平均值,SD,分布值,SD,分布值,Conductivity 传导性,平均值,Mea

5、n,平均值,Mean,分布值,SD,分布值,SD,Scatter 散射性,Mean,平均值,Mean,平均值,SD,分布值,SD,分布值,中性粒细胞VCS参数 在诊断急性细菌感染上的运用,白细胞总数增高，核左移，细胞大小差异增大,细胞大小不等,平均体积偏大,急性感染时白细胞形态学的改变,Dohle Body,Presence of band form,Toxic Granulation,Cytoplasmic Vacuolization,实验室数据 （Laboratory Data),Patients (N = 70) Controls (N = 35) Mean age (years) 52

6、 51 WBC ranges (L) 1,700 - 39,200 4,100 - 10,900 Mean WBC 12,700 6,930 Neutrophil (%) 29 to 97 47 to 76 Mean % 76 61,中性粒细胞体积平均值 Mean Neutrophil Volume (MNV) 中性粒细胞传导性平均值Mean Neutrophil Conductivity (MNC) 中性粒细胞散射性平均值Mean Neutrophil Side Scatter (MNS) ,中性粒细胞VCS参数,P = 0.001,P = 0.002,P = 0.23,MNV,MNS,MN

7、C,156,141,142,140,146,143,Group 1: WBC = 11,000, but = 15,000/uL,急性感染时白细胞大小差异增大,During acute infection, with increase in band or immature forms of neutrophils in circulation, the overall neutrophil population is expected not only to increase in volume or size, but also to become less homogeneous. Co

8、ulter LH700 series not only measures the mean cell Volume, Conductivity and Scatter, but also the Standard Deviation for each of these VCS parameters.,中性粒细胞体积大小分布值 Neutrophil Volume Distribution Width (NDW),既然感染时白细胞大小差异增大，那么中性粒细胞体积大小分布值 (Neutrophil Volume Distribution Width, NDW) 是否也能用于诊断急性细菌感染的指标？,

9、败血症病人和对照组粒细胞体积大小分布值 (NDW),中性粒细胞体积大小分布值 （NDW）,中性粒细胞体积大小分布值 (NDW)在急性细菌感染时也显著增大。,MNV和NDW在急性感染及败血症时显著增高。另一方面， MNS在急性感染及败血症时显著降低。 MNV 和NDW与杆状核计数，中性粒细胞绝对数 成正比。间接反映中性粒细胞核左移现象。,结 论,淋巴细胞VCS参数,在病毒感染以及淋巴细胞 疾病诊断上的运用,M Silva, et.al. Lymphocyte volume and conductivity indices ofthe haematology analyser Coulter_ G

10、EN.STM in lymphoproliferative disorders and viral diseases. Clin Lab Haematol 2006, 28:1-816, 2004.,Other LPDs: Mantle lymphoma, Splenic lymphoma, Hairy cell leukemia, Follicle lymphoma, Monoclonal diseases, Acute transformation of CLL, T-lymphoma Viral Diseases: Epstein Barr, Hepatitis A, Hepatitis

11、 B, Hepatitis C, Herpes, Cytomegalovirus, HHV8, IgM antidengue, BK virus urine, HIV+,淋巴细胞VCS结果,Using Laboratory Established Criteria, discrimination protocol was developed for directing smear review,Discrimination protocol,网织红细胞分群 临床价值,正常人红细胞九项分布图各指标正常参考范围,红细胞生成过程,骨 髓,血液,网织红细胞计数,网织红细胞检测的临床意义 检测参数 根据

12、细胞内RNA的多少分成代表网织红细胞不同成熟阶段的3“群”（HFR、MFR、LFR） 根据网织红细胞的形态学可检测MCVr、MCHr、MCHCr、CHr、RDWr、HDWr,网织红细胞检测的临床意义 有助于贫血的鉴别诊断 观察贫血的治疗效果 观察在肿瘤放疗和化疗过程中骨髓受抑或恢复的情况,网织红细胞分群在 IDA疗效观察的应用,10例缺铁性贫血患者治疗前后指标变化 RC HFR MFR LFR Hb MC 治 疗 前 1.2 1.1 12.0 86.9 70 60 第 三 天 1.4 6.3 24.9 68.8 71 60 第 五 天 3.5 0.4 7.1 92.4 84 63 第 七 天

13、1.0 1.2 8.9 88.1 100 74,Hb,RC,HFR,MCV,0%,治疗前,第三天,第五天,第七天,100%,200%,300%,400%,500%,600%,应用ADVIA观察了11例IDA患者网织红细胞“分群”变化结果显示给药后第三天,在Hb、MCV无变化之前HFR已有明显变化,显示其对IDA疗效的重要作用.,肿瘤患者化疗过程 网织红细胞动态变化,结果：化疗后骨髓造血功能明显受抑，白细胞、网红及血小板极度降低，其中中性粒细胞绝对数降至0.02109/L以下、网红绝对数降至10109/L以下，高荧光强度网红百分率和中荧光强度网红百分率(HFR%+MFR%)逐步降至最低水平或0，

14、网红分类几乎全部由低荧光强度网红(LFR)组成。造血功能开始恢复时高荧光强度网红和中荧光强度网红的出现或升高较中性粒细胞绝对数达到0.2109/L早4.5天（中位数）、达到0.5109/L早7.5天（中位数），较网红绝对数（RET#）达到正常范围低限早15天（中位数）。,结论：HFR+MFR可作为评价肿瘤病人化疗过程中骨髓造血功能开始恢复的较敏感指标。,用Bayer ADVIA120全自动血细胞分析仪对18例肿瘤病人在化疗过程中的白细胞血小板中性粒细胞绝对数和网红计数与分类进行了动态观察.结果为化疗后骨髓明显受抑;造血功能开始恢复时高荧光强度网红和中荧光强度网红的出现和升高较中性粒细胞绝对数达

15、到0.2x109/L早4.5天达到0.5x109/L早7.5天,较网红绝对数达到正常范围低限15天.显示HFR+MFR可作为评价肿瘤病人化疗过程中骨髓造血功能开始恢复的较敏感指标.,丛玉隆观察了15例自体移植网织红细胞数与白细胞数动态变化，结果表明15例移植后网织红细胞均较白细胞提前3-4天恢复。,骨髓移植网织红细胞的变化,自体移植后不同时期细胞减少症的分布曲线,网织血小板的临床意义,网织血小板的临床意义 鉴别血小板减少的原因 观察骨髓移植疗效 化疗停药后骨髓恢复的状况 观察ITP、TTP、DIC的疗效,IPF and thrombopoiesis,IPF in healthy volunte

16、ers and patients with thrombocytopenia or underlying diseases. The horizontal broken line indicates the mean+2SD.,Case :TTP,Day 0: day of the start of dosing,Solu medrol,1(g) day 0-2,(Day),PLT(x103/uL),100,200,300,-10,0,10,20,30,40,50,60,70,0,5,10,15,20,IPF(%),PLT,IPF (%),IPF(ref.),Case : Mini trans

17、plant Multiple Myeloma,分析仪白细胞分类 与镜检关系,1。镜检是细胞形态分析的最终手段 具有特异诊断意义的形态变化必须镜检 2.分析仪白细胞分类结果可为镜检提供筛选手段,提高效率,保证医疗质量,应用仪器筛选镜检的“筛选标准”概念,制定一定的标准，当仪器分析的结果达到制定的标准时，可视为仪器所得白细胞分群（类）结果能客观反映血象状况无须镜检反之，须近一步涂片镜检因此，合理的筛选标准的制定是正确使用仪器，保证结果质量的重要因素,应用仪器筛选镜检的“筛选标准”概念,不同档次仪器对白细胞分辨能力不同筛选标准也不同.三分群的仪器只是细胞大小的分群并不能辨别细胞的种类,只有在白细胞数

18、目和形态都正常时仪器分群的结果才能作为临床参考.因此,三分群仪器的标准是三系细胞计数均正常,直方图正常且无报警可无须镜检,直接报告分群结果,应用仪器筛选镜检的“筛选标准”概念,五分类仪器国内外没有统一的筛选标准. 2003年Houwan教授提出了83条的筛选原则, 使用库尔特高档五分类仪器检测血标本,涂片复检率在30%左右.2005年,WHO涂片复检协作组将83条简化为41条在15 个实验室使用四个型号仪器调查复检结果,复检率在2530% .,1.新生儿：复检条件：首次检测标本；复检要求：涂片镜检。 2.WBC、RBC、Hb、PLT、网织红细胞(Ret)：复检条件：超出线性范围；复检要求：稀释

19、标本后重新测定。 3.WBC、PLT：复检条件：低于实验室确认的仪器线性范围；复检要求：按实验室标准操作规程(SOP)进行。 4.WBC、RBC、Hb、PLT：复检条件：无结果；复检要求：检查标本是否有凝块，重测标本，如结果维持不变，用替代方法计数。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,5.WBC：复检条件：首次结果30.0109/L；复检要求：涂片镜检。 6.WBC：复检条件：3天内Delta值超限，并30.0109/L；复检要求：涂片镜检。 7.PLT：复检条件：首次结果1000109/L；复检要求：涂片镜检。 8.PLT：复检条件：Delta值超限的任何结果；复检

20、要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,9.Hb：复检条件：首次结果其年龄和性别参考范围上限20g/L；复检要求：涂片镜检，确认标本是否符合要求。 10.平均红细胞体积(MCV)：复检条件：24h内标本的首次结果105fl(成人)；复检要求：涂片镜检。 11.MCV：复检条件：24小时以上的成人标本105fl；复检要求：涂片镜检观察大红细胞相关变化，参如无大红细胞相关变化，要求重送新鲜血标本，如无新鲜血标本，报告中注明。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,12.MCV：复检条件：24h内标本的Delta值超限的任何结果；复检要求：

21、确认标本是否符合要求。 13.平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)：复检条件：参考范围上限20g/L；复检要求：检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集及球形红细胞。 14.MCHC：复检条件：22；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,12.MCV：复检条件：24h内标本的Delta值超限的任何结果；复检要求：确认标本是否符合要求。 13.平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)：复检条件：参考范围上限20g/L；复检要求：检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集及球形红细胞。 14.MCHC：复检条件：22；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41

22、条自动CBC和DC复检规则,1622条为白细胞分类的复检规则： 16.无白细胞分类计数(DC)结果或DC结果不全：复检条件：无条件复检；复检要求：人工分类和涂片镜检。 17.中性粒细胞绝对计数(Neut#)：复检条件：首次结果20.009/L；复检要求：涂片镜检。 18.淋巴细胞绝对计数(Lym#)：复检条件：首次结果5.0109/L(成人)或7.0109/L(12岁)；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,19.单核细胞绝对计数(Mono#)：复检条件：首次结果1.5109/L，(成人)或3.0109/L(2.0109/L。；复检要求：涂片镜检。

23、21.嗜碱粒细胞绝对计数(Baso#)：复检条件：首次结果0.5109/L；复检要求：涂片镜检。 22.有核红细胞绝对计数(NRBC#)：复检条件：首次出现任何结果；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,23条为网织红细胞的复检规则： 23.网织红细胞绝对计数(Ret#)：复检条件：首次结果0.10109/L。；复检要求：涂片镜检。 2441条为可疑提示的复检规则： 24.怀疑性报警不成熟粒细胞(IG)/杆状核中性粒细胞(Band)报警提示除外：复检条件：首次成人结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和D

24、C复检规则,25.怀疑性报警：复检条件：首次儿童结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。 26.WBC结果不可靠报警：复检条件：阳性报警；复检要求：确认标本是否符合要求并重测标本，如出现同样报警提示，检查仪器，如需要，进行人工分类。 27.RBC碎片：复检条件：阳性报警；复检要求：涂片镜检。 28.双形RBC：复检条件：首次结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,29.难溶性RBC：复检条件：阳性报警；复检要求：检查WBC直方/散点图，根据实验室SOP证实Ret计数是否正确，涂片镜检是否有异常形态的红细胞。 30.PLT聚集报警：复检条

25、件：任何计数结果；复检要求：检查标本是否有凝块，涂片镜检估计PLT数，如PLT仍聚集，按实验室SOP进行。 31.PLT报警：复检条件：除PIJ聚集外的PLT和MPV报警；复检要求：涂片镜检。 32.IG报警：复检条件：首次结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,33.IG报警：复检条件：WBC的Delta值超上限，有以前确认的阳性报警结果；复检要求：涂片镜检。 34.左移报警：复检条件：阳性报警；复检要求：按实验室SOP进行。 35.不典型和(或)变异Lym：复检条件：首次结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。 36.不典型和(或)

26、变异Lym：复检条件：WBC的Delta值超上限，有以前确认的阳性报警结果；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,37.原始细胞报警：复检条件：首次结果出现阳性报警；复检要求：涂片镜检。 38.原始细胞报警：复检条件：37天内WBC的Delta值通过，有以前确认的阳性报警结果；复检要求：按实验室SOP进行。 39.原始细胞报警：复检条件：WBC的Delta值超上限，有以前确认的阳性报警结果；复检要求：涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,40.NRBC报警：复检条件：阳性报警；复检要求：涂片镜检，如发现NRBC，计数

27、NRBC，重新计算WBC结果。 41.Ret：复检条件：散点/直方图异常；复检要求：检查仪器状态是否正常，如吸样有问题，重测标本，如结果维持不变，涂片镜检。,国际血液学复检专家组推荐的 41条自动CBC和DC复检规则,复片的方法,血片浏览manual scan of peripheral smear 对外周血片只作粗略的检查，如确认血小板计数，有无血小板或红细胞聚集，尾部有无大型，异常细胞 血片分类manual differential count 对外周血片作精确的白细胞分类 血片详查manual peripheral smear review 包括对外周血片的全片浏览和/或细胞分类计数，细

28、胞形态的详细观察,我国血细胞分析仪应用概况,近年来,检验医学的发展,国民经济水平的提高 五分类仪器迅速普及,约几十类型近千台.提高了工作效率和结果质量.但，也存在严重的管理和技术问题,突出的就是忽视血涂片细胞形态学检查,造成误诊.漏诊,甚至医疗事故.为此 1.加强标准化管理和质量监督 2.提高对形态学检查的认识和学术水平 3.建立各类仪器的筛选标准,培养人才是当务之急 1. 加强形态学重要意义的宣传，培植一批高素质检验队伍。 2. 建立和完善规章制度，标准化、规范化检验程序，尽快建立五分类仪器涂片复检标准并使技术人员正确理解和自觉执行。 3. 注重实践中总结经验、提高分析能力，善于用临床资料为

29、细胞学诊断提供依据。,规范管理与技术创新 加强细胞形态学检查分析前过程的质量管理，建立标准化、规范化程序，控制标本的采集、标本的保存和运送的条件和制片技术、染液中染料的质量、控制技术、染液等诸多影响被检染片质量的环节。 加强细胞形态学检查的创新工作，注重新技术在形态学检查的应用。,. 加强国内外学术交流，引进新的理 念、新思维、新技术 . 位相差显微镜、偏振光显微镜、荧光显微镜、电子显微镜的应用 . 细胞化学、免疫化学的应用 . 一般形态学与超微结构结合 . 多媒体显微成像系统应用与远程会诊 . 细胞形态学与免疫学、细胞遗传学、分子生物学检测相结合（MICM）。,规范管理与技术创新,小 结,自动化血细胞分析与血细胞形态镜检的作用是互补的. 两者操作程序密切结合及检 验结果相互确认是保证血液学检查质量的重要措施. 全自动血细胞分析仪流水线可能在这方面(特别是分析前质量管理)较大的帮助.尤其是标本量很大的实验室,谢 谢！,