第四章食品添加剂的分析.ppt

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1、第四章 食品添加剂的分析,第一节 概述,一、食品添加剂的定义和分类 1.食品添加剂的定义 国食品添加剂卫生管理办法(2002年)中规定，食品添加剂指“为改善食品品质和色、香、味以及根据方法或加工工艺的需要而加入食品中的化学合成或天然物质”。 界各国对食品添加剂的定义不尽相同，因此所规定的添加剂种类也不尽相同。如某些国家，包括欧共体各国和联合国食品添加剂法典委员会(CCFA)在内，在食品添加剂的定义中明确规定：“不包括为改进营养价值而加入的物质”，而美国联邦法规(CFR)中则不但包括营养物质，还包括各种间接使用的添加剂(如包装材料、包装容器及放射线等)。,第一节 概述,食品添加剂可以是一种或多种

2、物质的混合物，它们中大多数并不是食品原料固有的物质，而是在生产、贮存、包装、使用等过程中在食品中为达到某一目的而有意添加的物质。食品添加剂一般都不能单独作为食品来食用，它的添加量有严格的控制，而且为取得所需效果的添加剂量也很小。,第一节 概述,2.食品添加剂的分类 目前，国际上对食品添加剂的分类尚未有统一的标准。按其功能分，我国在食品添加剂卫生使用标准(GB 27601996)中将其分为22类：酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂漂白剂、膨松剂、胶母糖基础剂、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、其他食品添加

3、剂和食用香料。按其来源可分为天然物质、化学物质和半天然物质等。天然食品添加剂是利用动植物或微生物的代谢产物等为原料，经提取制得的。化学合成的食品添加剂是通过化学反应等制成的。,第一节 概述,3.食品添加剂的管理 国际上食品添加剂的研究、开发、应用由联合国粮农组织(FAD)和世界卫生组织(WHO)加以管理，其中设有联合国食品标准委员会(CAC)，标准委员会下还设有各种食品标准委员会，其中负责世界通用食品添加剂标准的是食品添加剂标准委员会(CCFA)，同时还设立了联合食品添加剂专家委员会(JECFA)、联合食品标准委员会及联合食品添加剂标准委员会等重要的咨询机构。国际上对食品添加剂有一套比较严密的

4、评价程序，先由各国政府或生产部门将有关食品添加剂的信息传递给有关食品添加剂的国际组织，然后国际组织将毒理学结论、允许使用量、质量标准等再反馈给各国政府以征求意见，进而成为国家的统一意见。,第一节 概述,二、食品添加剂的使用要求和管理 （1）食品添加剂应有规定的名称，须经过严格的毒理学鉴定程序，保证在规定使用限 量范围内对人体无害。 （2）严格的质量标准，有害杂质不得检出或不能超过允许限量。 （3）进入人体后，能参与人体正常的物质代谢，或能经过正常解毒过程排出体外，或不被吸收而全部排出体外，不能在机体内形成对人体有害的物质。 （4）对食品的营养成分不能有破坏作用，也不应影响食品的质量及品质。 （

5、5）应具有用量小、功效明显的特点。能真正提高食品的内在质量和感觉性质。 （6）使用安全、方便。 （7）添加于食品后能分析鉴定出来,第一节 概述,三、食品添加剂的使用标准 评价食品添加剂的毒性，首要标准是每日允许摄入量(Acceptable Daily Intake，ADI)，ADI值指人一生连续摄人某种物质而不致影响健康的每日最大允许摄人量，以每日每公斤体重摄入的毫克数表示，单位为mgkg。ADI是由动物长期毒性试验所取得的最大无作用量(MNL)数据与安全系数外推得出的。安全系数通常为11001500。 判断食品添加剂的第二常用指标是半数致死量(50Lethal dose，LD50)，也称致死

6、中量。通常是指能使一群被试验动物中毒死亡一半所需的最低剂量，其单位是mgkg(体重)。对食品添加剂，主要指经口的半数致死量。,第一节 概述,四、食品添加剂的毒性学评价 食品添加剂的毒理学评价的主要内容如下。 1食品添加剂的化学结构、理化性质、纯度、在食品中的存在形式及其降解过程和 降解产物。 2食品添加剂随同食品进入机体后，在组织器官内的贮留分布、代谢转变及排泄情况。 3食品添加剂及其代谢产物在机体内引起的生物学变化，即对机体可能造成的毒害及其机理。包括急性毒性、慢性毒性、对生育繁殖的影响、胚胎毒性、致畸性、致突变性、致癌性、致敏性等,第二节 食品中栀子黄的测定,一、效液相色谱法 1原理 样品

7、中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。,第二节 食品中栀子黄的测定,2试剂：试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 （1）甲醇。 （2）石油醚：6090。 （3）乙酸乙酯。 （4）三氯甲烷。 （5）姜黄色素。 （6）栀子甙。 （7）栀子甙标准溶液：称取2.75mg栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5g/mL栀子甙。 （8）栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5.5，11.0，16.5，22.0g/mL的栀子甙标准系

8、列溶液。,第二节 食品中栀子黄的测定,3仪器 （1）小型粉碎机。 （2）恒温水浴。 （3）高效液相色谱系统：Waters M501泵，U6K进样器，岛津RF535。荧光检测器，Blue chip/PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。,第二节 食品中栀子黄的测定,4分析步骤 （1）样品处理 1饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4m过滤，滤液备作HPLC分析用。 2酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。 3糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液

9、并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取35次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。,第二节 食品中栀子黄的测定,（2）测定 a.HPLC参考条件 色谱柱：粒度5m ODS C18150mm4.6mm 流动相：甲醇：水(3565) 流速：0.8mL/min 波长：240nm b.标准曲线 在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8L，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。 c.样品测定 在实验条件下，注入5L“5.1”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得

10、样品中栀子甙含量。,第二节 食品中栀子黄的测定,5结果 a.计算 按下式计算。 （4-1） 式中：X样品中栀子黄色素的含量，g/Kg； A进样液中栀子甙的含量，g; V样品制备液体积，mL； m一一样品质量，g。 b.本标准的检测限、回收率、精密度。 本方法栀子甙的检测限为3.2g/mL，栀子黄色素浓度在0.20.3g/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94.1%，92%，91.3%。相对标准差(R.S.D)%：2.69，4.70，3.20。,第二节 食品中栀子黄的测定,二、薄层色谱法 1原理 样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯

11、下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。 2试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 （1）甲醇。 （2）乙醇。 （3）乙酸乙酯。 （4）丙酮。 （5）甲酸。 （6）三氯甲烷。 （7）硅胶GF254：薄层色谱用。 （8）展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水(5511)。 （9）展开剂：三氯甲烷：甲醇(63)。,第二节 食品中栀子黄的测定,3仪器 （1）全玻璃浓缩器。 （2）薄层板涂布器。 （3）玻璃板，4cm20cm，20cm20cm。 （4）层析缸。 （5）UV254 nm荧光灯。 （6）微量注射器。,第二节 食品中栀子黄的测定,4操作方法 （1）样品处理：将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行T

12、LC检识。见5.2.2展开结果。 酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取35次，至无桅子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。 2饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取35次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。 3蛋糕：称取10.0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可)，加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子

13、黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。,第二节 食品中栀子黄的测定,（2）测定 1点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0.5L，板的右边点2L栀子黄色素标准溶液。 2展开：将4.2.1项已点好样和标准板，用2.8，2.9展开剂展开，待栀子黄色素明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄Rf值为0.64和0.50。而姜黄色素为0.11和0.15。样品与标品的斑点的Rf值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。,第三节 红曲色素的测定,一、测定原理 样品中红曲色素经提取，净化后，TLC分离，与标准TLC板比较定性，选用分配系数在两相中不同

14、而达到分离的目的。 本标准规定了用薄层层析方法测定食品中红曲色素。 本标准适用于食品中红曲色素的测定。,第三节 红曲色素的测定,二、试剂 1硅胶：柱层析用，120180目。 2硅胶GF254。 3甲醇。 4正己烷：醋酸乙酯：甲醇(532)。 5氯仿：甲醇(83)。 6海沙：先用110盐酸煮沸15min，用水洗至中性，再于105干燥，贮于具塞的玻璃瓶中，备用。 7石油醚：沸程6090。,第三节 红曲色素的测定,8红曲色素的标准溶液：取1g红曲色素，加入30mL甲醇溶解，然后加入5g硅胶，拌匀，装入50硅胶层析柱中(湿法装柱)，将拌有硅胶的红曲色素装在柱顶，后用甲醇洗脱；直至洗脱下来的甲醇无的为止

15、，然后减压浓缩至膏状，于6070烘箱中烘干，约剩下0.89g的红曲色素作为薄层分析用标准品。用甲醇配成1mg/mL的标准溶液。 9红曲色素标准使用液：临用时吸取标准溶液5.0mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度此溶液每毫升相当于0.1mg红曲色素。,第三节 红曲色素的测定,三、仪器 1微量注射器10L。 2展开槽25cm6cm4cm。 3薄层板：市售预制硅胶GF254板。 4层析柱。 5接收瓶。 6全玻璃浓缩器。 7真空泵。,第三节 红曲色素的测定,四、操作方法 1样品处理 （1）配制酒：取10mL样品，于水浴上挥干，加少量乙醇溶解残渣，进行薄层分析。 （2）蛋糕：取30.0g蛋糕，搅

16、碎，加海沙少许，混匀，用热风机吹干样品即可，加入30mL石油醚去脂肪，重复35次，弃去石油醚，然后将蛋糕渣放入通风橱中，残余石油醚自然挥除后，放入蒸馏瓶中，加95%乙醇约90mL，回流30min，过滤，用乙醇洗涤5次，合并提取液，将提取液浓缩至20mL。此液留作测定用。 （3）市售豆腐乳：取豆腐乳30g，搅碎，加95%的乙醇5070mL，提取回流30min，过滤，用乙醇洗涤残渣5次，合并乙醇提取液，减压浓缩至20mL，此液留作测定用。,第三节 红曲色素的测定,（4）火腿肠：称取30g火腿肠，捣碎，加海沙少许，混匀，每次加入50mL石油醚提取脂肪，共提取三次，每次提取45min，过滤，滤液弃去，

17、残渣放通风橱中，用吹风机吹干，用50mL甲醇提取红曲色素30min，共3次，过滤，合并滤液，滤液中加入3mL的钨酸钠溶液沉淀蛋白，弃去蛋白，滤液减压浓缩至10mL，此液供测定用。,第三节 红曲色素的测定,2测定 （1）点样：取市售硅胶GF254板(4cm20cm)，离底边2cm处，点上述样品溶液10L，同时在右边点2L色素标准溶液。 （2）展开：将上述已点上样品与标准品的二块板，分别放入试剂“正己烷：醋酸乙酯：甲醇(532)”和“正己烷：醋酸乙酯：甲醇(532)”中展开，待展开剂前沿至15cm处，取出，放入通风橱，晾干，在UV254 nm下观察，试剂“正己烷：醋酸乙酯：甲醇(532)”得到4个

18、点，Rf值分别分0.86，0.71，0.54，0.38，试剂“正己烷：醋酸乙酯：甲醇(532)”得到3个点，Rf值分别为0.86，0.69，0.57。样品与标品的斑点的Rf值一致。则证明样品的色素为红曲色素。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,一、紫外分光光谱法 1.原理 咖啡因的三氯甲烷溶液在2765nm波长下有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而可进行定量。 2.试剂 本标准所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水。 （1）无水硫酸钠。 （2）三氯甲烷：使用前重新蒸馏。 （3）15高锰酸钾溶液：称取15g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。 （4）亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称

19、取10g无水亚硫酸钠(Na2SO3)，用水溶解并稀释至100mL。另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至100mL，然后二者均匀混合。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（5）15(V/V)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 （6）20(m/V)氢氧化钠溶液；称取20g氢氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。 （7）20(m/V)乙酸锌溶液：称取20g乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O，加入3mL冰乙酸，用水溶解并稀释至100mL。 （8）10(m/V)亚铁氰化钾溶液：称取10g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O用水溶解并稀释至100mL。 （9）咖啡

20、因标准品；含量980以上。 （10）咖啡因标准储备液：根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成每毫升相当于05mg咖啡因的溶液，置于冰箱中保存。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,3.仪器 紫外分光光度计。 4.分析步骤 （1）样品的处理 可乐型饮料：在250mL的分液漏斗中，准确移入10.020.0mL经超声脱气后的均匀可乐型饮料试样，加入1.5%高锰酸钾溶液5mL，摇匀，静置5min，加入混合溶液10mL，摇匀，加入15%磷酸溶液1mL，摇匀，加入20%氢氧化钠溶液1mL，摇匀，加入50mL重蒸三氯甲烷，振摇100次，静止分层，收集三氯甲烷。水层再加入40mL重蒸三氯甲烷，振摇100次，静

21、置分层。合并二次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，摇匀，备用。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,咖啡、茶叶及其固体制成品：在100mL烧杯中称取经粉碎成低于30目的均匀样品0.52.0g，加入80mL沸水，加盖，摇匀，浸泡2h，然后将浸出液全部移入100mL容量瓶中，加入20%乙酸锌溶液2mL，加入10%亚铁氰化钾溶液2mL，摇匀，用水定容至100mL，摇匀，静置沉淀，过滤。取滤液5.020.0mL按上述操作进行，制备成100mL三氯甲烷溶液，备用。 咖啡或茶叶的液体制成品：在100mL容量瓶中准确移入10.020.0mL均匀样品，加入20%乙酸锌溶液2mL，摇匀，加入10%亚

22、铁氰化钾溶液2mL，摇匀，用水定容至100mL，摇匀，静置沉淀，过滤。取滤液5.020.0mL按5.1.1操作进行，制备成100mL三氯甲烷溶液，备用。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（2）标准曲线的绘制 从0.5mg/mL的咖啡因标准储备液中，用重蒸三氯甲烷配制成浓度分别为0，5，10，15，20g/mL的标准系列，以0g/mL作参比管，调节零点，用1cm比色杯于276.5nm下测量吸光度，作吸光度咖啡因浓度的标准曲线或求出直线回归方程。 （3）样品的测定 在25mL具塞试管中，加入5g无水硫酸钠，倒入20mL样品的三氯甲烷制备液，摇匀，静置。将澄清的三氯甲烷用1cm比色杯于276.5nm

23、测出其吸光度，根据标准曲线(或直线回归方程)求出样品的吸光度相当于咖啡因的浓度c(g/mL)，同时用重蒸三氯甲烷作试剂空白。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,5.结果 （1）计算： 可乐型饮料中咖啡因含量 （4-2） 咖啡、茶叶及其固体制成品中咖啡因含量（mg/100g） （4-3） 咖啡、茶叶及其液体制成品中咖啡因含量（mg/L） （4-4）,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,式中：样品吸光度相当于咖啡因浓度，g/mL； C0试剂空白吸光度相当于咖啡因浓度，g/mL； m称取样品的质量，g； V移取样品的体积，mL； V1移取样品处理后水溶液的体积，mL。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（2

24、）在本实验条件下： 本法仪器检出限为0.2g/mL，方法检出限可乐型饮料为3mg/L，咖啡、茶叶及其固体制成品为5mg/100g，咖啡或茶叶的液体制品为5mg/L。 标准曲线线性范围：0.030.0g/mL。 相关系数：0.999。 方法回归率：90.1%101.8%。 相对标准偏差：小于4.0%。 （3）允许差： 同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值可乐型饮料为10%，咖啡、茶叶及其制品为15%。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,二、高效液相色谱法(HPLC) 1.原理 咖啡因的甲醇液在286nm波长下有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而可进行定量。 2.试剂 （1

25、）甲醇：HPLC试剂。 （2）乙腈：HPLC试剂。 （3）三氯甲烷：分析纯(必要时须重蒸)。 （4）超纯水(18.2M)。 （5）无水硫酸钠：分析纯。 （6）氯化钠：分析纯。 （7）咖啡因标准品：纯度98%以上。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,3.仪器和设备 （1）液相色谱。 （2）色谱柱BondapakTMC18(30cm3.9mmid)。 （3）预柱RESAVETMC18。 （4）超声清洗器(CQ250)。 （5）混纤微孔滤膜。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,4.分析步骤 （1）样品的处理 可乐型饮料 a.脱气：样品用超声清洗器在40下超声5min。 b.过滤：取脱气试样10.0mL通

26、过混纤微孔滤膜过滤，弃去最初的5mL，保留后5mL备用。 咖啡、茶叶及其制成品 称取2g已经粉碎且小于30目的均匀样品或液体样品放入150mL烧杯中，先加23mL超纯水，再加50mL三氯甲烷，摇匀，在超声处理机上萃取1min(30s二次)，静置30min，分层。将萃取液倾入另一150mL烧杯。在样品中再加50mL三氯甲烷，重复上述萃取操作步骤，弃去样品，合并二次萃取液，加入少许无水硫酸钠和5mL饱和氯化钠，过滤，滤入100mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100mL。最后取10mL滤液按10. （1）.b.操作进行。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（2）色谱条件 流动相：甲醇：乙腈：水57291

27、4(每升流动相中加入0.8mol/L乙酸液50mL)。 流动相的流速：1.5mL/min。 进样：可乐型饮料10L，茶叶、咖啡及其制成品520L。 （3）标准曲线的绘制 用甲醇配制成咖啡因浓度分别为0，20，50，100，150g/mL的标准系列，然后分别进样10L于波长为286nm处测量峰面积，作峰面积咖啡因浓度的标准曲线或求出直线回归方程。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（4）样品测定 从试样中吸取可乐饮料10L或咖啡、茶叶及其制品5mL进样，于286nm处测其峰面积，然后根据标准曲线(或直线回归方程)得出样品的峰面积相当于咖啡因的浓度c(g/mL)。同时作试剂空白。,第四节 饮料中咖啡

28、因的测定方法,5.结果 （1）计算： 可乐型饮料中咖啡因含量（mg/LK）=c （4-5） 咖啡、茶叶及其制成品中咖啡因含量（mg/100g）= （4-6） 式中：F进样量是5L的倍数。 （2）在本实验条件下： 本法仪器检出限为0.72g/mL，方法检出限：可乐型 饮料为0.72mg/L，咖啡、茶叶及其制品为1.8mg/100g。 标准曲线线性范围：0.0150.0g/mL。 相关系数：0.999。 方法回收率：91.9%105.8%。 相对标准偏差：小于2%。,第四节 饮料中咖啡因的测定方法,（3）允许差： 同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值可乐型饮料为5%。,第五节 食品添加

29、剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,一、方法原理 将试样溶解于盐酸溶液中,加入离子强度调节缓冲溶液,用氢氧化钠或盐酸溶液调节pH至5.50.1,用氟离子选择电极直接电位法测定溶液中解离的氟离子,由校准曲线查得氟化物的浓度。 主题内容与适用范围： 本标准规定了食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定方法。 本标准适用于氟化物含量(以氟计)550mg/kg的产品。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,二、试剂 分析中应使用去离子水,其电导率应小于21010-7s/cm;使用的试剂应为分析纯以上,配制的试剂溶液,用氟离子选择电极测试,其氟含量应低于校准曲线的最低点。去离子水和试剂溶液应贮存于聚

30、乙烯塑料瓶中。 1盐酸(GB 622),c(HCl)=1mol/L溶液。 2柠檬酸钠(HG 3-1298), c(Na3C6H5O72H2O) =1mol/L溶液。 3乙二胺四乙酸二钠(FDTA)(GB 1401),c(EDTA) =0.2mol/L溶液。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,4氟化钠(GB 1264),优级纯,含氟5g/ml标准溶液 称取2.2100g预先在110干燥2h的氟化钠于400ml烧杯中,加入200ml水,搅拌使其溶解。用水定量转移至1000ml容量瓶中,并稀释至刻度,混匀。将此溶液转移至洁净干燥的塑料瓶中贮存。此溶液含氟1mg/ml。使用前吸取上述溶液

31、5.0ml至1000ml容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。此溶液含氟5g/ml。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,三、仪器 1电位计,精度2mV/1000mV,测量范围01500mV。 2氟离子选择性电极。 3单液接甘汞电极,232型或相当的电极。 4玻璃电极,231型或相当的电极。 5精密酸度计,分度0.02pH单位,如PHS-2型或相当的仪器。 6聚四氟乙烯塑料杯,125ml,250ml。 所用玻璃仪器应为用含氟低的硬质玻璃或95玻璃制作的。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,四、实验过程 1校准曲线的绘制 分别吸取1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml氟

32、化钠标准溶液3(4)至五个250ml塑料杯4(6)中(每杯中分别含氟5、10、15、25、50g),向各杯依次加入50ml水,5ml盐酸3 (1),10ml柠檬酸钠溶液3(2)和10mlEDTA溶液3(3),混合。将各杯中溶液分别定量转移至100ml容量瓶中,用水分次冲洗塑料杯,并转移至容量瓶使至刻度,混匀。此溶液的pH值应为5.50.1用酸度计(4.5)测量之。按仪器使用说明书准备好仪器。取上述溶液各50ml至125ml塑料杯(4.6)中,以氟离子选择性电极为响应电极,单液接甘汞电极为参比电极,按氟浓度由低到高的顺序测定各溶液的电极电位值。在半对数坐标纸上，以对数坐标定浓度（gF/100ml

33、),十进坐标定电位值,绘制电位/浓度对数(E/logc)校准曲线。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,2测定称取1.00g试样至150ml玻璃烧杯内,加入10ml水,在连续搅拌下,慢慢地加入20ml盐酸(3.1)溶解样品。迅速煮沸1min,用冰水迅速冷却至室温。依次加入15ml柠檬酸钠溶液(3.2)和10mlEDTA溶液(3.3),混合。必要时用盐酸(3.1)或氢氧化钠溶液(1mol/L)调节pH至5.50.1。然后，用水定量转移溶液至100ml容量瓶中,并稀释至刻度,混匀。取此溶液50ml至125ml塑料杯(4.6)中,按5.1测得试验溶液的电位值。从校准曲线上查得样品的含氟量

34、,以微克氟计。,第五节 食品添加剂三聚磷酸钠中氟化物含量的测定,五、试验结果表示 样品中的氟化物含量以毫克氟每千克(mgF/kg)表示。取两个平行测定值的平均值作为结果。平行测定结果之差应不大于3mg/kg。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,一、技术要求 1外观 本品为鲜红色粉末。 2 粒度 本品80目100通过。 3项目和指标,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,二、试验方法 除特别注明外,试验中所用试剂为分析纯试剂,水为蒸馏水或相应纯度的水,溶液为水溶液,仪器设备为一般实验室仪器设备。 1外观及粒度 称取20g样品,用肉眼观察颜色,再用80目分样筛测

35、定。 2鉴别 紫胶红色素为天然有机酸的混合物,20时的溶解度为0.0335g,在95乙醇中溶解度为0.916g,易溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠溶液中,在pH值大于6的溶液中易与碱金属之外的金属离子生成水不溶性的色淀。其溶液的颜色随pH值变化而改变,pH值小于4为桔黄色,pH值4.05.0为桔红色,pH值大于6为紫红色。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,3干燥失重的测定 （1）测定手续 称取样品3g(称准至0.0002g),置于已在1052烘至恒重的称量瓶内,置于1052烘箱中,烘至恒重。 （2）计算和结果的表示 干燥失重X1(以重量百分数表示)按式(1)计算: （4-7） 式中: G1称

36、量瓶加样品重,g; G2烘后称量瓶加样品重,g; G样品重,g。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,4灼烧残渣的测定 （1）测定手续 称取样品3g(称准至0.0002g),置于已在700800恒重的瓷坩埚中,先低温炭化(约300),再高温灰化(约500),移入马福炉中在700800下灼烧至恒重。 （2）计算和结果的表示 灼烧残渣X2(以重量百分数表示)按式(2)计算: （4-7） 式中: G1坩埚加残渣重,g; G2坩埚重,g; G样品重,g。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,5水溶液pH值的测定 （1）仪器设备 酸度计。 （2）测定手续 称取样品约0.034g,室温下,在150ml玻璃

37、烧杯中加水100ml配成饱和溶液,用酸度计测其pH值。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,6吸光度的测定 （1）仪器设备 分光光度计,附0.5cm比色皿。 （2）试剂和溶液 无水碳酸钠(:1溶液; 盐酸:0.1mol/L溶液; 邻苯二甲酸氢钾:0.1mol/L溶液; pH3.0缓冲溶液:取0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液50ml于100ml容量瓶中,加入0.1mol/L盐酸溶液22.3ml,再用水稀释至刻度,摇匀。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,（3）测定手续 称取样品0.1g(称准至0.0002g),置于150ml烧杯中,加入1碳酸钠溶液10ml搅匀,待色素全部溶完后,倾入100m

38、l容量瓶中,用少量水洗涤烧杯,洗涤液并入100ml容量瓶中,再用水稀释至刻度,摇匀。取出10ml置于100ml容量瓶中,用0.1M盐酸溶液调pH至3.0左右,用pH3.0缓冲液稀释至刻度,摇匀,取出稀释液置于0.5cm比色皿中,用分光光度计于490nm波长处测量吸光度。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,7铅、铜、砷含量的测定 （1）样品处理 试剂和溶液： 硝酸; 硫酸。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,（2）操作方法： 称取样品5g(称准至0.01g)于凯氏烧杯中,加玻璃珠三粒,加硝酸10ml,然后小心地缓缓加入硫酸5ml,待反应缓和后,小心加热至瓶中液体开始变棕色时,逐次滴加硝酸至有

39、机物分解完全,再升高温度,至发生三氧化硫白烟为止,此时溶液应为无色或微带黄绿色,如温度升高后溶液变棕色,应再加硝酸破坏有机质。放冷,小心加水10ml,煮沸赶走残余的硝酸至瓶内发生三氧化硫白烟,如果需要,则可重复数次以除去残余的硝酸,直至液体变成无色透明为止。放冷,小心将溶液用少量水稀释,转入50ml容量瓶中,用水洗涤凯氏烧瓶数次,洗涤液并入容量瓶中,冷却,加水至刻度,摇匀。此液供铅、砷、铜含量测定用。 用同量试剂按上述操作做一份空白。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,（3）铅含量的测定 a.仪器设备： 分光光度计,附2cm比色皿。 试剂和溶液：（所用试剂和水必须无铅,如含铅应处理除去） 柠

40、檬酸氢二铵:20溶液。 盐酸羟胺:20溶液。 盐酸:10溶液,取盐酸23.5ml,加入水中并稀释至100ml。 硝酸:1溶液。 氨水; 三氯甲烷; 995乙醇。 百里香酚蓝(麝香草酚蓝):0.1溶液,称取麝香草 酚蓝0.1g溶于100ml乙醇中,过滤即得;,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,氰化钾:10溶液; 氰化钾氨水混合液:取10氰化钾溶液20ml置于150ml烧杯中,加入氨水15ml,用水稀释至100ml。 二苯基硫卡巴腙(双硫腙):称取双硫腙0.1g(称准至0.0002g)置于100ml烧杯中,加少量三氯甲烷使其溶解,溶液倾入100ml容量瓶中,用少量三氯甲烷洗涤烧杯三次,洗涤液并入

41、容量瓶中,加三氯甲烷稀释至刻度,摇匀。以此为贮备液,临用时吸取贮备液5ml、1ml分别注入100ml容量瓶中,加入三氯甲烷分别稀释至刻度,摇匀。 两种溶液分别含双硫腙5mg/100ml、1mg/100ml。 铅标准溶液:按化学试剂 杂质标准溶液制备方法配制,含铅(Pb)0.1mg/ml,临用时吸取此液10ml于1000ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。此液含铅(Pb)为1g/ml。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,b.标准曲线的绘制： 在6个分液漏斗中,各加入1硝酸溶液20ml,氰化钾氨水混合液4ml,分别用5mg/100ml双硫腙三氯甲烷液抽提一次,弃去三氯甲烷层,用少量三氯甲烷洗去残

42、留的双硫腙,直至三氯甲烷液层为无色止,然后顺序加入铅标准液0.0,1.0,3.0,5.0,7.0,9.0ml于6个分液漏斗中,分别用1mg/100ml双硫腙三氯甲烷液10ml抽提一次,振摇1min,分出三氯甲烷液层置于2cm比色皿中,用分光光度计于510nm波长处测其吸光度,以试剂空白为零点,绘制标准曲线。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,c.测定手续： 准确吸取试样(2.7.1.2)10ml,置于125ml分液漏斗中,加入20柠檬酸氢二铵溶液15ml20盐酸羟胺溶液1ml及0.1麝香草酚蓝溶液24滴,再加氨水至溶液为蓝绿色,加10氰化钾溶液5ml,再用10盐酸溶液调节溶液为草绿色(此时p

43、H约为9),以5mg/100ml双硫腙三氯甲烷液23ml抽提数次,直到最后一次抽提液仍为绿色为止。合并抽提液,用15ml水振摇洗涤,分出三氯甲烷液层于第二个分液漏斗内,洗涤水用5mg/100ml双硫腙三氯甲烷液23ml抽提一次,分出三氯甲烷液层并入第二个分液漏斗内。用1硝酸溶液20ml,每次10ml提取二次,弃去三氯甲烷液层,合并硝酸提取液于另一个分液漏斗内,用少量三氯甲烷35ml洗涤酸溶液,至三氯甲烷液层为无色,以除去残留的双硫腙,如果液面有三氯甲烷液滴,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,开启塞子让其挥发,如果器壁残留三氯甲烷液,则转动漏斗,让其沉于底部后分去,然后加入氯化钾氨水混合液4m

44、l、1mg/100ml双硫腙三氯甲烷液10ml,振摇1min,静置分层,用脱脂棉擦净漏斗出口处,分出三氯甲烷液层经干燥脱脂棉过滤,弃去初滤液,收集滤液于2cm比色皿中用分光光度计于510nm波长处测其吸光度,将测定结果与铅标准曲线对照,查得铅含量,同时吸取与样品同时处理的试剂空白液10ml与样品同时操作,并在样品结果中减去空白中所测铅含量。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,d.计算和结果的表示： 铅含量X3(以重量百分数表示)按式(3)计算: （4-8） 式中： A样品溶液相当于铅标准微克数,g; B试剂空白相当于铅标准微克数,g; G样品重,g。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,a.

45、仪器设备： 分光光度计,附2cm比色皿。 试剂和溶液： 硫酸:1mol/L溶液; 氨水:6mol/L溶液; 四氯化碳; 695乙醇; 百里香酚蓝(麝香草酚蓝):0.1溶液,称取麝香草酚蓝0.1g溶于100ml乙醇中,过滤即得; 二乙基二硫代氨基甲酸钠(铜试剂):0.1溶液贮于棕色瓶中,保存冰箱内,可用一周; 乙二胺四乙酸二钠;,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,柠檬酸氢二铵;柠檬酸氢二铵乙二胺四乙酸二钠混合液:取柠檬酸氢二铵20g及乙二胺四乙酸二钠5g溶于100ml水中; 铜标准溶液:含铜(Cu)0.1mg/ml,临用时吸取此液5ml于100ml容量瓶中加水稀释至刻度,摇匀。此液含铜(Cu)

46、为5g/ml。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,b.标准曲线的绘制： 准确吸取铜标准溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分别置于6个125ml分液漏斗中,各加1mol/L硫酸溶液至总体积为25ml、柠檬酸氢二铵乙二胺四乙酸二钠混合液5ml、0.1麝香草酚蓝溶液3滴,滴加氨水随滴随摇至溶液呈草绿色,冷后加0.1二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液5ml,四氯化碳15ml,猛烈振摇2min,静置分层后,用脱脂棉擦干分液漏斗颈部,颈内再塞入少量棉花,过滤,弃去初滤液,收集滤液于2cm比色皿中,用分光光度计于440nm波长处,测其吸光度,以试剂空白为零点,绘制标准曲线。,第六节 食品添加

47、剂 紫胶红色素测定,c.测定手续： 准确吸取试样10ml,置于125ml分液漏斗中,加1mol/L硫酸溶液至总体积为25ml,加柠檬酸氢二铵乙二胺四乙酸二钠混合液5ml、0.1麝香草酚蓝溶液3滴,滴加氨水随滴 随摇至溶液呈草绿色(pH约为9),冷却后加0.1二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液5ml,四氯化碳15ml,猛烈振摇2min,静置分层后用脱脂棉擦净分液漏斗颈部,颈内再塞以少量棉花,过滤弃去初滤液,收集滤液于2cm比色皿中,用分光光度计于440nm波长处测其吸光度,将测定结果与铜标准曲线对照,查得铜含量,同时吸取与样品同时处理的试剂空白液10ml与样品同时操作,并在样品结果中减去空白中所测铜含量

48、。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,d.计算和结果的表示： 铜含量X4(以重量百分数表示)按式(4)计算: （4-9） 式中:A样品溶液相当于铜标准微克数,g; B试剂空白相当于铜标准微克数,g; G样品重,g。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,a.仪器设备： 分光光度计,附1cm比色皿。 试剂和溶液： 无砷金属锌; 硫酸: 1:1溶液; 碘化钾: 15溶液; 盐酸; 氯化亚锡:40溶液,取氯化亚锡40g,加入盐酸50ml,溶解后用水稀释至100ml; 乙酸铅:10溶液; 乙酸铅棉花:将脱脂棉浸入乙酸铅溶液中,浸透,取出挤去多余溶液,晾干即成;,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,三氯甲烷(氯仿); 三乙醇胺; 二乙基二硫代氨基甲酸银三氯甲烷三乙醇胺混合液:取1g二乙基二硫代氨基甲酸银,溶于250ml三氯甲烷中,待溶完后再加入7.5ml三乙醇胺混匀后备用； 砷标准溶液:含砷(As)0.1mg/ml,临用时准确吸取此液1ml于100ml容量瓶中,用新煮沸的冷水稀释至刻度,摇匀,此液含砷(As)为1g/ml。,第六节 食品添加剂 紫胶红色素测定,b.标准曲线的绘制： 准确吸取砷标准液(1g/ml)0.0,0.5,1.0,2.0, 3.0ml,分别置于砷化氢发生器中,各加水使