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1、光度分析法测定甘薯粉中 的糖类含量 （教材150页）,吴清洲,一、实验目的,1了解糖的基本性质和作用 2掌握比色法定量分析的原理和方法 3掌握分光光度计的基本构造及其使用方法,二、实验原理,还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(果糖)的单糖以及某些双糖(乳糖、麦芽糖）。 没有还原性的双糖、寡糖和多糖通过盐酸水解生成具有还原性的单糖。 还原糖还原3，5-二硝基水杨酸（浅黄色）成红棕色的氨基化合物(在520 nm处有最大吸收 )。,分光光度法,又称比色法，是基于物质分子对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。不同物质对不同波长的光具有选择性吸收。物质对光的吸收程度用吸光度A表示，其定义为： Al
2、og（It/I0) 根据朗伯比耳定律可知，Abc 式中：A，吸光度，无量纲； b，液层厚度(即光程长度或比色皿厚度)，cm； c，溶液的浓度， mol /L ； ，称为摩尔吸光系数，L/(molcm)，仅与入射光波长、溶液的性质及温度有关，与浓度无关。在一定实验条件下，Akc，即吸光度与浓度乘正比。 (ebuxilong),三、实验要求掌握的知识点,比色法测定的基本原理；标准曲线法；移液管的使用。,实验步骤 （含量低未做）,称1.00克甘薯粉于大试管中，加入一滴管水，调成糊状。再加入30mL去离子水，搅匀，置于50水中加热30min，过滤，用少量水洗涤残渣。滤液 100.00mL 移取2.00
3、mL于比色管中，按标准曲线步骤进行加DNS、加热15分钟发色处理。,实验步骤 （每人自己做）,称0.20克(0.180.20克)甘薯粉于大试管中，加入一滴管水，调成糊状。再加入10mL 6mol/L的HCl和 14mL去离子水，搅匀，置于100水中加热30min，水冷，滤纸过滤入容量瓶，并用少量水三次洗涤试管和滤纸。加一滴酚酞，滴加6mol/L NaOH溶液至微红色，滤液定容至 100.00mL。 移取0.50mL于比色管中，加入去离子水2.50mL，加入2.00mL的DNS试剂。 (以下按标准曲线步骤同时进行),实验步骤 （同组合作）,取7支比色管，分别加入0.00、0.40、0.80、1.
4、20、1.60、2.00、2.40mL 0.50mg/mL葡萄糖标准溶液。 加入去离子水至总体积为3mL。 加入2.00mL的DNS试剂。 混匀后置于100恒温水浴加热15分钟，中途翻动一次，立即水冷至室温。(7支标样+每人一个样品，共有9支管一起加热冷却) 水稀至25.00mL的刻度。,仪器测定,波长520nm，1cm比色皿。 以试剂空白溶液为参比，调零。 每个样品先倒一点溶液润洗比色皿，后倒八分满，用擦镜纸擦拭净比色皿镜面，放入仪器读取吸光度。 每一组只能用一套比色皿测定。,数据处理要求,必须要有表格、标准曲线、计算步骤和公式，不能仅有结果。,实验注意事项,1移液管专用； 2两人合作绘制标准曲线，每人各做一个总糖测定。 3为了得到比较好的实验结果，实验时注意严格控制反应的温度和反应时间，尽可能保证相同的反应时间。两人的九支比色管同时加热，并过程中间有翻动最好。,d 移液管的操作方法 1)量取时,使用食指按滴定管的管口 2)调节液面时,滴定管下端离开液面,眼睛平与刻度平视(垂直、靠壁、成45度角 3）放液时，同样垂直、靠壁、成45度角 待溶液流尽，停1015秒，并靠壁转一圈。,移液管的操作,其 它,做完实验，清洗玻璃仪器，整理实验台。 实验报告上交，查预习报告。 本次实验的值日生： 第三排。 下次实验在203室： 果菜中维生素C含量的测定,谢谢大家！,