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1、血样本,血样本,血标本,红细胞悬液制备,抗凝或不抗凝的血标本洗涤压积红细胞配制 红细胞悬液 2-3% 的红细胞悬液 试管法血型鉴定、效价滴 定 5% 的红细胞悬液 玻片法血型鉴定、间接抗 人球蛋白试验 10% 的红细胞悬液 抗体亲和力测定,血清标本,抗凝或不抗凝血标本37水浴箱竹签使血块与 试管壁分离离心将血清吸至干净试管待用,ABO血型鉴定,原理： 根据ABO血型的分型原则及其独特的性质，利 用凝集试验技术通过正定型（红细胞定型）和反定 型（血清定型）两组试验可准确鉴定ABO血型。 试剂： 抗A、抗B 试剂血清 A型、B型和O型试剂红细胞悬液 2-3 %受检者红细胞悬液和血清或全血,ABO血
2、型鉴定,方法： 玻片法 不适于血清抗体鉴定 试管法 正定型、反定型 结果解释 凝集为阳性 即被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原；或被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体。 不凝集为阴性,加试剂抗体血清,加被检红细胞悬液,离心,相对应的抗原抗体反应,观察结果,ABO血型判断 血 正定型 反定型 型 抗-A 抗-B AC BC OC A + + B + + O + + AB + + ,思考题,ABO血型的分类原则是什么？ A BO 血型的分类原则是根据红细胞膜上所存在 的抗原，血清中所存在的抗体来进行分类的。通常使 用抗-A 和抗B 两种血清及 A 型、B 型和 O 型三种试 剂红细
3、胞来鉴别。如受检者红细胞被抗血清凝集，说 明红细胞膜上存在相应的抗原；如不发生凝集说明不 存在相应抗原；如受检者血清与试剂红细胞发生凝集 ，说明血清中存在相应的抗体；如不发生凝集，说明 不存在相应抗体。,为什么ABO血型鉴定应采用“正反定型”两种方法？ 因为 ABO 血型鉴定,主要依据受检者红细胞与 抗A 、抗B 试剂血清反应结果确定,此法称正定型法； 也可通过受检者的血清与A型、B型和O型试剂红细 胞反应结果确定,此法称反定型法，同时采用正反定 型法,并互相核对其结果是否一致是一个可靠的血型 鉴定法。,为什么在反定型中使用O型红细胞？ 因为有些受血者或供血者血清中存在因免 疫、妇女妊娠或不当
4、输血而引起的抗A或抗B以 外的抗体，这些抗体不是自然所期望存在的。 血清反定型时，使用O型红细胞可在 ABO 血型 鉴定试验过程中检测出受检血清中是否有“不规 则”抗体的存在。,为什么红细胞悬液过浓或过淡均可出现假阴性反应结 果？ 因为抗原、抗体在适当的比例下，反应最强。若 红细胞悬液过浓，则抗原过剩，抗体不足，每个红细 胞均只能吸收少量抗体，不足以形成凝集。若红细胞 悬液过淡，则红细胞间距离较大，不易集聚在一起， 不形成凝集。在实际血型鉴定时，玻片法用 5% 红细 胞悬液敏感性较强，并应在鉴定过程中不断摇动玻片 以促使其相互接触。试管法用 2% 浓度的红细胞悬液 敏感性较好，容易观察凝集。,
5、为什么玻片法血型鉴定要严格规定观察结果的时间？ 凝集反应出现的快慢与强弱是由抗原抗体的性 质决定的,如果抗原的抗原性强，抗体效价高，凝集 反应的第一，第二阶段可以在数秒内完成；如抗原 的抗原性弱，抗体效价也低，则凝集反应不明显， 反应需要一段时间才能完成。 因为血清在空中暴露时间过长，发生浓缩，从 而使红细胞聚集，造成假阳性结果；如果不等反应 完成便判定反应结果，可使阳性结果误报成阴性结 果，造成假阴性。所以玻片法血型鉴定要严格规定 观察结果的时间,凝胶试验使用的试剂和器材,凝胶技术,凝胶法鉴定ABO血型,优点：,敏感： 在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 结果可保存： 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。 操作技术要求较低： 凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。 无需洗涤的抗球蛋白试验：,缺点,不能做反定型 凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。 高度敏感有时也会造成不便。,MN血型鉴定,试剂 抗M、抗N试剂血清 M型、N型、MN型红细胞 受检者红细胞悬液 方法 玻片法 试管法,结果判读 MN血型结果判定 抗M 抗N 血型 被检红细胞 1 + M 被检红细胞 2 + N 被检红细胞 3 + + MN M+N+红细胞 + M- N+红细胞 M+N+红细胞 + M+N- 红细胞 ,