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1、1,微生物的实验室培养,第二课时纯化大肠杆菌,2,微生物实验室培养（知识点总结）,3,复习题,1、甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是：,A、甲乙丙都是异养微生物 B 、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物,4,复习题,2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是： 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高
2、压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A、 B、 C、 D、,5,三、纯化大肠杆菌,实验目的：接种大肠杆菌于培养基上，经过培养使其形成由单个细胞繁殖形成的子细胞群体，即菌落。,实验过程：(知识网络）,配制培养基,接种大肠杆菌,恒温培养箱中培养（1224h）,结果分析与评价,计算 称量 溶化 灭菌 倒平板,菌种保藏,6,配制培养基,在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； 右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。 待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。,倒平板过程总结：,7,Q1.培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到_左右时，才能倒平板。用什么办法来估计
3、培养基的温度？_,Q2.操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是： _,Q3.将平板倒置的目的是： _,Q4.在倒平板过程中，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ _,50,感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手，就可以倒平板了,防止瓶口微生物污染培养基,既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,不能，因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生。,配制培养基,8,平板划线接种,原理： 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操 作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 。,9,平板划线接种,灼烧接种环,冷却,划线 （第一区
4、域）,蘸取菌液,灼烧接种环,冷却,划线 （第二区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第三区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第四区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第五区域）,灼烧接种环,平板倒置放置培养,10,平板划线接种,第一区域,第二区域,第三区域,第四区域,第五区域,11,Q2：每次划线前灼烧接种环的目的：,Q3：划线结束后灼烧接种环的目的：,平板划线接种,答案：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基,答案：杀死上次划线结束后残留的菌种,答案：及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环 境和操作者。,Q1：第一步灼烧接种环的目的：,12,稀释涂布平板接种,原理： 将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同
5、稀释度 菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。 当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成 的标准菌落。,13,1、梯度稀释,2、涂布平板,稀释涂布平板接种,14,结果分析与评价,1、培养基制备成功的标准,2、接种操作成功的标准,如果未接种的培养基在恒温箱中保温12天后无菌落生长， 说明培养基配制是成功的，否则实验失败，需重新配制。,如果培养基上生长的菌落颜色、性状、大小基本一致， 并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明操作是符合要求的。 如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌 操作还未达到要求，实验失败，需分析原因，再次实验。,15,菌种的保藏（了解）,1、临时保藏：适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管置于4的冰箱中保藏 2、甘油冷冻管保藏：适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀，放-20的冷冻箱中保藏,16,纯化大肠杆菌（实验过程）,