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1、实验一 普通光学显微镜的使用,一、实验目的,1、掌握普通光学显微镜的构造及原理 2、学习并掌握正确的使用方法 3、通过永久装片及新鲜切片观察，掌握一些细胞结构或细胞活动的特点,二、实验内容,（一）显微镜的使用 （二）永久标本片的观察 （三）制作新鲜标本片 （四）作业,（一）显微镜的使用,显微镜是观察微小物体的精密仪器,1、光学显微镜的组成 光学、照明、机械 2、显微镜的性能指标 3、显微镜的使用步骤,显微镜的组成,2、显微镜的性能指标,（1）分辨力 （2）放大率,显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。被观察的物体必须放大率高，而且清晰，物体放大后，能否呈现清晰的细微结构，首先取决于物镜
2、的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。,（1）分辨力 R 显微镜能分辨两物点间的最小距离。 R=0.61/NA,数值孔径 NA 也叫做镜口率（或开口率），在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。,数值孔径可用下式表示：NA=nsin 式中： n物镜与标本之间的介质析射率 物镜的镜口角的1/2，即半孔径角。,镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，见图。,镜口角总是小于180。因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.050.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则
3、数值孔径最大可接近1.5。虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。 几种物质的介质的折射率如下： 空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。,可见光的波长为0.40.7微米，平均波长为0.55微米。若用数值孔为0.65的物镜，则R=0.610.55微米/0.65=0.52微米。这表示被检物体在0.52微米以上时可被观察到，若小于0.52微米就不能视见。如果使用数值孔径为1.25的物镜，则R=0.27微米。凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。 紫
4、外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。 物镜分辨力的高低与造象是否清楚有密切的关系。目镜没有这种性能。目镜只放大物镜所造的象。,可通过： _； _； _来提高分辨力。,减低波长,增大折射率,加大镜口角,R值愈_，分辨力愈高，物象愈清楚。,小,练 习,（2）放大率 显微镜的放大率（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积，即： V=V1V2,安放,对光,调焦,观察,放片,3、显微镜的使用步骤,（二）永久标本片的观察,胞间连丝 有丝分裂 血细胞 肝细胞 人染色体 草履虫 人口粘膜上皮细胞 植物根尖纵切,、胞间连丝,贯穿两个相邻的植物细胞的细胞壁，并
5、连接两个细胞的原生质细丝。胞间连丝中有连丝微管(desmotubule)通过,它是由两个细胞的光面内质网衍生而来。胞间连丝不仅使相邻细胞的细胞质膜、细胞质、内质网交融在一起, 而且也是植物细胞间物质运输和传递刺激的重要渠道。,胞间连丝切片 (柿胚乳),、有丝分裂,植物细胞有丝分裂 洋葱根尖（16条染色体） 动物细胞有丝分裂 马蛔虫受精卵（4条染色体）,洋葱根尖细胞有丝分裂图,1,2,4,3,马蛔虫子宫切片400铁苏木精染色,卵壳,围卵腔,受精卵,马蛔虫受精卵有丝分裂图,4,3,1,2,、血细胞,、肝细胞切片,肝板和肝血窦（示肝细胞、肝血窦、巨噬细胞）,肝细胞,NOR,、人染色体NOR,人染色体
6、NOR,、草履虫,、人口粘膜腔上皮细胞,植物根尖根冠、分生区,、植物根尖纵切,植物根尖纵切（示伸长区）,植物根尖纵切（示成熟区）,细胞骨架,（三）制作新鲜标本片,1、胞间连丝的观察 试材：红椒 2、叶绿体的观察 试材：菠菜叶,（四）作业,1、说明普通光学显微镜的构造 2、试分析提高显微镜分辨力的方法 3、绘图 （1）有丝分裂细胞（前、中、后、末四个时期中的三个） （2）玉米根尖纵切（示根尖结构，每个区域绘几个代表性的细胞。） （3）胞间连丝 （4）草履虫（显示大、小核）,实验室规则和注意事项,1每次实验前，必须认真预习实习指导，明确本次实验 的目的、要求和注意事项，熟悉实验内容、方法和步骤。对
7、于比较复杂的实验还应写出简要的实验操作程序 2上实验课时必须携带讲义、实验指导、实验报告及绘图 文具等。进入实验室要穿好白大衣，按规定座位入座。 3做实验前，要认真检查所用仪器药品等是否完好、齐全，如有缺损应及时向任课教师报告，自己不得随意调换标本、仪器等。 4实验时要遵守纪律，听从教师指导，保持肃静。有问题举手提问，严禁在实验室谈笑喧哗、随意走动和进行与实验无关的活动。,5实验时要严格按操作规程进行，操作要正规，观察、记录要认真，自觉养成一丝不苟的科学作风。 6要爱护仪器、标本和设备，注意节约实验材料、药品和水电等。如有损坏，必须向任课教师说明情况，按学校有关规定处理。 7根据自己的观察或操作按时完成实验报告和作业，不得抄袭他人作业。绘图要求用HB或2B铅笔，文字描述和列表字迹要工整。 8实验结束后，应清理实验台面，认真清点整理好用品，整齐地放回原处。轮流值日清扫室内卫生，关好门窗水电，经教师允许后方可离开实验室。,