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1、酶法拆分以及酶稳定性的研究进展,2008140618,酶法拆分,立体专一性强,拆分效率高,生产条件温和,无环境污染,氨基酸：D-苯基甘氨酸是利用氨肽酶成功地进行了拆分。 非甾体抗炎药：Moreno等利用固定化脂肪酶(CCL)催化萘普生乙酯的不对称水解,制备了光学纯度为95%的(S)-萘普生。,酶法拆分的研究进展,5-羟色胺拮抗物和摄取抑制剂： 一种新的5-HT拮抗物MDL100907Margolin等利用脂肪酶(CCL)催化酯的水解制备了(R)-MDL100907,产品光学纯度达99%。,酶法拆分的研究进展,-阻断剂： Bevinakatti等在有机溶剂中利用脂肪酶PS催化酯的不对称水解,对现
2、有外消旋普萘洛尔生产工艺的中间体1-氯-3-萘氧-2-丙醇进行了拆分,制备了(S)-普萘洛尔的合成子(S)-1-氯-3-萘氧-2-丙醇。,酶法拆分的研究进展,酶稳定性的研究进展,提高稳定性,酶稳定性的研究进展,1、化学修饰法,（1）交联酶结晶法： 多肽链内部或分子间交联，阻止分子的展开从而稳定蛋白质。 主要有：脂肪酶、青霉素酞基转移酶、枯草菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶。,1、化学修饰法,（2）多聚体的共价结合： 把蛋白质分子结合到可溶性多聚本的多个结合位点上，属一种交联方式。 Bieniarz等人已经把这种方法用于三种特定的蛋白质：碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和藻红蛋白。并进行稳定性测试，结果良好。,1
3、、化学修饰法,(3)表面修饰： Khajeh等用甲基顺丁烯二酸酐修饰两种细菌的-淀粉酶的侧链赖氨酸。这两种细菌分别是嗜温B淀粉稀释细菌和地衣芽抱杆菌。结果显示有较好构象的稳定性。,2、添加稳定剂,(1)盐 盐类主要存在离子键作用，当酶的活性中心含有离子作为配位体时，降低分子内静电排斥作用，增加酶的稳定性。 盐可作为水分子的替代物占据水的位置，排除自由水对酶造成的不稳定影响。 专利EP 0758018 A1描述在用盐来稳定固态植酸酶时，发现二价阳离子效果最好而且无机盐与酶的质量比控制在5%90%效果较好。,2、添加稳定剂,(2)多羟基化合物 多羟基醇和糖类等多羟基化合物能形成氢键，通过氢键与酶蛋
4、白表面分子相连接，使酶蛋白分子稳定化； 有助于形成可增加表面张力和溶液黏度的溶剂层，降低蛋白水解而起到稳定酶的作用。 还能够通过填补酶空间结构的空隙，降低由于加热引起酶空间结构改变而导致的酶活损失。 专利WO 93/16175描述用尿素、甘油或山梨醇等来稳定液态植酸酶。,2、添加稳定剂,(3)其他稳定剂 Chang Chih Chen等（2001）研究发现，在植酸酶溶液中加入可溶性淀粉和高粱糖浆废弃液可提高植酸酶的热稳定性。 一些小分子量的添加剂通过诱导蛋白质优先水合作用而增加其稳定性，即添加剂防止其它物质与蛋白质分子结合，添加剂和肤骨架之间的相互反应对其稳定性不利。,3、固定化酶,酶的固定化
5、就是通过化学或物理的处理方法,使原来水溶性的酶与固态的水不溶性支持物相结合或被载体包埋。 优点: (1) 对热、pH等的稳定性提高,对抑制剂的敏感性降低,有的酶具有了抗蛋白酶分解的特性; (2) 酶就可以回收, 且酶活力降低较少 (3) 适合于连续化、自动化生产,催化过程容易控制,且产品中不会带进酶蛋白或细胞,改善了后处理过程,提高了酶的利用效率,降低了生产成本。,4、其他,直接用戊二醛交联产该酶的大肠杆菌,也有用ABSE-交联琼脂糖与青霉素酰化酶直接偶联,还有的利用三醋酸纤维素包埋和戊二醛交联相结合固定青霉素酰化酶高产菌,这些试验的结果都显示各种固定化方法均可在很大程度上提高酶的稳定性、增加
6、酶的转化率。 某制药公司用聚丙烯酰胺凝胶包埋含有高活力天冬氨酸酶的大肠杆菌,用于工业上利用延胡索酸转化为L-天冬氨酸。 上海生化所用固定化的3-核糖核酸酶从RNA中生产3-核苷酸,使酶的利用率提高了10倍;袁中一等将ABSE-纤维素固定的5-磷酸二酯酶用来生产5-核苷酸。固定化谷氨酸脱羧酶可以生产-氨基丁酸,制成了CO2电极,可用于测定谷氨酸的含量。,结语,现在对于催化剂的立体选择性、催化活性等有较多研究，但是在其稳定性方面的研究甚少。酶作为一种生物催化剂具有优良的催化性能,与化学催化剂相比，具有高度选择性，反应条件温和以及催化效率高等优点。然而在将酶促反应应用于工业化生产以前，通常还要对其稳定性做进一步的改进，使其能够重复利用，达到更大的经济效益。,