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1、,第一部分 细菌真菌涂片检测 第二部分 细菌真菌培养鉴定 第三部分 细菌耐药性检测,一、MIC法、K-B法、E-test法药敏试验 二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读 三、2014年南方医院细菌种类及耐药性,第三部分 细菌耐药性检测,一、MIC法、K-B法、E-test法药敏试验,（一）MIC法药敏试验,MIC稀释法一般在琼脂或肉汤中将抗菌药物系列对倍稀释，定量接种待检菌， 35培养18至24小时后观察结果； 抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即最小抑菌浓度； MIC稀释法结果以MIC（g/ml）数值报告，数值越小越敏感，与K-B法相反；,MIC稀释法药敏检测,BD Phoenix 10
2、0 细菌自动鉴定及药敏分析仪,MIC稀释法药物浓度主要包括折点浓度，可以判断敏感、中介、耐药， 少数药物如亚胺培南、美罗培南、头孢他啶，万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等在判断敏感的基础上，又增加了一些低浓度，以利于合理选用药量， 不同抗生素判断的折点浓度不同，故不同抗生素之间的MIC值没有可比性。,MIC稀释法药敏检测,（二）K-B法药敏试验,KB法药敏试验基本原理,补充药敏板没有的抗生素，如头孢哌酮/舒巴坦。 含有定量抗菌药物的纸片，贴在已接种待检菌的MH平板上， 纸片中所含的药物，吸取琼脂中的水分溶解后，不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的药物梯度浓度。,KB法药敏试验基本原理,在纸片周围抑
3、菌浓度范围内，细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。 抑菌圈大小，反映待检菌对测定药物敏感程度。 不同抗生素有不同的判断标准，不同抗生素的抑菌圈大小没有可比性。,（三）E-test法药敏试验,E-test药敏检测,结合K-B法和稀释法的优点； 原理同稀释法检测，操作同K-B法简单； 试纸条上含干化、稳定、浓度由高到低呈指数梯度分布的某种抗菌药物。 补充鉴定药敏板没有的抗生素，如替加环素（老虎素）。,替加环素MIC Test Strip,从28冰箱中取出琼脂平板（江门市凯林贸易公司）。 从20冰箱中取出MTS测试条（替加环素MIC Test Strip ，0.016256g/ml，意大利liofi
4、lchem公司），美国辉瑞公司惠赠。 平衡至室温，半小时至1小时。,二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读,（一）CLSI要求药敏试验选取及报告抗生素 （二）南方医院药敏试验中选取抗生素 （三）CLSI药敏试验结果报告要求,（一）CLSI要求药敏试验选取及报告抗生素,（二）南方医院药敏试验中选取抗生素,氨基糖甙类：阿米卡星Amikacin、庆大霉素Gentamicin 1代头孢：头孢唑啉Cefazolin 2代头孢：头孢呋辛钠Cefuroxime sodium 3代头孢：头孢他啶Ceftazidime、头孢噻肟Cefotaxime 4代头孢：头孢吡肟（马斯平）Cefepime,单环-内酰胺类：氨
5、曲南Aztreonam 广谱青霉素类：氨苄西林Ampicilin、青霉素G Penicillin、苯唑西林Oxacillin 抗假单胞菌广谱青霉素：哌拉西林Piperacillin,复方-内酰胺类： 阿莫西林-克拉维酸（奥格门丁）Amoxicilin/clavelanate、 氨苄西林-舒巴坦（优力新）Ampicillin/Sulbactam、 哌拉西林-他唑巴坦（特治星）Piperacillin/Tazobactam、 头孢哌酮-舒巴坦（舒普深）cefoperazone/Sulbactam 碳青霉烯类：亚胺培南Imipenem、美罗培南Meropenem,多肽类：多粘菌素E Colistin
6、 E、替考拉宁Teicoplanin、万古霉素Vancomicin 唑烷酮类：利奈唑胺（斯沃 ）Linezolid 林可霉素类：克林霉素Clindamycin 大环内脂类：红霉素Erythromycin,氯霉素：氯霉素Chloramphenicol 三代喹诺酮：环丙沙星Ciprofloxaxin 、氧氟沙星Ofloxaxin 、左旋氧氟沙星Levofloxacin 四环素类：四环素Tetracycline 磺胺类：复方新诺明（甲氧苄唑-磺胺甲唑）Timethoprim/Sulfamethoxazole 利福平Rifampin,（三）CLSI药敏试验结果报告要求,临床和实验室标准化委员会标准（c
7、linical and laboratory standards of institute, CLSI） 敏感（susceptible，S） 是指菌株能被使用推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度所抑制，推荐使用。,中介（intermediate，I） 指抗菌药物MIC接近血液和组织中通常可达到的浓度，疗效低于敏感菌株。 还表示药物在生理浓集的部位具有临床效力（如尿液中的喹诺酮类和-内酰胺类），或者可用高于正常剂量的药物进行治疗（如-内酰胺类）。 另外，中介还作为缓冲区，以防止微小的、未受控制的技术因素导致较大的错误结果，特别是对那些药物毒性范围窄的药物。,耐药（resistant，R） 指
8、菌株不能被常规剂量抗菌药物达到的浓度所抑制， 和/或证明MIC或抑菌圈直径落在某些特殊的微生物耐药机制范围（如-内酰胺酶）， 在治疗研究中表现抗菌药物对菌株的临床疗效不可靠。,抗菌药物的作用靶位,耐甲氧西林葡萄球菌（methecillin resistance staphylococcus，MRS） CLSI规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）耐药：对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果。,产超广谱-内酰胺酶G-杆菌(extended spectrum-lactamase G- bacillus，ESBLs) 该酶水解青霉素、头孢菌素及单
9、胺类的超广谱-酶，主要由肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌、肠杆菌等细菌产生。,耐万古霉素肠球菌（VRE） 再用E-test法验证； 如发现VRE，则应注意对相应病人做好隔离，以防医院感染扩散。,耐碳青霉烯类G-杆菌 耐碳青霉烯肠杆菌科，超级细菌； 耐碳青霉烯不动杆菌和铜绿假单胞菌。,三、2014年南方医院细菌种类及耐药性,耐碳青霉烯酶肠杆菌科，超级细菌 菌株鉴定及药敏试验，均用两种不同方法复核； 应对相应病人做好隔离，以防医院感染扩散； 耐药机制主要是产碳青霉烯酶引起。,50株耐碳青霉烯不动杆菌替加环素MTS药敏结果,嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类抗生素天然耐药,一、MIC法、K-B法、E-test法药敏试验 二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读 三、2014年南方医院细菌种类及耐药性,第三部分 细菌耐药性检测,第一部分 细菌真菌涂片检测 第二部分 细菌真菌培养鉴定 第三部分 细菌耐药性检测,Thank you!,