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1、邻二氮菲分光光度法测铁,一、实验目的,学习分光光度法主要测量条件的选择。 掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法。 了解721型（或其他型号）分光光度计的构 造和学习使用方法。,二、实验原理,分光光度法测定物质含量时的主要测量条件是通过吸收曲线的测绘而选择的入射波长。 邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的试剂，反应式如下：,配合物,lgK稳 =21.3，摩尔吸光系数(510)=1.1104,测定时pH=5较适宜。酸度高时，反应速度慢，酸度太低，亚铁离子易水解，影响测定。,三、仪器与试剂,仪器：722（或其他型号）型分光光度计、容量瓶、吸量管。,100mg/ml铁标准溶液、10 mg/ml铁标准溶液、
2、10%盐酸羟胺（临时配置）、0.1%邻二氮杂菲溶液（新配置）、1mol/L醋酸钠溶液、铁未知液。,四、实验操作步骤,110 ug/mL铁标准使用液和水样的配制 用移液管移取100 ug/mL的铁标准储备液10.00 mL，置于100mL容量瓶中，加入2 mL 6 molL HCl，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。,2标准系列的配制 用刻度移液管分别移取上一步骤配制的铁标准使用溶液（10ug/mL）：0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL依次放入7只50mL容量瓶中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1.0 mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液2.0 mL及Hac-NaAc缓冲溶液
3、5 mL，稀释至刻度，充分摇匀。,四、实验操作步骤,3.测量条件实验吸收曲线的测绘： 取上述标准系列中铁标准溶液用量为6.0 mL的显色溶液，在分光光度计上，从波长440nm开始，以含铁标准溶液为0.0 mL的试液为参比，每隔20nm测定一次吸光度A值。当临近最大吸收波长附近时应每间隔510nm测定一次A值。 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标制出吸收曲线，从吸收曲线上确定最大吸收波长（ max ).,A,4.铁含量的测定,标准曲线的绘制：,10 mg/ml铁标准溶液,参比 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml,以不加铁标准溶液的试液为参比液，上一步骤所选择的最大吸收波长为测定波长，依
4、次测定标准系列中各溶液的吸光度A值。,以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。,5水样微量铁的测定 准确移取510mL（以所测吸光度在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按同样步骤和方法测定吸光度A值。在标准曲线上查出所含铁的浓度，计算水样中铁的含量。,五、结果与数据处理,1.吸收曲线的绘制：,将各波长及相应的吸光度列出，用坐标纸绘制吸收曲线。吸光度最大时相应的波长即为最大吸收波长，并在图上标出。,A, max,以铁含量为坐标，吸光度为纵坐标在坐标纸上绘制标准曲线； 由未知液的吸光度在标准曲线上查出5ml未知液中的铁含量； 计算每毫升未知液中含多少克铁。,SP-72型可见分光光度计,
5、SP-72型分光光度计 1仪器性能的检查 （1）接通电源，让仪器预热至少二十分钟，使仪器进入热稳定工作状态。 （2）仪器接通电源后，即进入自检状态。显示器实时显示仪器的自检状态。当仪器发生故障时，显示器会自动显示故障位置。自检结束，仪器自动寻找光源最大能量，查找完毕，仪器自动停留在546nm处，并自动调100%T和0%T。显示器上显示546nm和“100.0%T”。仪器此时进入测试状态。,2使用方法 （1）按“方式键”（Mode）将测试方式设置为吸光度方式。 （2）按“波长设置”键设置想要的分析波长，如340nm。 （3）将参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中。注意比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约2.5毫升；被测试的样品中不能有气泡和漂浮物。 （4）打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。注意：一般情况下，参比样品放在样品架的第一个槽位中；仪器所附的比色皿，其透视率是经过测试匹配的，未经匹配处理的比色皿将影响样品的测试精度；比色皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕迹。 （5）将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零吸光度。 （6）将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示的是被测样品的吸光度数值。,