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1、精品课程 项目三 培养基的配制,http:/ 机 盐,http:/ 机 物,碳水化合物：提供碳源和调节渗透压，主要是蔗糖。,维生素：以各种辅酶的形成参与多种代谢活动，对生长，分化等有很好的促进作用，常用的有 VB1和VB6。,天然复合物：促进某些愈伤组织和器官的生长，有椰子汁、香蕉泥、苹果汁等。,肌醇：促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成，对组织细胞繁殖、分化有促进作用。,氨基酸：是蛋白质的组成成分，为有机氮源，可直接被细胞吸收利用，培养基中常用的是甘氨酸。,http:/ 种类：NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲 哚丁酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用：促进细胞伸长生长
2、和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根。 浓度：0.055mg/L,http:/ 种类：GA3 作用：主要用于诱导离体芽的萌发和伸长。 注意：不耐热。,http:/ 种类： KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、 ZT(玉米素)、2ip(异戊烯氨基嘌呤) 作用：促进细胞分裂，诱导芽的形成和丛 芽产生. 浓度：0.0510.0mg/L,http:/ （5）乙烯： 乙烯对组织培养物的影响： 组培中植物组织会释放少量乙烯，对培养物的生长、胚的发生和芽的分化有抑制作用. 克服方法：1.降低培养基中蔗糖的浓度或用葡萄糖、麦芽糖代替蔗糖；2.在培养基中加入5-15mg/L的硝酸银也能控制乙烯的形成。
3、,http:/ 用量：610g/L 种类：琼脂粉 琼脂条 作用：固化作用,其它 玻璃纤维、滤纸桥、海绵等。,http:/ 养 基 类 型,完全培养基,初代培养基,继代培养基,固体培养基,液体培养基,基本培养基,诱导培养基,增殖和生根培养基,按营养水平,按培养阶段,按培养进程,按态相,http:/ 高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 含有一定数量的铵盐 营养丰富 不需要添加更多的有机附加物,http:/ 微量种类少 无肌醇,http:/ 使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果,http:/ 适合双子叶植物， 尤其木本植物组培。,http:/ 无机盐浓度较高,http:/ 硝酸钾和硫酸铵含量高 适
4、合花粉、花药培养,http:/ 场所：洗涤室 用品：水池、塑料盆、塑料桶、下水用过滤网，各种规格刷子。 2、洗涤液： 洗衣粉 洗洁精 高锰酸钾 稀盐酸 重铬酸钾+浓硫酸混合液 3、洗涤标准： 透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。,http:/ 水冲 洗 4-5次,晾干/烘干备用,已用过的培养器皿,新购置 培养器皿,1%稀HCl浸泡12h,污染瓶,高 压 灭 菌,http:/ 根据药品性质将母液配制成以下四类： （1）大量元素 可以混在一起配制成1020倍液，注意离子之间沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要分别单独配制充分溶解再放入母液中。,
5、http:/ 可配成100200倍混合母液。 （3）铁盐 硫酸亚铁和EDTA钠盐易沉淀，需单独配制，配成100200倍鳌合剂不易沉淀。 （4）有机化合物 维生素、肌醇、氨基酸等一起配成100或200倍液，也可分别配制。,http:/ IAA、IBA、GA等先溶于少量的95的酒精中，再加水定容。 NAA可先溶于热水或少量95的酒精中，再加水定容。 2，4-D可用少量0.1mol/L的NaOH溶解后，再加水定容。,http:/ 玉米素先溶于少量95的酒精中，再加热水到一定浓度。,3、药品用量的计算 配制母液时药品用量(mg)=配方用量(mg)浓缩倍数制备容量（L）,http:/ 菌,称取蔗糖、琼脂
6、,封 口,分 装,定 容,接 种,确定配方,四、培养基制作与灭菌,调PH值,流 程,http:/ 制备培养基时母液取用量（ml）=1000浓缩倍数制备培养基数量（L） 2、适量蒸馏水放入加热容器，蒸馏水应少于所制培养基数量，约终体积的2/3-3/4，接通电源加热。 3、向加热容器中加入称量好的琼脂。搅拌加热，至完全溶化。,http:/ 5、将母液混合液加入到加热容器中，搅拌混匀。 6、蒸馏水定容至所需体积。 7、测试培养基溶液的PH值，过高滴加0.1mol/L的HCL调整，过低滴加0.1mol/L的NaOH调整，调成pH值5.8左右。 8、迅速分装到培养瓶中，封口灭菌备用。,http:/ 一般采用的是高压湿热灭菌，要求压力0.105MPa（温度121）时,保持15-20分钟。 某些激素、维生素采用过滤灭菌。,http:/ 可保存36周，室温下两周内用完。,定期更新：不易长期保存。,http:/