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1、还原糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法,班级 ： 生科2班 姓名 ： 胡雨雨 同组人 ：张贤明,实验目的,1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理。 2. 学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。,实验原理,还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。 在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系
2、， 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。,仪器、试剂、材料,仪器 ： （ 1 ）试管X 11 （ 2 ）玻璃漏斗 X2 （ 3 ）烧杯： 1OOml X 1 （ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1 （ 5 ）容量瓶： 100ml X 3 （ 6）恒温水浴 （ 7）沸水浴 （ 8）电子天平 （ 9）分光光度计 试剂 ： （ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 10mg 分析纯葡萄糖（预先在 8 0 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 10ml 的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3、 （ 2 ） 3 ， 5- 二硝基水杨酸试剂：将 0.315g 3, 5- 硝基水杨酸和 13.1ml 2mol/NaOH溶液，加到 25ml 含有 9.25g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 0.25g 结晶酚和 0.25g 亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至 50ml ，贮于棕色瓶中备用。 材料 ： 食用面粉。,注意事项,1. 沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住，以防止水分蒸发引起体积误差。 2. 应该待反应体系稳定后进行比色（约10min）。 3. 比色时，比色皿中盛放的溶液体积不应过多，一般在2/33/4。 4. 比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。 5. 标准曲线制作与样品含糖量测
4、定应同时进行，一起显色和比色。 6.实验完成后洗净仪器，放回原位。,实验步骤,1.标准曲线的绘制,实验步骤,按照上表取7支试管配好试剂，将各管摇匀，在沸水浴中加热 5min ，取出后立即冷却至室温，再以蒸馏水定容至 25ml ，混匀。在 540nm 波长下，用 0 号管调零，分别读取 1-6 号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线。,实验步骤,得出吸光值,实验步骤,以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线,实验步骤,2. 样品中还原糖和总糖含量的测定 样品中还原糖的提取：准确称取 3.0g 食用面粉，放在 50ml 三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后
5、加 25ml 蒸馏水，搅匀，置于 5 0 恒温水浴中保温 20min ，使还原糖浸出。离心，用 2Oml 蒸馏水洗残渣，再过滤，将两次的滤液全部收集在 50ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。,实验步骤,3 ）显色和比色，取 2 支 25 ml 刻度试管，编号，按下表所示的量操作。,根据函数 y=0.595x-0.046 可得葡萄糖含量,样品光密度平均值=(0.112+0.121)/2=0.1165,实验结果及数据处理,已知提取液总体积为100ml、测定时取用体积为0.5ml、样品毫克数为3000mg、根据以下公式进行计算。,样品平均葡萄糖=0.27+0.28=0.2
6、75mg 还原糖%=（0.275*100*100%）/（0.5*3000）=18.3%,其他方法,糖含量定量测定的方法除此之外还有 高效液相色谱法（HPLC） 苯酚-硫酸法 蒽酮法 双折射现象,心得,从结果中所得到的的心得 并不是所有的糖有甜的味道，只有少数结构简单的糖是有甜味的，如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖等，充斥于各种甜食之中的就是它们。自然界存在的多数糖多糖，吃起来并不甜，各种粮食都是含糖大户，主要是淀粉和糊精。粮食不仅可以提供能量，而且还是B族维生素、膳食纤维、矿物质的重要来源，因此人们的生活中的确不能没有它。当我们食用面食时，虽然食用的是主食，但事实上其中的一半都是糖分所以对于不同身体素质的人要注意合理食用面食。众所周知，糖分摄入过多会导致不同的疾病，摄入过多的糖分，多余不能消化的糖分，会被身体储存起来，青少年在饮食中摄入过多糖分，他们成年后患心血管疾病的风险会明显升高。但其实正常食用面食并不会导致严重的疾病，重要是合理安排膳食，合理搭配就好了。,实验误差分析,1.在称取面粉时候，滤纸上有少许淀粉未倒干净，或者电子天平不太准确造成的质量上的误差。 2.在定容和移取液体时，读数不准确，或者有的移液管没有写吹字却吹了，造成的误差。 3.在测吸光度值的时候没有擦干净导致的测量误差，或者用酒精洗的时候没有洗干净造成的误差。,谢谢观看！,