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1、二乙基二硫代氨基甲酸钠柱前衍生化HPLC法测一捻金中朱砂的含量?204?齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffairs201lVo1.30,No.4二乙基二硫代氨基甲酸钠柱前衍生化HPLC法测一捻金中朱砂的含量张建业,冯向东(南阳市食品药品检验所,河南南阳473000)摘要:目的建立用高效液相色谱测定一捻金中朱砂含量的方法.方法以二乙基二硫代氨基甲酸钠(NaDDC)为衍生化试剂,样品经消解,衍生化和有机溶剂提取后测定.采用高效液相色谱法,使用C,柱,流动相为甲醇一水(含0.02mmoL?L的NaDDC)(87:13);检测波长272nm;流速1mL?rain,柱温35.结果Hg在
2、0.10520.6312g范围内线性关系良好,平均加样回收率99.23%.结论本法结果准确,便于操作,可作为一捻金的质量控制方法之一.关键词:一捻金;朱砂;柱前衍生化;二乙基二硫代氨基甲酸钠;高效液相色谱法中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:16727738(2011)04020403DeterminationofcinnabarinYinianjinbyHPLCwithpre-columnderivatizationofSodiumdiethyldithiocarbamateZHANGJianye.FENGXiangaong(NanyangInstituteforFoodandD
3、rugControl,Nanyang473000,China)Abstract:Objec6veToestablishanHPLCmethodwithprecolumnderivatizationfordeterminationofcinnabarinYinian?jin.MethodsSodiumdiethyldithioearbamate(NaDDC)wasusedasaderivatizationreagent,thesamplesweretreatedbydigested,derivatizedandextractedbyorganicsolvent.Thedeterminationw
4、ascarriedOUtbyHPLCmethod,usingCl8column,andmobilephasewasmethanolwater(including0.02mmoL?LofNaDDC)(87:13);Thedetectionwavelengthwas272am;Theflowratewas1L?rain,thecolumntemperaturewas35.ResultsHghadgoodlinearrelationshipintherangeof0.10520.6312g,theaveragerecoverywas99.23%.ConclusionThemethodwassimpl
5、eandaccurate,itwassuitableforqualitycontrolofYinianjin.Keywords:Yinianjin;Cinnabar;Precolumnderivatization;Sodiumdiethyldithioearbamate;HPLC朱砂是我国传统医学中常用的镇惊安神药,主成分为硫化汞,补心安神类中成药常含有此药味,但朱砂有毒,药典规定不宜大量服用,不宜久服.现代药理及毒理学证明Hg能与蛋白质结合而蓄积,很难被再释放,可引起慢性汞中毒,所以汞的测定在人体健康评价和诊断,成方制剂的药效评价方面非常重要.汞的含量测定方法主要有:滴定法,比色法,原子吸收
6、分光光度法(AAS)等,其中滴定法干扰因素多,不适用于中成药类分析,比色法误差较大,AAS法需要昂贵的原子吸收分光光度计而难于普及.本文参考文献,建立了柱前衍生化HPLC法分离,测定一捻金中朱砂主要成分硫化汞的含量,适合含汞制剂的质量控制.1仪器与试药Waters26952996高效液相色谱仪,EmpowerTwo色谱管理软件;SIGMAll4小型台式离心机(北京华威兴业科技有限公司).甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,二乙基二硫代氨基甲酸钠(天津试剂二厂);硝酸汞(分析纯,用基准氯化钠标定,干燥品含量99.7%,生产厂家:贵州省铜仁化学试剂厂,批号930605);硫化汞(生产厂家:贵州省铜仁化学试
7、剂厂,批号950302,含HgS99.9%).其余试剂为分析纯.一捻金市场购得(太原大宁堂药业有限公司);缺朱砂的阴性样品自制.2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:AgilentODS(4.6mmx250mm,5Ixm);流动相为甲醇一水(含0.02tool?LNaDDC)(87:13);检测波长272nm;流速1.0mL?rain;柱温35;理论板数不低于3000.2.2供试品溶液制备取本品10袋,精密称定每袋装量,计算平均装量,研细,取约1.0g,置锥形瓶中,加硫酸25mL,硝酸钾2g,缓缓加热使成乳白色,放冷,将消解液转移至50mL容量瓶中,用稀硝酸洗涤锥形瓶,合并洗涤液置上述容量瓶中,用
8、稀硝酸定容.精密量取0.5mL,置聚四氟乙烯离心管中,加5tool?L氢氧化钠溶液1mL,混匀,加酚酞指示液2滴,继续用0.5mol?L氢氧化钠溶液调节至粉红色.加NaDDC10mg,充分振摇,离心(6000r?min,10min),弃齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffaits2011Vo1.30,No.4去上清液.沉淀加甲醇5mL溶解,转移至25mL容量瓶中,用甲醇定容,摇匀.用0.45/a,m滤膜滤过,即得.2.3对照品溶液制备分别精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的硝酸汞9O.12mg,置50mL容量瓶中,加水至刻度,得对照品贮备液.取贮备液0.5mL,置聚四氟乙烯离心
9、管中,加NaDDC10mg,充分振摇,离心(6000r?rain,10min),弃去上清液.沉淀加甲醇5mL溶解,转移至25mL容量瓶中,用甲醇定容,摇匀.用0.45txm滤膜滤过,即得每1mL含Hg0.02104mg的对照品溶液.2.4阴性对照溶液制备按一捻金制备方法制备不含朱砂的阴性样品,按2.2项制得阴性对照溶液.2.5色谱条件2.5.1空白试验取对照品溶液10,注入色谱仪中,测定,Hg(DDC),保留时间约为16rain,见图1;取一捻金供试品溶液及阴性对照溶液同法测定,见图2,3,在阴性对照品溶液中未检出与对照品保留时间相同的成分.图1对照品色谱图1一Hg图2供试品色谱图:Il叫jl
10、o/o叫/搿/,一了赢-丽:图3阴性样品色谱图2.5.2专属性试验按照2.3项下对照品溶液配制方法,制备Fe,Fe,Pb,Cu,Co,Hg,cr,Cd离子与NaDDC的螯合物,进样测定,结果见图4,Hg螯合物与其他金属螯合物完全分离,证明该条件其他离子不干扰测定.3方法学考察3.1标准曲线绘制分别取上述对照品溶液5,10,15,20,25,30进样,按上述条件与方法进样测定,分别以对照品的6个进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行线性回归,回归方程为Y=4671.3X一33.12,r=0.9995;表明H进样量在0.10520.6312btg范围线性关系良好.?205?八/八/.一一厂/?j一
11、,一八4J15/八n/图4专属性试验色谱图1一Co;2一Pb;3一样品溶液;4一Cr3;5一Hg;6一Fe2;7一Fe;8一Cd2;9一Cu23.2精密度试验取对照品溶液,按2.1项下重复进样5次,测定峰面积,RSD为0.87%.3.3稳定性试验取同一批供试品溶液,室温下放置,按2.1项下测定方法和条件,分别于0,2,4,8,16h测峰面积,结果表明在16h内具有良好稳定性,RSD为1.91%.3.4重复性试验取同一批样品5份,按2.2项下制成供试品溶液,按2.1项下分别测定,RSD为1.82%.3.5回收率试验取已知含量的样品(批号090402,平均装量1.2418g,含量68.45m袋)9
12、份,每份0.5g,分别按标示量的90%,100%,110%精密加入硫化汞,按2.2项下制成供试品溶液,按2.1项下分别测定.计算回收率,结果平均回收率为99.23%,RSD为1.86%,见表1.表1硫化汞加样回收率3.6样品含量测定取一捻金样品3批(090112,090402,090701平均装量分别为1.2042g,1.2418g,1.2102g.),按2.2项下制成供试品溶液,按2.1项下分别测定.计算含量,结果3个批号的样品含朱砂以(HgS)计(n=3)分别为66.12mg/袋,68.45m袋,70.20mg/袋,RSD分别为1.75%,2.O1%,1.80%.4讨论4.1Hg若用高效液
13、相法分离,测定要进行适当衍生化处理,二乙基二硫代氨基甲酸钠(铜试剂)是常用的金属离子沉淀剂,相当多的金属离子能与之螯合而形成不同颜色的沉淀,此类沉淀大部分难溶于水,(如Hg(DDC)2pK.=43.5,Cu(DDC)2pK.=29.6,20oC),易溶于丙酮,甲醇,因此可直接从水中分离,提取该螯合物.该螯合物稳定,紫外区有吸收,可以用HPLC及uV法检测.采用柱前衍生化高效液相法测金属离子,就可以不使用价格昂贵,实验条件要求高?2O6?齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffaits2011Vo1.30,No.4HPLC法测定元胡止痛软胶囊中欧前胡素的含量蒋亚萍(镇江市第三人民医院
14、,江苏镇江212003)摘要:目的采用高效液相色谱法对元胡止痛软胶囊中欧前胡素含量进行测定.方法KromasilC.(150mmx4.6mm,5m)为色谱柱,甲醇一水(68:32)为流动相;流速:1.0mL?min;检测波长:301nm;柱温:30.结果欧前胡素浓度在11.1455.70mg?L之间线性关系良好,回归方程为Y=27.953X一3.03(R=1),平均回收率99.24%,RSD=1.2%(n=6),重现性好,RSD:1.0%(n=5),供试品溶液在lOh内稳定,RSD为0.4%.结论该方法简单,可靠,专属性强,可用于元胡止痛软胶囊的质量控制.关键词:元胡止痛软胶囊;欧前胡素;高效
15、液相色谱法;含量测定中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:16727738(2011104020603DeterminationofimperatorininYuanhuZhitongSoftCapsulesbyHPLCJIANGYa-ping(ThirdPeopleSHospitalofZhenfiang,Zhenfiang212003,China)Abstract:0bjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofimperatorininYuanhuZhitongSoftCapsulesMethodsTheHPLCsyst
16、emconsistedofKromasilCl8column(150mmx4.6mm,5m),methanolwater(68:32)asmobilephase,theflowratewas1.0mL?min,thedetectionwavelengthat301nmandcolumntemperatureat30.ResultsImperatorinshowedagoodlinearrelationshipwitharangeof11.1455.70mg?LandregressionequationwasY=27.953X一3.O3(R=1).Theaveragerecoverywas99.
17、24%,RSD=1.2%(n=6),withgoodrepeatability(RSD=1.O%.n=5).andtheRSDwithin10hourswas0.4%.ConclusionTheHPLCmethodwassimple,reliable,withgoodspeeifiction,andcanbeusedforthequalitycontrolofYuanhuZhitongSoftCapsules.Keywords:YuanhuZhitongSoftCapsules;Imperatorin;HPLC;Contentdetermination元胡止痛软胶囊的处方组成为醋制延胡索和白芷
18、,具有理气,活血散瘀,止痛的功能,适用于气滞血瘀的胃痛,胁痛,头痛及月经痛等.处方中重要药味白芷为伞型科植物白芷和杭自芷的干燥根,具有散风除湿,通窍止痛,消肿排脓的功效.延胡索乙素为延胡索的活性成分,而白芷的活性成分为香豆素类化合物.2j,如异欧前胡素,欧前胡素等.欧前胡素的含量是确保本品功效的一个重要指标.原标准中有对元胡止痛软胶囊中延胡索乙素的含量测定,而对欧前胡素仅进行了薄层色谱鉴别,尚无含量测定内容J.对于欧前胡素(Imperatorin)的含量测定方法,文献报道的有薄层扫描法,高效液相色谱法等.,本文参考了药典及文献,采用高效液相色谱法测定了元胡止痛软胶囊中欧前胡素的含量,从而为该制
19、剂质量标准规范化研究提供科学依据.1仪器与试药1.1仪器Agilentl100高效液相色谱仪,G1314AWD检测器(安捷伦公司),KromasilCl8(150mm4.6mm,5m)的原子吸收分光光度法达到测定目的.因此该方法具有经济,高效,操作简便特点,易于推广普及.4.2NaDDC与大多数金属离子螯合可在较宽泛的pH条件中进行,一般选偏碱环境,本试验条件pH为8.0左右.为使Hg2与NaDDC鳌合反应完全,加过量的NaDDC,流动相中加0.02mmoL?L的NaDDC目的也是避免螯合物解离,本试验条件下过量NaDDC不干扰测定.参考文献:1国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版(一部)S.北京:化学工业出版社,2005:92.2何毓敏,任华忠,刘小琴.朱砂中汞的二乙基二硫代氨基甲酸盐柱前衍生化HPLC测定J.中国医药工业杂志,2008,39(11):850852.3张孙玮,汤福隆.现代化学试剂手册(第二分册)M.1版.北京:化学工业出版社,1986:583.