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1、,1,第十二章 蛋白质的生物合成（翻译） Protein Biosynthesis, Translation,第一节 蛋白质生物合成体系 第二节 蛋白质生物合成过程 第三节 蛋白质合成后加工和输送 第四节 蛋白质生物合成的干扰和抑制,2,翻译的模板：DNA-原始模板 RNA-直接模板 翻译的场所：核蛋白体（细胞质） 翻译过程分为起始、延长、终止三个阶段。,概 述 翻译（translation）：即蛋白质的生物合成，就是将核酸中由 4 种核苷酸序列编码的遗传信息，通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的排列顺序。简言之，就是生物体以mRNA为模板合成蛋白质的过程。,3,第一节
2、蛋白质生物合成体系 原料：氨基酸 其它物质：三种RNA（mRNA、tRNA、rRNA） 各种酶和蛋白质因子 ATP和GTP 、无机离子等,4,遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子(cistron)。 原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质，为多顺反子(polycistron) 。 真核mRNA只编码一种蛋白质，为单顺反子(single cistron) 。,一、翻译模板mRNA及遗传密码,mRNA是遗传信息的携带者,5,6,7,mRNA上存在遗传密码,mRNA分子上从5至3方向，由AUG开始，每3个核苷酸为一组，决定肽链上某一个氨基酸或蛋白
3、质合成的起始、终止信号，称为三联体密码(triplet coden)。,起始密码(initiation coden): AUG,终止密码(termination coden): UAA，UAG，UGA,共个，其中个为有意义密码。,8,第 三 个 字 母,U C A G,9,开放读码框：从mRNA5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放读码框（open reading frame,ORF）。,10,遗传密码的特点： （一）连续性(commaless) 编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉，如mRNA
4、链上的碱基发生插入或缺失，可造成框移突变。 （二）简并性(degenecy) 遗传密码的简并性是指一种氨基酸有个或个以上的密码子为之编码的现象。 （三）通用性（universal） （四）摆动性(wobble) （图） 密码子与反密码子配对出现不严格遵守常见的碱基配对规律的情况，称为摆动配对（表12-2）,11,12,13,原核、真核核蛋白体的组成,14,15,三、tRNA与氨基酸的活化 （一）氨基酰-tRNA合成酶 tRNA的3末端-CCA-OH是氨基酸的结合位点，tRNA的功能是转运氨基酸。 1.tRNA携带氨基酸的反应如下:（氨基酸的活化） 此反应可分为两步完成： 氨基酸+ATP-E 氨
5、基酰-AMP-E+PPi 氨基酰-AMP-E+tRNA氨基酰-tRNA+AMP+E,氨基酸 + tRNA 氨基酰-tRNA,氨基酰-tRNA合成酶,ATP AMP+PPi,16,2.氨基酰-tRNA合成酶的作用特点 a. 对aa、tRNA两种底物有高度特异性; b.有校正活性，当发生错配时，可以水解酯键，再重新与正确的底物结合。 3.氨基酰-tRNA的书写 (1) 氨基酰-tRNA完整的写法是： ala-tRNAala；met-tRNAemet；fmet-tRNAfmet等。 (2) 各种氨基酰-tRNA的生成反应如下： gly + tRNAgly + ATP gly-tRNAgly + AM
6、P + PPi met+tRNAemet+ATP met- tRNAemet +AMP+PPi,17,（二）起始肽链合成的氨基酰-tRNA 密码子AUG为甲硫氨酸（Met）编码，同时作为起始密码。 与甲硫氨酸结合的tRNA，在真核生物中至少有两种：tRNAimet和tRNAemet ；原核生物的起始密码只能辨认甲酰化的甲硫氨酸，即N-甲酰甲硫氨酸（ fMet ）。,18,第二节 蛋白质生物合成过程 翻译过程分为起始、延长和终止三个阶段。 一、肽链合成起始 肽链合成起始阶段，是指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物的过程。需要起始因子（IF或eIF）和ATP、GT
7、P参与。 翻译的起始是mRNA能忠实翻译的关键步骤，也是调节蛋白质合成的部位。,19,（一）原核翻译起始复合物形成 (图12-3) 1. 蛋白体大、小亚基分离。 2.mRNA在小亚基定位结合； S-D序列：又称核蛋白体结合位点(ribosomal binding site,RBS)，是mRNA起始密码上游的一段富含嘌呤核苷酸的序列，该序列以AGGA为核心。（图12-2） 3.起始氨基酰-tRNA在小亚基上就位； 4.核蛋白体大亚基结合。,20,21,（二）真核生物翻译起始复合物形成 1.核蛋白质体大小亚基的分离； 2.起始氨基酰-tRNA结合； 3.mRNA在核蛋白质体小亚基的准确定;(图12
8、-4A) 4.核蛋白质体大亚基结合。（图12-4） eIF2是真核肽链合成调节的关键成分。,22,二、肽链的延长 肽链合成的延长是根据mRNA密码序列的指导,依次添加氨基酸从N端向C端延伸肽链,直到合成终止的过程。由于肽链延长在核蛋白体上连续性循环式进行，又称核蛋白体循环(ribosomal cycle)，每次核蛋白体循环肽链增加一个氨基酸。 需要延长因子、各种酶和GTP参与。 原核生物延长因子：EF-T（EF-Tu、EF-Ts） EF-G 真核生物延长因子：EF-1、EF-2,23,翻译延长因子,24,核蛋白体循环分三个步骤： 1.进位(entrance) 2.成肽(peptide bond
9、 formation) 3.转位(translocation) 核蛋白体阅读mRNA密码子的方向是53，肽链合成从NC端进行的。,25,需参与。,26,27,28,成肽反应在位上进行。,29,（三）转位 延长因子EF-G有转位酶活性，可结合并水解分子GTP，促进核蛋白体向mRNA的侧移动。,30,31,程,32,三、肽链合成的终止 当核蛋白体出现mRNA的终止密码后，多肽链合成停止，肽链从肽酰tRNA中释出， mRNA、核蛋白体大、小亚基等分离，这些过程称为肽链合成终止（termination）。 需要释放因子（RF）的参与。 原核生物RF：RF-1、RF-2、RF-3 真核生物RF：eRF,33,释放因子的功能： .识别终止密码，如RF-1特异识别UAA、UAG；而RF-2可识别UAA 、UGA 。 .诱导转肽酶改变为酯酶活性，相当于催化肽酰基转移到水分子OH上，使肽链从核蛋白体上释放。,34,IF,RF1 RF2 RF3,GTP,GDP+Pi,35,