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1、液相色谱基础知识,Waters LC School 培训教材,蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤 色谱,常见的分离方式,色谱法的分类,HPLC分离的机理,典型的仪器配置,液相色谱的应用（一）,“分析型液相色谱” 定性及定量分析 灵敏度的要求 样品的复杂性 样品量的要求 精度及准确度的要求 容易使用,液相色谱的应用（二）,“制备型液相色谱” 分离及纯化 化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性,开发液相色谱方法,问题什么样的分离结果是好的?分辨率?,什么是色谱的分辨率？,分辨率的公式：,影响分辨率的因素：K，a，N,分辨率的方程 k 是容量因子，表达了样品与柱
2、填料的作用强弱。 a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度。是化学因素。 N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。,色谱柱的柱效 N,理论塔板数计算公式： W s 方法 Wtan 16 切线法 Wh 5.54 半峰高 W3s 9 3s W4s 16 4s W5s 25 5s,Inject,Inject,用“切线”法计算柱效,不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来,Good Column,Bad Column,Inject,Inject,用“5”法计算柱效,提高柱效的方法,色谱柱本身 减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长,其他影响柱效的因素,柱外效应 连接管路 进样器、检测器 进样体积 进样量,容量因子 k,改变k值的方法 调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗,与峰高的关系,与R的关系,选择性系数 a,定义 a =1 时两组分分不开， 改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质,a ，k，N如何控制分辨率?,液相色谱的检测模式,灵敏度、选择性、及适应能力,色谱条件的优化,开发液相色谱方法,分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。 灵敏度 载样量 分析速度 溶剂损耗,成本 容易使用 色谱柱寿命 效率,