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1、维生素C的定量测定,定量测定维生素C的方法,一.氧化还原法 1. 直接碘量法 2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法 二.分光光度法 1. 紫外快速测定法 2. 2,4-二硝基苯肼法 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 三.光电比浊法 四.电化学法 五.荧光分析法 1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定 ,直接碘量法定量测定维生素C的原理,维生素c分子中含有烯二醇基，易被I2定量氧化成含二酮基的脱氢维生c，故可用直接碘量法测定定含量。 从上式可以看出，在碱性条件下有利于反应向右进行，但维生素c的还原性很强，在碱性环境中易被空气中的O2氧化，故滴定时加一些HAc使滴定在弱酸性溶液
2、中进行，以减少维被空气氧化所造成的误差。,2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的原理,维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色 。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。,还原型抗坏血酸,氧化型脱氢抗坏血酸,2，6二氯酚靛酚（红色）,还原型2，6二氯酚靛酚（无色）,H,H,维生素C的2，6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原
3、性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。,紫外快速测定法定量测定维生素C的原理,光电比浊法的原理,在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应.1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒.在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液.当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比.将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸.,荧光分析法的原理,用
4、酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物.样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成 硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺生成荧光化合物.这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正.,碘量法定量测定维生素C,（1）配制0.05moll-1I2标准溶液 称取6.5g I2和12.5gkI, 置于小研钵中,加水少许,研磨至全部溶解后移入棕色瓶中,加水500ml,摇匀后避光阴凉处放置过夜。 （2）标定I2溶液浓度 吸取25.00ml I2溶液置于250ml锥形瓶中,加水50ml,用标定过的Na 2S2O3标准溶液滴定
5、至浅黄色后,加入0.2%淀粉溶液2-4滴,继续用Na2S2O3溶液滴定至蓝色恰好退去,根据下式计算I2溶液的浓度。,（3）维生素c含量的测定 准确称取约0.2g维生素c,放入锥形瓶中,加入新蒸过的蒸馏水50ml2 moll-1HAc使其溶解,加淀粉指示剂1ml,立即用I2标准溶液滴定至浅蓝色,按下式计算维生素c的含量 维生素C含量=c(I2)*V(I2)*M(维生素C)/S样,二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C,一、试剂 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 标准抗坏血酸溶液（1mg/ml）: 准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁白色
6、，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。,二、材料 苹果、卷心菜等。 三、器材 锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏斗，滤纸，微量滴定管（5ml），容量瓶（100ml，250ml）。 四、提取 水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20g，加入20ml 2%草酸，用研钵
7、研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至50ml。 五、标准液滴定 准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。,六、样品滴定 准确吸取滤液两份，每份10ml, 分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同前。另取10ml 1%草酸作空白对照滴定。 七、计算 式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均
8、毫升数； C为样品提取液的总毫升数； D为滴定时所取的样品提取液毫升数； T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数; W为待测样品的重量（g）。,紫外快速测定法定量测定维生素C,一、材料、仪器与试剂 （一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。 （二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml, 25ml）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。 （三）试剂 110%盐酸：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。 21%盐酸：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。 31mol/L氢氧化钠溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。,二、操作步骤 （
9、一）标准曲线的制作 1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100ug/ml。 2. 标准曲线的绘制,3消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（ug）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。,二）样品的测定 1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1%盐酸，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄 清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）
10、来消除。 2样品的测定：取0.1-0.2ml提取液，放入盛有0.2-0.4ml 10%盐酸的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。 3待测碱处理液的制备：分别吸取0.1-0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.6-0.8ml 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.6-0.8ml 10%盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其消光值。,4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。 5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算
11、出样品的维生素C的含量。 四、计算 V总 Vc的含量（g/g）= V1W总 式中：从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（g） V1测消光值时吸取样品溶液的体积（ml） V总样品定容体积（ml） W总称样重量（g）,关于维生素C的常识,维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。 维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。,补 维 生 素 C !,要不就这样了 !,谢谢欣赏,主要参考资料 维生素及其分析方法 聂洪勇等著 上海：上海科学技术文献出版社 维生素手册 英)J.玛克斯著；郑昌学等译 北京：科学普及出版社 癌与维生素C (美)鲍林, (美)卡梅伦著；王艳茹, 王文仲译 北京：科学普及出版社http:/