第十四章-长期毒性作用及其试验方法.ppt

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1、2019/7/5,任立群,1,第十四章 长期毒性作用及其试验方法,long-term toxicity impact and test method,2019/7/5,任立群,2,第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法,2019/7/5,任立群,3,第一节,基 本 概 念 和 目 的,2019/7/5,任立群,4,长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。,一、定义,急性毒性试验 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小时内 多次给予受试药物后

2、，一定时间内所产生的毒性反应。,2019/7/5,任立群,5,长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别,2019/7/5,任立群,6,根据给药期限的长短，可分为：,亚慢性毒性试验给药期限不超过90天 或不超过试验动物平均寿命的10%； 慢性毒性试验给药期限超过90天 或超过试验动物平均寿命的10%； 终生毒性试验 数代毒性试验,2019/7/5,任立群,7,给 药 的 期 限 不 同,给 药 的 剂 量 范 围 不 同,长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别,2019/7/5,任立群,8,蓄积作用 (accumulation action) 当较长时间连续、反复给药时，或者说给药的时间间隔和剂量

3、超过机体消除药物的能力，就会出现药物进入机体的速度 (或总量) 超过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来，即蓄积作用。,2019/7/5,任立群,9,蓄积作用的表现形式,作用量积蓄 功能性蓄积,2019/7/5,任立群,10,给 药 的 期 限 不 同,给 药 的 剂 量 范 围 不 同,观 察 的 毒 效 应 不 同,长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别,2019/7/5,任立群,11,急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程,长期毒性试验重点观察体重、血液生化等量反应指标（量变质变）,2019/7/5,任立群,12,二、目的与意义,2019/7/5,

4、任立群,13,长期毒性试验的目的,2019/7/5,任立群,14,第二节,试 验 设 计 原 则 及 方 法,2019/7/5,任立群,15,一、一般原则和要求,基本原则,全面、严谨、合理,整体性,随机、对照、重复,2019/7/5,任立群,16,一、一般原则和要求,基本原则,整体性,长期毒性试验不能与药效学、药代动力性和其他毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其他药理毒理研究的试验设计和研究结果。长期毒性试验的结果应该力求与其他药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。,2019/7/5,任立群,17,一、一般原则和要求,选用两种实验动物,三个剂量,给药途径应与临床拟用途径相同,基本要求,2019

5、/7/5,任立群,18,一、一般原则和要求,至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。,选用两种实验动物,基本要求,2019/7/5,任立群,19,一、一般原则和要求,三个剂量,剂量至少分为高、中、低三个档次。,高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。,同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或已知药物毒性对照组。,基本要求,2019/7/5,任立群,20,一、一般原则和要求,给药途径应与临床拟用途径相同,口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每天12ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服入。 静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，

6、各剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。,基本要求,2019/7/5,任立群,21,理想动物的标准：,对受试物的生物转化与人体相近； 对受试物敏感； 已有大量历史对照数据。,二、实验动物,2019/7/5,任立群,22,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,2019/7/5,任立群,23,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,Wistar大鼠 SD大鼠,2019/7/5,任立群,24,我国药政部门规定的基本

7、原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗,2019/7/5,任立群,25,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。,如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。,2019/7/5,任立群,28,Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强 缺点：价格昂贵,2

8、019/7/5,任立群,29,2. 起始月(周)龄,一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。,二、实验动物,2019/7/5,任立群,30,2. 起始月(周)龄,二、实验动物,原因：,一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。,2019/7/5,任立群,31,啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药 大鼠起始周龄要求在 49周龄； 犬的起始月龄为49月龄，一般不超过 12 月 龄；如选用杂种狗，起始年龄可稍大些。,二、实验动物,2. 起始月(周)龄,2019/7/5,任立群,32,起始体重应在体重均值 20% 的范围内。,二、实验动物,2. 起始月(周)龄,2019/7/5,任立群,33,3

9、. 性别及数量,（1）性别,二、实验动物, 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。,2019/7/5,任立群,34,在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别的动物进行试验。,二、实验动物,3. 性别及数量,（1）性别,2019/7/5,任立群,35,超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。,90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只

10、）；,二、实验动物,3. 性别及数量,（2）数量,2019/7/5,任立群,36,超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。,90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；,二、实验动物,3. 性别及数量,（2）数量,指导原则：一般大鼠为雌、雄各30只， Beagle犬或猴各36只。,2019/7/5,任立群,37,恢复期观察的动物数； 给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。,注意,2019/7/5,任立群,38,4. 饲养管理,严格控制环境条件，

11、避免不必要的干扰因素是非常重要的。,二、实验动物,2019/7/5,任立群,39,酮症酸中毒,室内温度,饲料或饲料配方,湿 度,光 照,通风条件,饮水质量,4. 饲养管理,二、实验动物,2019/7/5,任立群,40,4. 饲养管理,二、实验动物,适宜温度为 1826 。 相对湿度为 40%70%。 光照宜持续 12 h明亮，12 h黑暗。 通风条件良好。 所用饲料应符合动物的营养标准。,2019/7/5,任立群,41,4. 饲养管理,二、实验动物,啮齿类动物,雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过5只,2019/7/5,任立群,42,酮症酸中毒,4. 饲养管理,二、实验动物,犬,单笼饲养，定量喂食

12、。 Beagle 犬实验前至少驯养 12 周; 杂种狗应先检疫，驱虫。,2019/7/5,任立群,43,试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图，检测心、肝、肾功能2次； 选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。,2019/7/5,任立群,44,雪貂作为实验动物的资料介绍，还在本世纪，虽 然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是 很重要的（北美常用）。,2019/7/5,任立群,45,雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的 雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄 貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为5至6年， 而整个寿命约14年。雄貂体重可为雌貂的两倍

13、。 雪貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟 和人类流感，对其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了 独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申 病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、 药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可 作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人 类相应的疾病。,2019/7/5,任立群,46,三、给药期限,按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的 给药期限一般为临床疗程的34倍时间。创新药品 试验周期应不少于90天， 超过180天的新药可以在 试验开始90天后，同时进行I期临床试验。,创新药物是指具有自主知识产权专利的药物。相对于仿制药，创新药物强调化

14、学结构新颖或新的治疗用途，在以前的研究文献或专利中，均未见报道。,2019/7/5,任立群,47,我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定,临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物 5天 2周 2周 2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月,2019/7/5,任立群,48,我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定,临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物 5天 2周 2周 2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月,每天给药最好固定时间。,2019/7/5,任立群,

15、49,四、剂量水平的选择,三个剂量组是必不可少的： 一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死亡率应控制在 10% 以内； 一个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物有效剂量或临床治疗量的23倍)； 为表明毒性作用的量效关系，在上述两个剂量之间插入一个(或多个)中间剂量。,2019/7/5,任立群,50,亚慢性毒性试验基础,最大剂量：选择90天试验中体重增长不到10%的剂量； 中剂量：1/4最大剂量； 低剂量：1/8最大剂量。,2019/7/5,任立群,51,最高剂量组的基本要求,仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命， 或至少在给药的前四分之一时间内不影响动物的体 质，外观无异常，可有血清酶

16、活力的改变或轻度体重 增长抑制（10%）。,2019/7/5,任立群,52,在选择合适的剂量时还应考虑到： 药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用； 药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。 药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,根据急性毒性的LD50值决定三个剂量。一般在大鼠 3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采 用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组

17、可采用 大鼠相应各组的1/21/3剂量。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒性的量效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动物等，先过渡到7天至21天的短期蓄积性试验，再将获得的参数外推于长期毒性试验。,急性毒性试验,蓄积毒性试验 和/或 7天短期重复给药试验,90天重复给药试验,180天或更长期重复给药试验,2019/7/5,任立群,56,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量 根据大鼠的急性毒性试验找出最大无症状剂量，再分

18、别以该剂量及其1/3和1/10量给三组大鼠（雌雄各半）连续服药23周。（此剂量下的动物仅出现轻微的毒性反应，如食耗量略减，体重增长率略慢等）,2019/7/5,任立群,57,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量,第二步：确定犬亚急性毒性试验的最高剂量 以大鼠亚急性毒性试验的最高剂量为起点，给狗单次服用，根据观察结果适当增减剂量（对数间隔），找出狗单次服药的最大无症状剂量，再分别以此剂量及其1/3和1/10量给少数狗连续服药23周。,2019/7/5,任立群,58,可供参考的具体方法

19、,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,2019/7/5,任立群,59,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首

20、次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。,2019/7/5,任立群,60,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。,MTD = lg-1(lg最小致死剂量+lg最大非致死剂量)/2,2019/7/5,任立群,61,可供参考的具体方法,（1）半数

21、致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,Weil法,取初断乳大鼠30或40只，随机分为34组，每组雌雄各5只。连续给药7天。,观察死亡率、体重、肝肾指数和进食量的改变。找出7天药物最小有效量（MIE）。,MIE 90天 = MIE 7天/6.2,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学（MBS）法,根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD） 大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的1.0 、3.36.6 和1020 MCD; 狗一般可采用大鼠1/21/3的剂量。,注意：国内

22、应用不多。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学（MBS）法,根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD) (最大无症状剂量) 大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及1/10 MTD； 狗和猴可采用大鼠1/21/3的剂量。,（4）最大耐受量（MTD）法,注意：蓄积性大的药物参考价值小。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学（MBS）法,根据临床拟用剂量（3个月长期毒性试验） 大鼠低、中、高三个剂量可分别采用50100倍、2550倍和 1020倍临床拟用剂量 狗可分别采用30

23、50倍、1525倍和510倍临床拟用剂量 猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验,（4）最大耐受量（MTD）法,（5）临床拟用剂量（ACD）法,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学法（MBS法）,根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数扩大。,（4）最大耐受量法（MTD法）,（5）临床拟用剂量法（ACD法）,（6）等效剂量法,2019/7/5,任立群,66,不同动物的剂量折算系数,动物种属 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 猫 猴 狗 人 标准 K(剂量折算系数) 1 7 12.3 27.5 29.7 64 124 388 体重 K(kg

24、体重剂量折算系数) 1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.32 0.21 0.11 任何 R(动物体型系数) 0.059 0.09 0.099 0.093 0.082 0.111 0.104 0.1 体重 W(标准体重kg) 0.02 0.2 0.4 1.5 2 4 12 70 注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R 值的1000 倍，如小鼠R 为59，大鼠R 为90，这不影响药物剂量的折算。,2019/7/5,任立群,67,对于标准体重的动物：,KA，KB，RA，RB 值由上表查找,2019/7/5,任立群,68,对于任何体重的动物：,式中DB、dB 分别是欲计算的B 种动

25、物的每只剂量及公斤体重剂量，DA、dA 分别是已知A 种动物的每只剂量及公斤体重剂量，WA、WB 是已知动物体重，RA、RB 是体型系数，可由上表查得。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学法（MBS法）,（4）最大耐受量法（MTD法）,（5）临床拟用剂量法（ACD法）,（6）等效剂量法,2019/7/5,任立群,70,五、给药方法,长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床使用的途径相一致。,临床用药途径为静脉或肌注时，3个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。,临床用药途径为口服时，可采用口服、灌胃

26、或片剂、胶囊给药，也可混于饲料中给予。,2019/7/5,任立群,71,五、给药方法,灌胃给药可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过 12ml/100g 体重/天。,优点：给药剂量精确； 时间易于掌握； 从药动学角度出发符合临床给药的实际情况。,缺点：技术要求高（误入气管）； 属外界刺激。,2019/7/5,任立群,72,五、给药方法,混于饲料给药则需计算食耗。,食 耗：从断奶至成年期食耗不同。 药物量：要求每周或每两周根据各组动物的平均体重 进行调整。,灌胃,2019/7/5,任立群,73,预计动物体重（W）,W3rd = W2nd+ 1/2(W2nd- W1st),预

27、计食耗（FC）,FC3rd = FC2nd+ 1/2(FC2nd- FC1st),预计食耗率（R）,R3rd = FC3rd/W3rd =g饲料/kg体重/动物/天,预计药物浓度（C）,2019/7/5,任立群,74,注意事项,药物在饲料中的含量不应超过5%；,药物的异味,对饲料进行阶段性检查，确保药物在饲料中的稳定性。,饲料抽样：新鲜配制 存放一定时间,2019/7/5,任立群,75,五、给药方法,混于饲料,稀释剂：惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、 白陶土、碳酸钙、磷酸钙。,灌胃,胶囊或片剂给药，将受试物与稀释剂混合。,明胶胶囊，（赋型剂）片剂,2019/7/5,任立群,76,五、给药方

28、法,一般情况：长期毒性试验均强调每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月）的药物每周至少应给药6天。,给药频率,特殊情况：参考体内代谢速度。,2019/7/5,任立群,77,六、观察及测定指标,试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观 察，非啮齿类动物至少应驯养观察12周，应对 动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。,试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的 观察。,试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察 试验，其观察期时间一般不超过28天（可逆性）。,2019/7/5,任立群,78,（一）日常观察,1. 一般观察内容 包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道 ( 及其分

29、泌物 ) 、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和 肢体活动情况以及精神行为进行仔细地观察；对动物粪 便的量、色泽和内含物，散失的食物，饮水瓶中残余的 水以及一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象，都 必须加以注意。所有出现的症状都必须记录在案。,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,79,1. 一般观察内容,如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖 检，以减少组织自溶。将组织置于 10% 的中性福尔 马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖检不能立即 进行，则必须将动物冷藏起来以延缓组织自溶 。,（一）日常观察,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,80,1. 一般观察内容 对濒死的动物也应

30、立即处死作尸体剖检。,（一）日常观察,尸体剖检后行组织病理学检查、评价。,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,81,2. 生长率,（一）日常观察,观察及测定指标,食耗量 饮水量 体重,低毒药物的毒性表现,2019/7/5,任立群,82,（一）日常观察,观察及测定指标,3.食耗 食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响 食耗的计算,将加入供食器具中饲料的重量减去剩余的饲料重量再除以给食天数,2019/7/5,任立群,83,将给药组和对照组的食耗加以比较，有助于说明药物是否影响实验动物的食欲。 （吸收、合成代谢）,（一）日常观察,观察及测定指标,3.食耗 食耗常用来评价给药对食欲及食物利用

31、率的影响 食耗的计算,2019/7/5,任立群,84,（二）测定指标,1. 器官重量,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,85,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官,脑 肝脏 肾上腺 脾脏 附睾 子宫,心脏 肾脏 胸腺 睾丸 卵巢 肺脏,观察及测定指标,目的：确定靶器官,甲状腺、 前列腺,长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官：,脑（大脑、小脑、脑干） 垂体 甲状腺 食管 胃 肝脏 肾脏 脾脏 气管 主动脉 附睾 卵巢 前列腺 坐骨神经 眼（眼科检查发现异常时） 给药局部 淋巴结,脊髓 胸腺 甲状旁腺 唾液腺 小肠和大肠 胆囊 肾上腺 胰腺

32、 肺 心脏 睾丸 子宫 乳腺 膀胱 视神经 骨髓,注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官,2019/7/5,任立群,87,器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良； 器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱导变 化或新生物等。,将动物处死后取出上述器官，除去附着的组织、除 尽余血后立即称重（注意勿使组织干燥）。,（二）测定指标,观察及测定指标,1. 器官重量,2019/7/5,任立群,88,2. 血液学,（二）测定指标,常规的血液学参数 骨髓涂片,观察及测定指标,1. 器官重量,2019/7/5,任立群,89,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,血液学指标,红细胞计数 红

33、细胞容积 平均红细胞血红蛋白 网织红细胞计数 血小板计数,血红蛋白 平均红细胞容积 平均红细胞血红蛋白浓度 白细胞计数及分类 凝血酶原时间,红细胞压积,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,90,血液学指标观察时间 非啮齿类动物一般于整个试验周期中每隔 1.5 2 个月采血测定一次各项指标。 啮齿类动物 试验周期为 6 个月时，可于试验中期、试验末 期以及恢复期分别剖杀部分动物 ( 约 1/4 、 2/4 、 1/4)，进行各项检查； 试验周期为 3 个月时，可于试验未期以及恢复 期分别剖杀部分动物 ( 约 2/3、1/3)，取血检查。,（二）测定指标,观察及测定指标,2019/7/5,任

34、立群,91,3. 血液生化学,注意事项： 采血时从各组中随机捉取动物，样本不能溶血、凝血 使用足够数量的动物 采样前禁食 12 小时 使用合适的统计学分析方法，注意剂量反应关 系；将所得资料和数据与同种、同龄、同性别、 同生理状况的实验动物的资料加以比较分析,（二）测定指标,观察及测定指标,2. 血液学,1. 器官重量,2019/7/5,任立群,92,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,血液生化学指标,天门冬氨酸氨基转换酶 碱性磷酸酶 尿素氮 总蛋白 血糖 总胆固醇 谷氨酰转移酶 氯离子浓度,丙氨酸氨基转换酶 肌酸磷酸激酶 肌酐 白蛋白 总胆红素 甘油三酯 钾离子浓度 钠离子浓度,观察及测定

35、指标,2019/7/5,任立群,93,3. 血液生化学,（二）测定指标,4. 尿液分析,观察及测定指标,2. 血液学,1. 器官重量,2019/7/5,任立群,94,尿液分析指标,尿液外观 pH值 尿蛋白 尿胆原 潜血,比重 尿糖 尿胆红素 酮体 白细胞,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,观察及测定指标,2019/7/5,任立群,95,七、恢复期观察,最后一次给药物后24小时，每组活杀部分动物检 测上述各项指标，留下1/31/4动物进行恢复期观察。 观察期一般不超过28天，而后再活杀检查上述所有指 标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性 毒性反应。,2019/7/5,任立群,96,

36、综合评价,长期毒性试验是药物非临床安全性研究的有机组成部分，是药物非临床毒理学研究中综合性最强、获得信息最多和对临床指导意义最大的一项毒理学研究。对其结果进行评价时，应结合受试物的药学特点，药效学、药代动力学和其他毒理学研究的结果，以及已取得的临床研究的结果，进行综合评价。,2019/7/5,任立群,97,本章学习要点,掌握相关基本概念、长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别、长期毒性试验设计的基本原则（总原则）、给药期限及恢复期观察 熟悉试验设计的一般原则和要求、剂量水平的选择及给药方法 了解慢性毒性试验的目的和意义、实验动物的选择、长期毒性试验的观察及测定指标,2019/7/5,任立群,98,本章复习,长期毒性试验；蓄积作用 长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异 蓄积作用的表现形式有几种？ 我国药政部门对长期毒性试验动物数的要求 长期毒性试验时检查脏器指数的器官包括哪些？ 恢复期观察 剂量水平的选择有哪几种具体方法参考？,2019/7/5,任立群,99,本章复习,长期毒性试验的目的和意义。 长期毒性试验的基本原则、基本要求？ 如何确定长期毒性试验的试验期限？,