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1、非发酵菌,及检验,非发酵菌及检验,非发酵菌（nonfermenters）是指一群不能利用或仅以氧化形式利用糖类, 生化特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。 括多个菌属，主要有：假单胞菌属 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属,分群依据： 1. 氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假单胞菌为阴性） 2. 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：应开管产酸，闭管不变。 3. 动力：大多为专性需氧菌，半固体上动力不明显（动力观察应在30或室温1224小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别） 4. 麦康凯培养基上生长：可分群 见表,菌 属 氧化酶 葡萄糖 O/F 悬滴动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长,假单胞菌属
2、+ O / - + + + / - + 不动杆菌属 - O / - - + - + 产碱杆菌属 + - + + + / - + 莫拉菌属 + - - + + / - + 黄杆菌属 + O / F - + - + / -,非发酵菌主要菌属的生化反应,广泛存在于自然界的空气、水和土壤中。种类多达200余种，大多数为条件致病菌。 革兰阴性，直或微弯曲，大多有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无芽胞，专性需氧。,第二节 假单胞菌属 （Pseudomonas）,为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一。 （一）生物性状 1、形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。
3、无芽胞，无荚膜，单端有鞭毛13根，运动活泼。,铜绿假单胞菌 （P.aeruginosa）,培养特性： 专性需氧，4不长，42可生长。 血平板：常见透明溶血环 普通平板：可产多种色素，主要有：绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素（只溶于水）。从临床标本中分离的菌株大多产生此色素,麦康凯上可形成5种不同形态的菌落： 典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不齐，表面可见金属光泽。 大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。 粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。 侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 粘液型：光滑凸起呈粘液状,生化反应： 氧化酶，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精氨酸双水解酶，枸橼酸盐，
4、硝酸盐。 抵抗力：较强，临床分离株对多种抗生素耐药,（二）致病性： 可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重时可引起败血症，死亡率甚高。,（三）微生物学检验 1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气、水、物体表面等。 2、检验程序 3、检验方法： （1）直接镜检： （2）分离培养：血液和体液可先增菌，再转种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、尿可直接种于上述培养基分离培养。,（3）鉴定：根据菌落特征、色素
5、、生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等作出鉴定。对无色素的菌株应与其他假单胞菌鉴别。,脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液,分 离 培 养血、麦康凯,直接涂片染色,血液体液,粪 便,分 离 培 养SS、麦康凯,初步鉴定,菌落特征，色 素菌体形态、氧化酶,最后鉴定,生化反应,血清学噬菌体,分型：,增 菌 营养肉汤,铜绿假单胞菌的检验程序：,铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别,试 验,铜绿假单胞菌,荧光假单胞菌,恶臭假单胞菌,斯氏假单胞菌,嗜麦芽假单胞,鼻疽假单胞菌,类鼻疽假单胞,氧化酶 / 荧光素 / / 青脓素 / / / 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化 赖氨酸脱羧酶 精氨酸水解
6、酶 硝酸盐还原 / / 明胶液化 / 42生长 / / ,第三节 不动杆菌,不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。 含6个种：醋酸钙不动杆菌 洛菲不动杆菌 溶血不动杆菌 鲍曼不动杆菌 琼氏不动杆菌 约翰逊不动杆菌,一、生物学性状 形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。 最适温度35 ，鲍曼不动杆菌42可生长。 血平板上 圆形凸起、23 mm ，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶血不动杆菌可形成 -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。,生
7、化反应 氧化酶阴性，触酶阳性，葡萄糖O/F为氧化型。 不动杆菌属主要菌种生化反应特征： 二、致病性 该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。,三、微生物学检查 标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓汁等。 检验程序： 检验方法： （1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性球杆菌成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳性。 （2）分离培养：,（3）初步鉴定：染色为革兰阴性球菌或球杆菌，成双排列。氧化酶（），硝酸盐还原（）。动力（），不发酵葡萄糖。 符合上述五项即可判定为不动杆菌属的细菌。,脓汁、
8、痰液、尿液,脑脊液、血液,分 离 培 养 （血液琼脂、麦康凯琼脂）,增菌培养,直接 涂片革兰染色,挑选可疑菌落,生化反应,初步鉴定,KIA：底层、斜面不变硝酸盐还原、氧化酶、动力,最后鉴定,35 1824h,不动杆菌属及产碱杆菌属检验程序,醋酸钙不动杆菌,鲍曼不动杆菌,溶血不动杆菌,约 翰 逊不动杆菌,琼氏不动杆菌,洛菲不动杆菌,葡萄糖氧化 +/_ 木糖氧化 +/_ 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 _ /+ 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 _/+ 柠檬酸盐利用 +/_ 明胶液化 生长温度37 41 42 ,不动杆菌属主要菌种生化反应特征,产碱杆菌属（Alcaligenes）为一群有动力，
9、专性需氧，不分解糖类的革兰阴性菌杆。 括2个种，即粪产碱杆菌，去硝化产碱杆菌。后者又分为去硝化亚种和木糖氧化亚种。 广泛存在于自然界，水和土壤中及人体皮肤粘膜有其存在。常从临床标本中分离出。,第四节 产碱杆菌属,一、生物学性状 形态与染色：为革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，有动力，无芽胞，多数无荚膜。 培养特性：需氧，最适温度2537，营养要求不高。 血平板：形成较大灰白、扁平、边缘菲薄的菌落。 麦康凯和SS：形成透明无色菌落（少数菌株在SS上不长）。,液体培养：均匀混浊生长，表面形成菌膜，管底有粘性沉淀。在含蛋白胨的肉汤中产氨，使PH达8.6，为本菌鉴别特征。 生化反应：氧化酶，触
10、酶，硝酸盐还原，枸橼酸盐利用； 不产生靛基质和硫化氢，不液化明胶，无苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶。大多数不能氧化分解各种糖类。,二、微生物检验 标本采集：脓汁、分泌物、尿液、血液等。 检验程序：同前 鉴 定：根据菌落形态、染色性、氧化酶试验，再根据生化反应作进一步鉴定。,硝酸盐还原 枸橼酸盐利用 氧化酶 尿素酶 / 丙二酸盐 / O/F试验 葡萄糖 O/ 木糖 O/ DNA中GC（mol%） 55.959.4 66.069.8 63.968.9,O：氧化；F：发酵；,粪产碱杆菌 木糖氧化亚种 去硝化亚种,产碱杆菌的鉴别,铜绿假单胞菌纯培养的镜下形态（革兰染色）,铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,绿 脓 杆 菌,铜绿假单胞菌绿脓素,铜绿假单胞菌荧光素,葡萄糖OF反应结果,枸橼酸盐利用试验,硝酸盐还原试验,鲍曼不动杆菌纯培养的镜下形态（革兰染色）,鲍曼不动杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,鲍曼不动杆菌在麦康凯琼脂平板上的深红色菌落（19-24h）,思考题： 1、 什么叫非发酵菌？有何特点？ 2、绿脓杆菌在形态和培养特性有 何特性？如何鉴定绿脓杆菌？,