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1、徐州医药高等职业学校毕 业 论 文题 目： 利培酮分散片溶出度测定方法的建立 学生姓名 学 号 专 业 化 学 制 药 技 术 班 级 07高职化学制药（1） 实习单位指导教师 学校指导教师 实习地点 徐州恩华一分厂 2011 年 06 月23目 录摘要 1第一部分 实验部分 11.1 样品来源 11.2 测定方法 11.3 主要仪器与试剂 2第二部分 实验步骤与结果 22.1 溶出度检测波长的确定 22.2 空白辅料对溶出度测定的干扰 42.3 溶出介质的选择 52.4 溶出转速的选择 82.5 利培酮分散片溶出度测定的线性范围 92.6 利培酮分散片溶出度测定的回收率试验 102.7 溶出
2、度测定的中间精密试验 112.8 溶出度测定的重复性试验 122.9 溶出度测定溶液的稳定性试验 132.10 溶出均一性曲线 142.11 溶出度测定结果 18第三部分 讨论 19第四部分 结论 20参考文献 21利培酮分散片溶出度测定方法的建立摘 要目的：建立高效液相色谱法测定利培酮分散片溶出度。方法：采用HPLC法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18液相色谱柱，规格为：250mm4.6mm，5m；流动相：甲醇-0.04mol/L醋酸铵溶液（用醋酸调节pH到3.0）（50：50）；检测波长：274nm；流速：1.0ml/min；理论板数按利培酮峰计算不低于3000。结果：高效液相色谱法
3、测定利培酮分散片的溶出度，空白辅料对溶出度的测定无干扰，并且本法的线性、准确度、回收率、重现性、精密度、溶液稳定性试验及三批样品的溶出均一性结果均良好，并且同时与市售利培酮片（维思通）的溶出度做了比较，本方法可用于利培酮分散片溶出度的测定。结论： 高效液相色谱法可用于利培酮分散片溶出度的测定。关键词：高效液相色谱；利培酮分散片；溶出度测定第一部分 实验部分1.1样品来源（1）利培酮对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号为：100570-200401 （2） 三批利培酮分散片中试样品：由技术中心制剂室提供，批号：20090501，20090502，20090503，规格：1mg/片。（3）市
4、售利培酮片由西安杨森制药有限公司生产。批号：070513030，商品名：维思通，规格：1mg/片。1.2 测定方法色谱条件与系统适用性 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.04mol/L醋酸铵溶液（用醋酸调节pH至 3.0）（50：50）为流动相；检测波长：274nm；流速：1.0ml/min；柱温：35，理论板数按利培酮峰计算应不低于2000。 测定法 取本品，照溶出度测定法（中国药典2005年版二部附录X C第三法），以0.1mol/L盐酸溶液200ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经20分钟时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取利培酮对照品适量，精密称定，加0
5、.1mol/L盐酸制成每1ml中约含5g 的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每片的溶出量。限度为标示量的80%，应符合规定。1.3 主要仪器与试剂主要仪器：RCZ-8A智能药物溶出仪 天津大学精密仪器厂 UV-2450 紫外分光光度计 日本岛津 Model 420 型精密酸度计 美国热电 Mettler AG 135双量程电子天平 瑞士 Agilent 1100高效液相色谱仪 美国 Waters 515高效液相色谱仪 美国 HS色谱数据工作站 V4.0 杭州英谱 N2000色谱数据作站 浙江 C18 液相色谱柱 250mm4.6
6、mm 5m 日本岛津主要试剂：甲醇（色谱纯） 上海凌峰化学试剂有限公司酸铵（分析纯） 上海化学试剂公司盐酸（分析纯） 徐州化学试剂总厂第二部分 实验步骤与结果2.1 溶出度检测波长的确定取利培酮对照品约5mg，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中约含25g的溶液，作为对照品溶液；另称取利培酮分散片空白辅料适量（约相当于1片利培酮分散片的空白辅料量），置于0.1mol/L盐酸溶液200ml中，溶解、过滤，取续滤液作为空白辅料溶液；取上述两种溶液，照紫外分光光度法（中国药典2005年版二部附录IV A），于190nm400nm的波长范围内扫描。【1】检测结果见表1。表1 对照品溶液及空白
7、辅料溶液紫外扫描结果名称最大吸收波长对照品溶液238.2 nm 、273.6nm空白辅料溶液在238.0 nm 、274.0nm波长处无吸收 根据上述的扫描结果可知，利培酮对照品的0.1mol/L盐酸溶液在238 nm 、274nm的波长处有最大吸收，空白辅料在274nm的波长处无吸收，对本品的溶出度测定无干扰，故选择274nm为本品溶出度测定的检测波长。图1 利培酮空白辅料紫外扫描图 图2 利培酮对照品紫外扫描图2.2 空白辅料对溶出度测定的干扰取本品（批号：20080501）及利培酮分散片空白辅料适量（约相当于1片利培酮分散片的空白辅料量），照利培酮分散片溶出度测定项下的方法依法测定检测结
8、果见表2表2 空白辅料对溶出度测定的干扰试验结果名称主峰保留时间(min)利培酮对照品5.34820090701批5.298空白辅料溶液在主峰处无色谱峰结论：空白辅料溶液在主峰处无色谱峰，不干扰本品溶出度的测定 图1 利培酮分散片溶出度空白辅料液相色谱图图2 利培酮分散片对照品溶出度HPLC色谱图 图3 利培酮分撒片供试品溶出度HPLC色谱图2.3溶出介质的选择取本品（批号：20090702），照溶出度测定法分别以溶出介质1：水；介质2：pH6.8的磷酸盐缓冲液；介质3：0.1mol/L盐酸溶液为溶出介质。体积均为200ml，转速为每分钟75转，依法操作，在1、3、5、10、20、30分钟时分
9、别取溶液2ml，滤过，作为供试品溶液，并及时在操作容器中补充溶出介质2ml；另精密称取利培酮对照品适量，先用0.1mol/L盐酸溶液溶解，再用溶出介质稀释制成每1ml中约含5g的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液和供试品溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片的溶出量【2】。结果见表3。表3 利培酮分散片溶出介质的选择时间（min）溶出度%（水）溶出度%（pH6.8磷酸盐缓冲液）溶出度%（0.1mol/L盐酸）132.632.2457.123.6683.732.30344.541.6579.401.6894.091.13552.041.2492.740.7
10、899.871.001067.861.4299.734.34102.401.282081.013.96101.464.11102.131.353089.363.4698.762.36100.980.92 图4 0.1mol/L盐酸为溶出介质对照品HPLC色谱图 图5 0.1mol/L盐酸为溶出介质供试品谱图 HPLC色谱图 图6 水为溶出介质对照品HPLC色谱图图7 水为溶出介质供试品HPLC色谱图图8 磷酸盐为溶出介质对照品HPLC色谱图 图9 磷酸盐为溶出介质供试品HPLC色谱图实验结果表明：经测定利培酮分散片以水为溶出介质时，30分钟时溶出不完全；以pH6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质时，相
11、对于以0.1mol/L盐酸为溶出介质时，溶出速度相对较慢，并且操作较繁琐；在以0.1mol/L盐酸为溶出介质时，在5分钟时溶出可达到80%以上，20分钟时可溶出完全，并且操作简便，因此选用0.1mol/L盐酸溶液作为溶出介质。2.4溶出转速的选择取利培酮分散片（批号：20090701），照溶出度测定法（中国药典2005年版附录X C第三法），以0.1mol/L盐酸200ml为溶出介质，转速分别为每分钟50转和75转，分别在1、3、5、10、20、30分钟时取样2ml，滤过，并及时在操作容器中补充0.1mol/L盐酸溶液2ml，取续滤液作为供试品溶液，另取利培酮对照品适量，精密称定，加0.1mo
12、l/L盐酸制成每1ml中约含5g的溶液，作为对照品溶液，取上述两种溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片的溶出量【3】。计算溶出度，以此考查不同转速对溶出度测定的影响。结果见表4。表4 不同转速对利培酮分散片溶出度测定的影响时间（min）溶出度%（50转/分）溶出度%（75转/分）149.808.9483.732.30376.514.1894.091.13588.763.4299.871.001099.554.85102.401.2820101.723.11102.131.353098.902.23100.980.92 图10利培酮分散片转速为50转对照品HP
13、LC色谱图 图11 利培酮分散片转速为50转供试品HPLC色谱图 结论：以上结果表明转速为每分钟50转时，在溶出时间10分钟时，溶出可达90%以上；而转速为每分钟75转时，在溶出时间5分钟时，溶出就可达90%以上，在溶出时间10分钟时，溶出即可完全；能较好的反映药物溶出的情况，因而选择75转/分为本品溶出度测定的转速。2.5利培酮分散片溶出度的线性范围精密称取利培酮对照品适量，置100ml量瓶中，加 0.1mol/L盐酸溶液超声溶解并稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液1ml、2 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，分别吸取上
14、述系列溶液各50l注入液相色谱仪，记录色谱图【4】。以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归并计算回归方程和相关系数。结果见表5表5 利培酮分散片溶出度测定的线性范围编号C（g/ml）峰面积11.00480177.722.008163670.433.012246882.155.020414524.677.028581118.71010.04838185 以峰面积A对浓度C进行线性回归，线性方程为：A=5105+83779X，相关系数r=0.99998 图12 利培酮分散片溶出度测定的线性范围图结论：由线性方程可知，利培酮在1.004g/ml10.04g/ml浓度范围内浓度与峰面积成良好的线性关系
15、，可用于利培酮分散片的溶出度测定。2.6 利培酮分散片溶出度测定的回收率试验 方法：分别精密称取利培酮对照品约60mg(60%处方量)、80mg（80%处方量）、100mg（100%处方量）、120mg（120%处方量），每份均按100片的处方量精密加入辅料并混和均匀。分别配制成含利培酮为标示量60%、80%、100%、120%的模拟样品，分别取上述四种不同标示量的模拟样品，各称取三份，分别用0.1mol/L盐酸溶液溶解，配制成每1ml中约含3、4、5、6g的溶液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液【5】。另取利培酮对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含5g的溶液，作为
16、对照品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各50l，分别注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，并计算回收率【6】。结果见表6。表6 利培酮分散片溶出度测定的回收率试验结果处方量对照品量（mg）辅料与主药总量（g）回收率（%）平均值（%）RSD%60%60.298.1567100.10100.000.3299.97100.6180% 81.268.16299.8099.69100.26100%101.688.1829100.24100.0799.41120%122.28.123599.69100.2299.99 结论：用高效液相色谱法测定利培酮分散片的溶出度，60% 、80%、100%、120%
17、四种不同标示量样品的回收率结果均在99.0%101.0%之间，相对标准偏差小于1%，说明用本法测定利培酮分散片的溶出度准确性好，回收率高，故本法可用于利培酮分散片的溶出度测定。2.7 溶出度测定的中间精密试验. 测定法：取利培酮分散片三批样品（批号为：20080501、20080502、20080503），各20片，研细，精密称取适量（约相当于利培酮0.5mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液振摇、溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取利培酮对照品适量，精密称定，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含5g的溶液，作为对照品溶液，分别精密吸
18、取上述两种溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其标示量【7】。以不同的时间、不同的操作者、不同的仪器再重复进行试验。两次试验结果见表7。表7 利培酮分散片溶出度测定的中间精密度试验结果 仪器，日期批号Waters 高效液相色谱仪 岛津10A高效液相色谱仪平均值%RSD%11年11月4日11年11月5日20111001批103.61%103.42%103.390.25103.18%103.75%103.29%103.09%20111002批103.37%102.53%102.990.41102.51%103.26%102.81%103.44%20111003批102
19、.36%103.11%102.860.31103.02%102.61%103.18%102.90% 图13 利培酮分散片溶出度精密度实验对照品HPLC色谱图 图14利培酮分散片溶出度精密度实验供试品HPLC色谱图 结论：通过三批利培酮分散片的溶出度中间精密度试验结果表明，RSD均小于1%，证明其方法精密度良好，可以作为利培酮分散片的溶出度测定方法。2.8 溶出度测定的重复性试验取利培酮分散片样品（批号：20111003）20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于利培酮0.5mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液振摇、溶解，并稀释至刻度摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取
20、利培酮对照品适量，精密称定，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液，作为对照品溶液，分别精密吸取上述两种溶液各50l，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其标示量【8】。结果见表8。表8 利培酮分散片溶出度测定的重复性试验结果样品编号含量（%）平均值（%）RSD（%）1102.69103.340.432104.043103.324103.265103.516103.21结论：以上结果表明，该方法重复性较好，可用于利培酮分散片溶出度的测定。2.9 溶出度测定溶液的稳定性试验 取利培酮分散片样品（批号20111027）照溶出度测定法，经20分钟时，取样滤过
21、，取续滤液作为供试品溶液；放置0、1、2、4、6、8小时，分别精密量取上述溶液各50l注入液相色谱仪，同时配制浓度为5g/ml的利培酮对照品溶液，照溶出度测定项下的方法进行测定【9】。记录色谱图，按外标法以峰面积计算溶出度。结果见表9。表9 利培酮分散片溶出溶液稳定性试验时间（小时）溶出度 (%)(%)RSD(%)0101.62101.510.180.181101.332101.614101.396101.768101.32图15 利培酮分散片溶出度溶液的稳定性对照品HPLC色谱图图16 利培酮分散片溶出度溶液的稳定性供试品HPLC色谱图结论：本品的溶出液放置8小时后溶出度测定结果未见明显变化
22、。说明溶液在8小时内稳定。2.10 溶出均一性曲线测定条件：转速75转/分，0.1mol/L盐酸溶液200ml为溶出介质，温度370.5，分别在1、3、5、10、15、20、30分钟取样2ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；并及时在操作容器中补充0.1mol/L盐酸溶液2ml，另取利培酮对照品适量，精密称定，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含5g利培酮的溶液，作为对照品溶液【10】。精密量取对照品和供试品溶液各50l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每片的溶出度【11】。结果见表10； 表10 利培酮分散片溶出均一性测定结果批号时间(min)溶出度(%)(%)RSD
23、(%)12345620111001185.9283.7785.1286.4689.2177.6984.703.884.58397.5493.3096.6297.69100.6797.1897.172.362.43598.5198.1499.57100.43103.39100.36100.071.881.881099.05100.95101.96101.46105.89102.34101.942.252.211598.66100.9899.72102.50103.70102.63101.371.921.902097.3899.1398.94100.12102.17100.4599.701.621
24、.633095.0697.6097.78100.05102.02100.4598.832.492.5220111002185.1786.9286.7583.6178.9183.4984.142.953.51396.8599.6696.3895.8392.0293.0495.632.762.895100.66101.2698.8597.5395.9496.3198.432.222.2610102.67105.07103.25103.5899.36102.87102.801.891.8415102.18103.06102.20102.1998.83102.99101.911.561.5320101
25、.13101.09100.9399.3497.0097.6599.521.841.853096.81101.5599.67100.3696.8998.3398.941.921.9420111003181.2484.6081.4779.4485.5682.7582.512.272.76395.7896.7099.0595.1695.7092.2495.772.212.31598.2998.39100.4799.9098.0195.7398.471.661.6910102.06102.19104.44102.5898.6196.15101.013.043.0115100.90101.29102.3
26、0101.5398.9798.33100.551.561.552098.94100.61100.80100.2095.9096.4098.812.162.193097.7599.3799.2199.8795.8192.9497.492.672.74维思通12.912.902.872.422.291.932.550.4115.89329.1634.8226.8426.7238.7332.3231.434.7715.19582.0576.4681.6679.9277.0785.6680.473.434.261095.7893.7894.4893.7195.7597.9395.241.601.681
27、596.1794.3397.3593.6896.0597.2495.801.511.572095.4893.6897.0193.4995.8195.7395.201.361.433094.9891.6296.2492.4394.2995.9894.261.882.00图17 利培酮分散片溶出均一性对照品溶液HPLC色谱图图18利培酮分散片溶出均一性供试品溶液HPLC色谱图结论：由以上结果可看出，三批利培酮分散片在溶出时间3分钟时，溶出度大于80%，在溶出时间10分钟时，溶出量达到最大值，在溶出时间20分钟时，溶出已基本完全。而利培酮片在溶出时间10分钟时，溶出量大于80%，在溶出时间15分钟时
28、，溶出量达到最大值。由此可见，三批利培酮分散片的溶出速度远大于利培酮片。三批利培酮分散片在20分钟时的溶出度均大于80%，溶出均一性良好，采用高效液相色谱法测定利培酮分散片的溶出度，方法准确，故此方法可用于利培酮分散片溶出度的测定。并把利培酮分散片的溶出时间定为20分钟。2.11 溶出度测定结果取本品三批样品依照溶出度测定项下的方法依法测定。溶出度测定结果见表11。表11 三批利培酮分散片测定结果批号时间(min)123456%2011100120104.64101.92100.58101.26102.33101.73102.081.39201110022098.14102.61103.631
29、02.8698.61105.04101.812.802001110032099.67100.02104.06100.6698.6399.13100.361.94图19 利培酮分散片溶出度测定对照品HPLC色谱图图20 利培酮分散片溶出度测定供试品HPLC色谱图结论：三批利培酮分散片在20分钟时的溶出度均大于80%，测定结果均符合规定。 第三部分 讨论3.1 由于本品的规格较小，为1mg/片，溶出介质为200ml，溶出液的浓度为5g/ml，浓度较低，用紫外法测定吸收值较低，误差较大，因此采用高效液相色谱法测定利培酮分散片的溶出度。3.2 经测定利培酮分散片以水为溶出介质时，30分钟时溶出不完全；
30、以pH6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质时，相对于以0.1mol/L盐酸为溶出介质时，溶出速度相对较慢，并且操作较繁琐；在以0.1mol/L盐酸为溶出介质时，在5分钟时溶出可达到80%以上，20分钟时可溶出完全，并且操作简便，因此选用0.1mol/L盐酸溶液作为溶出介质。3.3 经过考察本品在以转速为50转/分和75转/分的溶出情况时可知， 以转速50转/分测定溶出度时，溶出速率较慢；以转速75转/分测定时，溶出速率较快。因此选用0.1mol/L盐酸溶液作为溶出介质、转速为每分钟75转。经检测本品三批中试样品（批号：20111001、20111002、20111003）20分钟时溶出量均大于80%，
31、因此限度为20分钟时溶出量应为标示量的80%以上。第四部分 结论4.1 通过以上一系列的方法学验证，将本品的溶出度测定方法订为：采用中国药典2005年版二部附录X C第三法，以0.1mol/L盐酸溶液200ml为溶出介质，转速为每分钟75转，溶出时间为 20分钟 。4.2 高效液相色谱法测定利培酮分散片的溶出度，空白辅料对溶出度的测定无干扰，并且本法的线性、准确度、回收率、重现性、精密度、溶液稳定性试验及三批样品的溶出均一性结果均良好，并且同时与市售利培酮片（维思通）的溶出速度做了比较，溶出速度远远大于利培酮片。参考文献1中华人民共和国药典2005版一部S北京化学工业出版社.20002思利舒（
32、利培酮片）质量标准（江苏恩华药业股份有限公司）3思利舒（利培酮片）药品说明书（江苏恩华药业股份有限公司）4维思通（利培酮片）药品说明书（西安杨森制药有限公司）5陈钧 ,高小玲 ,蒋新国.高效液相法测定利培酮片剂的溶出度 J. 中国现代应用医学 ,200623(1)6陈定一.分析化学M.学苑出版社,19957陈贤春 ，吴清 ，王玉蓉，李冀湘.关于溶出曲线比较和评价方法J.中国医院药学杂志，2007，078顾牛范，张广岐，姚芳传，袁永贵等 利培酮的国内临床应用概况J.中国精神科杂志 2001，149张执侯.有机化学M.上海科学技术出版社,198610王萍. 利培酮片的质量研究与技术标准制定J.中国医药学杂志，2002，22（8）：648-64911肖崇厚,陆蕴如等.有机化学M.上海科学技校术出版社,1985