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1、实验二 细菌简单染色法 革兰氏染色法,一、目的要求,1巩固油镜的使用方法； 2学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法； 3学习、掌握细菌的革兰氏染色法； 4建立“无菌操作”的概念，学习其技术。,二、实验原理,简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。,革兰氏染色,丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构,G肽聚糖层较薄
2、，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。 G细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。,三、实验材料,变形杆菌、表皮葡萄球菌 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 革兰氏染色液一套,四、实验步骤,1简单染色 载玻片中心加半滴水无菌操作取菌涂布于水中使均匀并成薄膜状干燥火焰固定染色（12min）水洗干燥镜检 2.革兰氏（Gram）染色 涂片干燥固定结晶紫初染（12min） 水洗碘液媒染1min水洗95%酒精脱色（约2030秒）立即水洗番红复染约2分钟水洗干燥镜检 （混合涂片染色）,Left: 单菌染色结果(G+或 G-),Right: 混合菌染色结果(G+和 G-),细菌细胞结构,革兰氏染色结果及细菌分类,革兰氏染色阴性,五、实验结果,文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是G/ G。 绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。,六、问题与讨论,1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？ 2对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确？,