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1、项目二 血型与输血,任务二 Rh血型鉴定,第四节 Rh血型,概念 一、Rh血型抗原 抗原性强弱次序为DECce Rh阳性：含D抗原 Rh阴性：不含D抗原 亚型中，以Du最有临床意义，易被误定为Rh阴性。,二、Rh血型抗体 免疫性抗体： 抗D抗体最强，其次是抗c和抗E。,IgG、免疫产生、小、可通过胎盘，温性抗体、需要抗人球蛋白等介质才能与相应红细胞凝集,三、Rh血型的遗传和命名 四、Rh血型鉴定 是否含有D抗原 因Rh抗体多为不完全抗体，所以多采用酶介质、抗人球蛋白等试验方法。,（一）聚凝胺法 【原理】 聚凝胺：产生很多阳离子 低离子强度溶液：降低红细胞的Zate电位 红细胞表面含D抗原，与抗
2、D抗体凝集 柠檬酸盐解聚液：消除聚凝胺的正电荷，使正常红细胞的非特异性凝集解散，而抗原抗体引起的凝集仍然存在,聚凝胺,低离子强度溶液,柠檬酸盐解聚液,（二）酶介质法 【原理】 酶（木瓜酶、菠萝酶等）可破坏红细胞表面带负电荷的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减小，红细胞间距缩小，在不完全抗体的作用下发生凝集。,（三）抗人球蛋白法 【原理】： 不完全IgG类抗D抗体,使红细胞致敏,加入经一定稀释的抗人球蛋白血清后,将致敏红细胞连接，发生肉眼可见的凝集。,实践操作,用PH6.8-7.2的生理盐水配制2-3%的红细胞悬液，洗涤1次 加入抗D抗体与红细胞悬液各一滴于玻璃试管中 混合并在室
3、温下（1825）15分钟. 离心15秒钟,观察结果. 出现凝集为阳性 不出现凝集为阴性,对于阴性结果应再做的D和弱D型的测试 注：该抗D抗体为 IgG/IgM单克隆鉴定抗体混合型，其中IgMAnti-D可直接凝结D阳性红细胞，除了D4型和弱D(亚D)的一部分。IgGAnti-D通过间接的抗蛋白测试方法凝结D4和低浓度的弱D(亚D).,五、Rh血型的临床意义 （一）Rh血型与输血 （二）Rh血型与新生儿溶血病,Rh阴性,抗D,抗D,第二次,复习思考题,1、Rh血型中抗原性最强、临床意义又最大的抗原是： 2、因为Rh抗体多为 抗体，所以常采用 、 、 等方法。 3、Rh血型不合引起的新生儿溶血病的
4、原因：Rh 的母亲孕育了Rh 胎儿后，胎儿红细胞可通过胎盘屏障进入母体的血循环中，刺激母体产生 ，该抗体 进入胎儿体内而发生新生儿溶血病。由于第一胎产生的抗体效价较低，一般对胎儿无明显影响。但第二胎时抗体效价增高，易引起新生儿溶血病。,复习思考题,4、木瓜酶可破坏红细胞表面带负电荷的 ，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减低，红细胞间距 ，在不完全抗体的作用下发生凝集。 5、抗人球蛋白可与红细胞上结合的 结合，将致敏红细胞连接，发生 的凝集。,三、ABO血型抗体 （一）天然抗体 （二）免疫抗体,IgM,IgG,天然抗体与免疫抗体的鉴别,无察觉 有抗原刺激（妊娠、输血）,大 小,4-25
5、37,易被血型物质中和 大多不能被血型物质中和,不能 能,盐水介质 酶、抗人球蛋白等,IgM,IgG,四、ABO血型的亚型 亚型：属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数不尽相同的情况 A型 ： A1 A1和A抗原，血清中含有抗B抗体 A2 只有A抗原，血清中含抗B和抗A1抗体,五、ABO血型的遗传 A和B为显性基因，O为隐性基因 举例： A B AO BO,AB,AO,BO,OO,任务一（第三节）ABO血型鉴定,一、标本的采集 柠檬酸钠抗凝剂 二、红细胞悬液的配制 1、洗涤： 2、配制25的红细胞悬液 5红细胞悬液比容红细胞1滴生理盐水1ml 2红细胞悬液比容红细胞1滴生理盐水2ml,三
6、、标准血清要求 1、特异性 2、效价 3、亲和力 4、不含冷凝集素 5、不含补体，无任何污染 四、标准红细胞悬液的制备,五、ABO血型鉴定方法 正定型： 反定型： （一）试管法： （二）玻片法；,用已知抗A、抗B和抗AB分型血清来测定 红细胞上有无相应的A、B抗原,：,用已知A抗原和B抗原红细胞来测定 血清中有无相应的抗A、抗B抗体。,（三）注意事项 1、严格查对 2、操作方法应按规定先加血清，再加红细胞悬液， 3、试验用器材应清洁干燥 4、玻片法勿将干涸的红细胞聚集误认为凝集 5、反定型一般不宜采用玻片法 6、试管法离心后应先观察上清有无溶血,对于工作人员1%的错误，病人就是100%的误诊！
7、,前身物质(oh),经H基因作用,H抗原,经A基因作用,A抗原,经B基因作用,B抗原,（一）试管法 1、正定型 取10mm60mm试管3支，分别标明抗A、抗B、抗AB，用滴管加入相应的抗A、抗B、抗AB标准血清各1滴，再加入被检者5红细胞盐水悬液1滴，轻轻混匀。 2、反定型 取同样试管3支，分别标明A、B、O红细胞，用滴管各加入被检者血清1滴，再分别加入A、B、O型5标准红细胞悬液1滴，轻轻混匀。 3、立即以RCF177g（1000r/min）离心1分钟。 4、取出试管，先观察有无溶血，再轻弹试管，观察有无红细胞凝集，如肉眼不见凝集，应将反应物倾倒于玻片上，在显微镜下用低倍镜观察。结果判断可见
8、表75。,实验操作,ABO血型鉴定正定型 试管法：,A,B,标记号,1滴抗B,1滴RBC 悬液,标记号,1滴抗A,1滴RBC悬液,1000转/min离心1分钟，观察凝集结果,ABO血型正反定型结果判定,标准血清 被检者血型 标准红细胞 被检者红细胞 被检者血清 抗A 抗B 抗AB A细胞 B细胞 O细胞 A型 B型 O型 AB型 ,（二）玻片法 1、正定型 取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出方格或圆圈，依次标明抗A、抗B、 抗AB，按标记用滴管加入相应的标准血清各1滴，再加入被检者5红细胞悬液1滴，转动玻片混匀。 2、反定型 另取清洁玻片或白瓷板，用蜡笔画出方格或圆圈，依次标明A细胞、B细胞、O细
9、胞，用滴管加入被检者血清各1滴，再按标记加入5标准A、B、O红细胞悬液1滴。转动玻片混匀。 3、不断转动玻片或白瓷板，使血清与细胞充分混合，室温下（2024）1015分钟，观察有无凝集和溶血。如用玻片试验，必要时可用显微镜在低倍镜下观察。红细胞凝集判断标准图72。,实验操作,ABO血型鉴定正定型 玻片法：,A,B,各加一滴红细胞,抗B,抗A,转动玻片，15分钟后观察结果,实验十六 ABO血型鉴定 RH血型鉴定,实验目的,1、熟练掌握ABO血型鉴定方法。 2、熟悉RH血型鉴定的方法及结果判定。,实验器材、试剂,器材毛细血管采血用具、离心机、试管、玻片 试剂 1、生理盐水 2、标准血清 3、抗D抗
10、体,实验安排,两人一组互取标本，配制5%红细胞悬液 1、单号：ABO血型鉴定正定型：玻片法 2、双号：ABO血型鉴定正定型：试管法 3、每人进行Rh血型鉴定,提问,玻片法血型测定的方法及结果判读,实验操作,两人一组毛细血管采血 1、配制5%红细胞悬液： 末梢采血1滴+10滴生理盐水 2、ABO血型鉴定正定型 玻片法：,A,B,各加一滴红细胞,抗B,抗A,转动玻片，15分钟后观察结果,实验操作,ABO血型鉴定正定型 玻片法：,A,B,各加一滴红细胞,抗B,抗A,转动玻片，15分钟后观察结果,实验操作,3、ABO血型鉴定正定型 试管法：,A,B,标记号,1滴抗B,1滴RBC 悬液,标记号,1滴抗A
11、,1滴RBC悬液,1000转/min离心1分钟，观察凝集结果,实验操作,4、Rh血型鉴定:,-1滴红细胞悬液,1滴抗D-,37水浴30分钟,Rh阳性,Rh阴性,结果报告,ABO血型的报告方式： ABO血型 型 Rh血型的报告方式： Rh血型：阴性 Rh血型：阳性,注意事项,要有及高的责任心，避免发生血型鉴定错误 对于工作人员1%的错误，病人就是100%的误诊！,作业,完成实验报告 P248 实验准备与安排 一：1、2、3 P252 实验准备与安排 一：1、2、3 报告今日血型测定结果,格式如下 ： 姓名： ABO血型： Rh血型： 检验者签字： 日期：,预习,交叉配血的操作方法 同型配血的结果判断 异型配血的结果判断,