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1、实验一 普通光学显微镜的结构及使用,一、目的要求,熟悉普通光学显微镜的构造和性能 掌握显微镜的使用方法 了解光学显微镜的维护方法,二、实验原理,显微镜可将微小物体放大 物镜和目镜的作用相当于一个凸透镜 标本放在物镜下方12倍焦距之间，在 明视距离为25cm，见到放大的清晰物象,光学显微镜的成像原理,显微镜的重要光学技术参数,分辨率、放大率、镜口率、焦点深度和视场宽度等反映了显微镜的性能和质量,数值孔径（镜口率） numerical aperture,N.A,N.A是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和镜口角（）半数的正玄之乘积，即N.An sin /2 镜口角是物镜光轴上的物体点与物镜
2、前透镜的有效直径所形成的角度。 镜口角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比,1/2,objective,sample,间质折射率（n）,空气为 1 水为 1.33 油为 1.5,物镜N.A值,空气为0.050.95 水为0.11.20 油为0.831.40,分辨率（R）,显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力 人眼分辨率约为100um，光镜为0.2um 计算公式,0.61,N.A,R =,=,0.61,N sin/2,=,0.610.5,1.501.0,=,0.2um,（光镜最大分辨率）,注： 光波波长（白光为0.5
3、） N介质折射率 镜口角,放大率（放大倍数）,放大倍数目镜放大倍数物镜放大倍数 最小倍数5 420 最大倍数15 1001500 放大倍数的表示用，如10 ,100 ，,焦点深度（焦深）,在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。 焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层 在数值孔径0.95时约为非常浅的0.2,视场宽度,在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际范围。视场宽度愈大，愈便于观察。 视场的大小，是由目镜里的视场光阑决定的。 视场宽度与物镜的
4、放大倍数成反比 因此，低倍镜看整体，高倍镜看局部,三、内容与方法,（一）显微镜的构造及功能 1.机械部分 镜筒（tube） 物镜转换器（revolving nose-piece ） 镜臂（arm） 调焦器（focusing adjustment） coarse focus and fine focus 载物台（stage） 镜柱（post） 镜座（base）,倒置显微镜,2.光学系统部分,目镜（ocular） 5，10 ，15 物镜（objective）4,10,40,100 聚光器（condenser） 光源及光阑,标准物镜的性质,放大倍数 数值孔径 工作距离*（mm） 10 0.20 6.
5、5 20 0.50 2.0 40 0.65 0.6 100 1.25 0.2,*工作距离：物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。,（二）显微镜的使用方法,1.低倍镜的使用 调光 先检查光强度开关的位置，放到最小，再通电，亮度适中，物镜对准通光孔，光阑，光栅，聚光器等 放片 标本朝上，勿放反了 调焦 先粗调，后细调；调过头了，反方向调回来；记住方向，慢调！,2.高倍镜的使用,先在低倍镜下找到标本，并将要观察的部位移至视野中央 转换高倍镜头 慢慢调节细调，同时观察，调到最清晰为止 油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转开高倍镜，滴上香柏油后，转换油镜头 使用油镜后要用清洁剂清洗镜头和标本,3.油镜的使
6、用,油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转动目镜转换器，至高倍镜与油镜头之间 滴上香柏油后，转换油镜头 慢慢调节细调，调到所观察的标本为最清晰为止 注意事项：增强光线；在高倍镜下把要观察的部分移到视野中央；镜头用油浸泡；用完用清洁剂清洗干净镜头和标本。,（三）标本观察,头发丝交叉 文字 蛙血涂片,四、作业,记录实验一结果，完成作业一 记录高倍镜下视野中央的头发交叉点转换成低倍镜后所在的位置,绘图要求和方法,绘图前仔细观察，正确理解，做到真实准确的描绘 用尖锐的铅笔绘图，以点和线表示，明暗之处用点的疏密表示，勿涂阴影 版面整洁，图形大小适宜，各部分比例适当 于图上右侧横写注字，水平引出注字引线，不交叉，图下方写图的标题，注明放大倍数,