《糖原的显示(PAS)反应.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《糖原的显示(PAS)反应.ppt（11页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、糖原的显示(PAS反应),山东师范大学生命科学学院 邢维贤,实验目的 实验原理 实验用品 实验方法与步骤 实验结果 实验报告,目的要求,通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。,基本原理,糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（CHO），游离醛基与Schiff s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。 由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定此红色物质
2、是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。,实验用品,1器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等 2试剂 0.5%过碘酸溶液；Schiffs试剂 3材料：小鼠肝脏石蜡切片,切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。,注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长。,切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。,对照片的设置,为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片。 对照片在复水后，用唾液淀粉酶37水解3060分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理。,实验结果,实验报告,绘图表示糖元在细胞中的分布情况； 在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？,