麦胚凝集素修饰纳米粒介导多肽药物经鼻入脑的.doc

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1、精品论文推荐麦胚凝集素修饰纳米粒介导多肽药物经鼻入脑的递药特性研究高小玲蒋新国*（复旦大学药学院药剂学教研室，上海 200032） 摘要：鼻脑通路的存在为难以通过血脑屏障的多肽药物的脑内递送提供了可能。采用纳米粒包封药物可有效减少多肽药物的体内降解，但其经鼻介导药物入脑依然面 临鼻纤毛的清除、难以透粘膜吸收及吸收缺乏部位选择性等问题。本文构建了一种 新型的麦胚凝集素修饰纳米粒（WGA-NP），通过修饰于纳米粒表面的 WGA 与分布 在鼻粘膜，特别是嗅粘膜上的特异糖基结合，经受体配体作用延长载药纳米粒在 鼻腔中的滞留时间，增加其透嗅粘膜吸收，选择性地提高包载药物的脑内递送。以 具有认知改善作用的

2、多肽药物血管活性肠肽（VIP）为模型药物，药动学研究结 果表明，WGA 修饰载 VIP 纳米粒鼻腔给药，可显著增加 VIP 的入脑量；药效学结果 显示，其可提高对 AF64A 所致空间记忆障碍大鼠的治疗效果。分别以香豆素-6、CdSe 量子点为荧光探针，探讨 WGA-NP 经鼻入脑的转运通路及其透鼻粘膜吸收机理。结 果显示，其可经嗅粘膜上皮细胞或腺体吸收进入粘膜下层，经神经束或神经束周围 结缔组织转运入脑。由于 WGA 可与鼻粘膜上的特异糖基结合，增加载药系统的鼻 粘膜摄取；该摄取为能量依赖型，主要通过包被凹陷途径内吞，高尔基体、溶酶体 均参与其细胞内转运过程。上述结果表明，WGA 修饰纳米粒

3、可为稳定性差、难以通 过血脑屏障的多肽类药物的脑内应用提供有效的载体。关键词：鼻腔给药；脑内递送；纳米粒；麦胚凝集素；老年性痴呆；血管活性肠肽基金项目：国家重点基础研究发展计划资助项目（2007CB935800）；高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（20050246073）；复旦大学研究生创新基金资助项目。* 通讯作者Tel:021-54237381, Fax: 021-54237381, E-mail: 1Wheat germ agglutinin-conjugated nanoparticles for peptides delivery into brain following in

4、tranasal administrationXiaoling Gao, Xinguo Jiang*(Department of Pharmaceutics, School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 200032)Abstract: The development of biotech drugs such as peptides and proteins that act in the central nervous system has been significantly impeded by the difficulty of de

5、livering them across the blood-brain barrier. Intranasal delivery of biotech drugs-loaded nanoparticles might be a promising approach, since the colloidal formulations have been shown to protect the drugs from the degrading milieu in the nasal cavity and facilitate their transport across the mucosal

6、 barriers. Nevertheless, the amount of nanoparticles accessing the brain is still limited due to its poor penetration through or uptake by the nasal epithelium, short resident time and nonspecific distribution and uptake in the nasal cavity.The surface engineering of nanoparticles with lectins opene

7、d a novel pathway to the absorption of drugs loaded by nanoparticles into the brain following intranasal administration. Wheat germ agglutinin (WGA), specifically binding to N-acetyl-D-glucosamine and sialic acid, both of which were abundantly observed in the nasal cavity especially in the olfactory

8、 mucosa, was selected as a promising brain-targeting ligand. Vasoactive intestinal peptide, a neuroprotective peptide, was efficiently incorporated into the poly (ethylene glycol)-poly (lactic acid) nanoparticles (NP) modified with WGA and the brain uptake of VIP as well as the neuroprotective effec

9、t of the formulation was assessed. The area under theconcentration-time curve of intact 125I-vasoactive intestinal peptide in brain of micefollowing the intranasal administration of 125I-vasoactive intestinal peptide carried by WGA-conjugated nanoparticles was significantly enlarged compared with th

10、at after intranasalapplicationof125I-vasoactiveintestinalpeptidesolution.Thesame improvements in spatial memory in ethylcholine aziridium-treated rats were observed following intranasal administration of 25 g/kg and 12.5 g/kg of vasoactive intestinal5peptide loaded by unmodified nanoparticles and wh

11、eat germ agglutinin-modified nanoparticles, respectively. Distribution profiles of WGA-conjugated nanoparticles in the nasal cavity presented their higher affinity to the olfactory mucosa than to the respiratory one, which also indicated that WGA-NP in the submucosa might be transported into the CNS

12、 through the nerves or the connective tissues around the nerves in the lamina propria. Inhibition experiments of specific sugar suggested that the interactions between the nasal mucosa and WGA-NP were due to the immobilization of carbohydrate-binding pockets at the surface of the nanoparticles. The

13、addition of a metabolic inhibitor, NaN3, significantly reduced the amount of WGA-NP associated with the nasal mucosa, indicating that WGA-NP was absorbed into the nasal mucosa through an active transport pathway. Both PhAsO and chlorpromazine inhibited the association of WGA-NP with the nasal mucosa

14、, suggesting that clathrin pathway might play an important role in the endocytosis of WGA-NP. The addition of both BFA and monensin also decreased the association of WGA-NP with the nasal mucosa, indicating that both Golgi apparatus and lysosome participated in the uptake of WGA-NP. These results cl

15、early indicated WGA-NP might serve as promising carriers especially for biotech drugs such as peptides and proteins.Key words: Intranasal administration, brain drug delivery, nanoparticles, wheat germ agglutinin, Alzheimer disease, vasoactive intestinal peptide随着生物技术、神经科学的迅速发展，已经发现许多具有中枢治疗活性的多肽 蛋白药物

16、，但因血脑屏障的存在，很大程度上限制了这些药物的脑内转运和治疗作 用。因此，研究药物，尤其是多肽蛋白药物的脑内递释技术就具有很高的研究价值 和临床意义。鼻脑通路的存在为药物的入脑提供了可能，但多肽蛋白药物的透膜吸收能力差， 易受鼻腔中酶的降解和鼻纤毛的清除，因此经鼻入脑的药量仍然很低，无法达到有 效的临床治疗效果。纳米粒递药系统能够有效减少多肽蛋白类药物的降解，而且有 望通过载体的跨膜转运增加药物的吸收。然而，普通纳米粒鼻腔给药仍存在三大问 题： 透鼻粘膜吸收的能力不很理想； 在鼻腔中的滞留时间短，药物的吸收不精品论文推荐完全； 药物鼻粘膜吸收缺乏部位选择性，脑内递药效率较差。 为了解决上述问

17、题，本课题构建了一种新型的经鼻给药脑内递药系统 凝集素修饰纳米粒载药系统（WGA-NP）。以纳米粒作为多肽蛋白药物的载体，可保护其 体内稳定性；而纳米粒表面修饰的麦胚凝集素（WGA）可与鼻腔嗅粘膜上高表达的 糖基受体N-乙酰氨基葡萄糖特异结合1，2，延长载药系统在鼻粘膜，尤其是嗅粘膜上 的滞留时间，介导嗅粘膜对载药系统的吸收，选择性地递送更多的药物入脑，提高 对中枢疾病的防治效果，降低全身性的毒副作用。血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide, VIP）为含 28 个氨基酸的神经肽，具有显著的促进记忆和智力作用。但其体 内稳定性差，且不易透过BBB3，4，临床应

18、用受到很大限制。本课题以VIP为模型药 物，将其包载于WGA-NP中，旨为具有老年性痴呆防治作用的多肽蛋白药物的临床 应用提供实验依据。此外，还对其经鼻入脑的通路及其透鼻粘膜吸收机理进行研究。1 材料与仪器1.1 药品与试剂WGA（Vector Labs）；单甲氧基聚乙二醇（MePEG，MW 3000，NOF），马来酰亚胺聚乙二醇（Maleimide-PEG，MW 3400，NEKTAR），d，l-丙交酯（PURAC）；VIP（纯度 80 %，杭州中肽生化有限公司）；胆碱毒素 AF64A（Sigma）； 香豆素-6（Aldrich）；CdSe 量子点（复旦大学物理系陈暨耀教授提供）。1.2 仪

19、器超声波细胞粉碎机，旋转蒸发仪；粒度/zeta 电位测定仪，透射电镜，高 效液相色谱仪；放射免疫 计数器；Morris 水迷宫视频分析系统，立体定位仪，荧 光显微镜，发光光谱仪。1.3 实验动物昆明种小鼠，SD大鼠，复旦大学动物实验科学部提供。2 实验方法2.1 WGA修饰载VIP纳米粒（WGA-VIP-NP）的制备与表征采用开环聚合法，分 别将maleimide-PEG和MePEG与d，l-丙交酯反应，合成二嵌段共聚物MePEG3000-聚乳 酸（PLA）和Malemide-PEG3400-PLA。将两者按照91的比例混合，采用复乳/溶媒 蒸发法制备载VIP纳米粒（VIP-NP）。采用Tra

20、uts试剂以601的比例进行WGA巯基 化。室温反应1 h后，经HitrapTM脱盐柱分离纯化得到巯基化WGA。VIP-NP与巯基化 WGA按马来酰亚胺基巯基化蛋白摩尔比31混合，室温搅拌反应9 h，经Sepharose CL-4B凝胶柱分离除去未连接的蛋白，即得WGA-VIP-NP。将WGA-VIP-NP、VIP-NP稀释至适当浓度，采用粒度/zeta电位测定仪测定粒径和电位。高效液相色谱法（HPLC）测定包载于纳米粒中VIP浓度，计算包封率、载 药量。免疫电镜法鉴定修饰于纳米粒表面的WGA：WGA-VIP-NP溶液加入适量山羊 抗WGA抗体（一抗），37 摇床孵育1 h，Sepharose

21、 CL-4B凝胶柱分离除去未结合一 抗，而后加入适量胶体金标记兔抗山羊IgG抗体（二抗），37 摇床孵育12 h，凝胶 柱分离除去未结合的二抗，收集含有纳米粒的洗脱液；同时进行阴性对照试验。上 述样品进行磷钨酸负染，通过透射电镜观察纳米粒表面的胶体金而表征WGA是否存 在。采用红细胞凝集试验证实连接于纳米粒表面的WGA是否仍具其特异糖基结合活 性：取新鲜大鼠全血1 ml，肝素抗凝，1000 rpm离心5 min, 弃上清，沉淀加25 ml生 理盐水分散，制得红细胞悬液，取适量加入WGA-VIP-NP溶液，37 孵育30 min后观 察是否出现凝血反应。以空白分散液及VIP-NP同法操作作为阴性

22、对照，以WGA标准 溶液作为阳性对照。2.2 WGA-VIP-NP 经鼻入脑的药动学研究采用 125I 放射标记测定并研究 WGA-VIP-NP在小鼠体内的药动学。由于VIP体内稳定性差，易被降解成片断5，未 经处理直接测得的组织中放射性计数中含有游离125I和125I-VIP降解产物。为此，本文 建立了HPLC偶联 计数器检测法测定脑中完整的125I-VIP。实验分组： 鼻腔给予125I-VIP-NP 10 l（放射剂量约 360000 cpm/g）； 鼻腔 给予相同放射剂量WGA-125I-VIP- NP 10 l； 鼻腔给予相同放射剂量125I-VIP溶液10 l； 皮下注射相同放射剂量

23、125I-VIP溶液剂 200 l。分别于给药后 5，15，30 min，1，2，4，8，12 h处死小鼠，取脑组织：嗅球和嗅区（BT）、大脑（CR）、小脑（CL）， 称重后迅速于-20 冷冻保存，24 h内采用 计数器测定各样本的放射强度（n4）。 药时曲线下面积（AUC0t）采用梯形法计算，按文献方法计算误差6。组间比较采 用ANOVA，组间两两比较采用非配对双侧t检验，P 0.05 即认为存在显著性差异。2.3WGA-VIP-NP经鼻入脑的药效学研究选取活跃、游泳技能良好的大鼠，10 % 水合氯醛（400 mg/kg，ip）麻醉，立体定位仪定位侧脑室并注射AF64A 3 nmol/2 l

24、/ 侧，建立中枢胆碱能神经元损毁AD动物模型7。正常对照组大鼠侧脑室注射等量人 工脑脊液。按表1方案随机分成6组，连续给药7天后开始Morris 水迷宫试验。Tab 1Groups and treatments精品论文推荐http:/GroupsTreatmentsSham controlIntranasal administration of the vehicle, 10 l/nostril/day for 7 daysAF64A controlIntranasal administration of the vehicle, 10 l/nostril/day for 7 daysIN-V

25、IP-NP(12.5)Intranasal administration of 12.5 g/kg VIP carried by PEG-PLAnanoparticles, 10 l/nostril/day for 7 daysIN-VIP-NP(25)Intranasal administration of 25 g/kg VIP carried by PEG-PLAnanoparticles,10 l/nostril/day for 7 daysIN-WGA-VIP-NP (12.5)Intranasaladministrationof12.5g/kg VIPcarriedbyWGA-co

26、njugated PEG-PLA nanoparticles, 10 l/nostril/day for 7 daysIN blank WGA-NPIntranasal administration of blank WGA-conjugated PEG-PLAnanoparticles, 10 l/nostril/day for 7 daysMorris 水迷宫试验：从给药后第 7 天开始对大鼠进行行为学训练及测试。实验的前 4 天为学习阶段，每只大鼠每天接受 4 次训练，每次训练 90 s，两次训练间隔 时间 30 s。使用摄像头跟踪记录，计算机计算大鼠到达平台的潜伏期。实验的第 5 天进

27、行探索试验，记录并分析大鼠跨越平台的次数。行为学测试结束后处死大鼠，取出脑组织，立即置-70 冻存待测。测定前分离 大鼠海马，称重后加入 9 倍生理盐水制成 10 %匀浆，3500 r/min 离心 10 min，取上 清液测定乙酰胆碱酯酶活力。采用 SPSS 11.5 软件，对所得数据进行统计分析。采用 one way ANOVA 进行组 间比较，采用双侧 T 检验进行组间两两比较，P0.05 为显著性差异。2.4WGA-NP 经鼻入脑转运机理研究WGA-NP 经鼻入脑转运通路探讨SD 大鼠鼻腔给予载荧光探针香豆素-6 的 WGA-NP，给药后定时进行心脏灌流固定，取大鼠鼻腔，经固定、脱钙、

28、脱水、包 埋、冰冻切片制备鼻腔组织切片。对切片进行染色处理：采用DAPI染细胞核以显示 组织结构，神经特异性烯醇化酶免疫荧光染色以标记嗅细胞和神经束8。荧光显微镜 观察纳米粒的绿色荧光在鼻腔中的分布情况及其与嗅粘膜、神经束的相对位置关系 确定WGA-NP经鼻入脑的转运通路。WGA-NP 透鼻粘膜吸收机理研究以新型荧光探针 CdSe 量子点标记 6精品论文推荐和电位。高效液相色谱法（HPLC）测定包载于纳米粒中VIP浓度，计算包封率、载药量。免疫电镜法鉴定修饰于纳米粒表面的WGA：WGA-VIP-NP溶液加入适量山羊 抗WGA抗体（一抗），37 摇床孵育1 h，Sepharose CL-4B凝胶

29、柱分离除去未结合一 抗，而后加入适量胶体金标记兔抗山羊IgG抗体（二抗），37 摇床孵育12 h，凝胶 柱分离除去未结合的二抗，收集含有纳米粒的洗脱液；同时进行阴性对照试验。上 述样品进行磷钨酸负染，通过透射电镜观察纳米粒表面的胶体金而表征WGA是否存 在。采用红细胞凝集试验证实连接于纳米粒表面的WGA是否仍具其特异糖基结合活 性：取新鲜大鼠全血1 ml，肝素抗凝，1000 rpm离心5 min, 弃上清，沉淀加25 ml生 理盐水分散，制得红细胞悬液，取适量加入WGA-VIP-NP溶液，37 孵育30 min后观 察是否出现凝血反应。以空白分散液及VIP-NP同法操作作为阴性对照，以WGA标

30、准 溶液作为阳性对照。2.2 WGA-VIP-NP 经鼻入脑的药动学研究采用 125I 放射标记测定并研究 WGA-VIP-NP在小鼠体内的药动学。由于VIP体内稳定性差，易被降解成片断5，未 经处理直接测得的组织中放射性计数中含有游离125I和125I-VIP降解产物。为此，本文 建立了HPLC偶联 计数器检测法测定脑中完整的125I-VIP。实验分组： 鼻腔给予125I-VIP-NP 10 l（放射剂量约 360000 cpm/g）； 鼻腔 给予相同放射剂量WGA-125I-VIP- NP 10 l； 鼻腔给予相同放射剂量125I-VIP溶液10 l； 皮下注射相同放射剂量125I-VIP

31、溶液剂 200 l。分别于给药后 5，15，30 min，1，2，4，8，12 h处死小鼠，取脑组织：嗅球和嗅区（BT）、大脑（CR）、小脑（CL）， 称重后迅速于-20 冷冻保存，24 h内采用 计数器测定各样本的放射强度（n4）。 药时曲线下面积（AUC0t）采用梯形法计算，按文献方法计算误差6。组间比较采 用ANOVA，组间两两比较采用非配对双侧t检验，P 0.05 即认为存在显著性差异。2.3WGA-VIP-NP经鼻入脑的药效学研究选取活跃、游泳技能良好的大鼠，10 % 水合氯醛（400 mg/kg，ip）麻醉，立体定位仪定位侧脑室并注射AF64A 3 nmol/2 l/ 侧，建立中枢

32、胆碱能神经元损毁AD动物模型7。正常对照组大鼠侧脑室注射等量人 工脑脊液。按表1方案随机分成6组，连续给药7天后开始Morris 水迷宫试验。Tab 1Groups and treatments7面（图1A）。红细胞凝集试验证实纳米粒表面的WGA仍具结合特异性糖基的生物活性。3.2WGA-VIP-NP经鼻入脑的药动学研究 纳米粒包封VIP能显著提高其体内稳定性。VIP-NP鼻腔给药后在脑内的滞留时间远长于VIP溶液剂的鼻腔给药和皮下注射，其脑内VIP的AUC为溶液剂鼻腔给药的3.5-4.7倍（P 0.05）；WGA-VIP-NP鼻腔给药脑内VIP的AUC为溶液剂鼻腔给药的5.6-7.7倍（P

33、0.05）。3.3WGA-VIP-NP经鼻入脑的药效学研究Tab 2 Neuroprotection effects of nasal administration of VIP-loaded nanoparticles andWGA-modified nanoparticles on the impairment of water maze learning and hippocampusAcetylcholinesterase activity in rats with AF64A-induced lesionsDayShamcontrolAF64AcontrolIN BlankWGA-N

34、PIN-VIP-NP(12.5)IN-VIP-NP(25)IN-WGA-VIP-NP(12.5)Latency123480.703.0567.254.1452.164.79a41.604.73a74.564.3170.374.7874.224.87b73.115.07b72.976.6180.314.4368.759.81b79.397.68b67.674.9161.854.4953.554.7457.294.7568.535.0449.815.74a46.795.83a49.645.45a69.374.5345.385.77a52.475.63a43.046.60a(s)Number of

35、crossing1.710.37a0.440.200.420.421.440.44a1.890.31a1.940.34aAcetylcholinesterase activity(% of Sham control)1003.21a64.404.37b65.324.78 b63.254.17b78.316.12b88.296.21aData represented the meanS.E.M. a P0.05, significant different with AF64A control;b P0.05, significant different with sham control表 2

36、 结果显示，随训练天数增加，正常对照组大鼠潜伏期明显缩短，而模型组 大鼠未见缩短趋势，两者存在显著性差异，表明采用 AF64A 侧脑室注射建立大鼠空 间记忆障碍模型方法可行。大鼠鼻腔给予 VIP-NP（25 g/kg），可改善大鼠空间记忆 障碍，第 2、3、4 天的潜伏期均明显低于模型组，且与正常对照组无显著性差异。 但剂量为 12.5 g/kg 时，大鼠记忆虽有所改善，却与模型组无统计差异。鼻腔给予 WGA-VIP-NP（12.5 g/kg）即可产生明显的空间记忆改善作用，第 2、3、4 天的潜 伏期均明显低于模型组，且与正常对照组无显著性差异。而空白 WGA-NP 鼻腔给药 不引起潜伏期缩

37、短，说明载体本身对大鼠认知无影响。第 5 天的探索实验结果显示， VIP-NP（12.5 g/kg、25g/kg）、WGA-VIP-NP（12.5 g/kg）鼻腔给药后的跨越平台 次数均显著高于模型组，而与正常对照组无显著差异。AF64A 侧脑室注射后大鼠海8精品论文推荐http:/马乙酰胆碱酯酶活力显著低于正常对照组。鼻腔给予空白 WGA-NP 或 VIP-NP（12.5 g/kg），乙酰胆碱酯酶活力无显著变化；而给予 WGA-VIP-NP（12.5 g/kg），乙酰 胆碱酯酶活力达到正常对照组的 88 %以上，两者没有显著性差异。以上行为学研究和生化指标测定显示，VIP-NP 鼻腔给药后可

38、改善 AF64A 侧脑 室注射所致大鼠空间记忆障碍，提高大鼠海马乙酰胆碱酯酶含量，对中枢胆碱能系 统具有一定的保护作用。VIP-NP 经 WGA 修饰后，脑内递药效果进一步提高，在剂 量减半的情况下仍可产生明显的空间记忆改善作用，显著提高模型大鼠海马乙酰胆 碱酯酶含量，与假手术组无显著性差异。3.4WGA-NP 经鼻入脑转运机理研究3.4.1WGA-NP 经鼻入脑转运通路探讨Figure 2 Distribution of 6-counarin-loaded WGA-NP (green) in the nasal mucosa two hours following administratio

39、n. (A) WGA-NP presented their higher affinity to the olfactory mucosa than to the respiratory one; (B) WGA-NP (WNP) was absorbed faster than unmodified nanoparticles (NP); (C) Distribution of WGA-NP in the nasal cavity. Olfactory cells and nerve bundles stained with anti-NSE antibody (red) and cell

40、nucleus stained with DAPI (blue). E, epithelium; G, gland; NB, nerve bundle and overlap of the green and red fluorescence形态学观察结合免疫荧光标记区分嗅粘膜和呼吸部粘膜，如图 2A 所示， WGA-NP 对嗅粘膜有明显的选择性分布特点。图 2B 显示，WGA-NP 相对于 NP 具 有更强的透鼻粘膜吸收能力。图 2C 免疫荧光标记嗅粘膜及粘膜下神经束，综合分析9精品论文推荐http:/WGA-NP 在不同区域鼻粘膜上、下的分布情况，初步确定 WGA-NP 经嗅粘膜上皮细胞或

41、腺体吸收进入粘膜下层，经神经束或神经束周围结缔组织吸收入脑。3.4.2WGA-NP 透鼻粘膜吸收机理研究B ACDFigure 3 (A) Nasal uptake of WGA-QDs-NP and WGA-QDs-NP preincubated with excess N-acetyl-glucosamine, respectively. (B) Nasal uptake of WGA-QDs-NP with or without the addition of 40 mM NaN3 in the perfusion medium. (C) Nasal uptake of WGA-QDs-

42、NP with or without the addition of 20 g/ml chlorpromazine, 5 g/ml filipin and 10 M PhAsO in the perfusion medium, respectively. (D) Nasal uptake of WGA-QDs-NP with or without the addition of 10 g/ml BFA, 200 nM monensin in the perfusion medium, respectively. Data represents meanSD (n = 3). * signifi

43、cantly different from that of the WGA-QDs-NP group如图 3 所示，WGA的特异糖基 N-乙酰氨基葡萄糖显著抑制鼻腔对WGA-NP 的摄取，说明WGA是通过与鼻粘膜上的特异糖基结合，介导递药系统在鼻腔的滞留 和吸收。能量代谢抑制剂NaN3显著抑制鼻粘膜对WGA-NP的摄取，提示WGA-NP以 能量依赖方式吸收。包被凹陷内吞抑制剂PhAsO和chlorpromazine显著抑制WGA-NP12精品论文推荐的鼻粘膜摄取，说明至少部分WGA-NP是通过细胞膜上的clathrin蛋白构成的包被凹陷介导内吞；而细胞膜穴样内馅caveolae 的内吞抑制剂f

44、ilipin对摄取无显著影响，说 明caveolae途径可能并非其主要内吞途径，提示载药系统的粒径应控制在 150 nm16。 高尔基体破坏剂BFA，溶酶体抑制剂Monensin均抑制WGA-NP的鼻腔摄取，说明高 尔基体、溶酶体均参与WGA-NP在细胞内的转运过程，提示选取具有溶酶体逃脱功 能的载体可能减少包载药物在胞内的降解，增加药物的吸收。4 讨论组织化学研究发现，鼻腔粘膜上皮细胞存在多种糖基，其中N-乙酰氨基葡萄糖 在嗅粘膜上的表达显著高于呼吸部粘膜1，2；该糖基可与WGA特异性结合，将信号 传导到细胞内，诱导细胞的胞吞和转运17。本课题采用WGA-NP包载多肽药物，利 用WGA的上述

45、特性，增加纳米粒在嗅粘膜部位的浓集，延长其滞留时间，选择性地 递送更多的药物入脑，提高对中枢疾病的防治效果。该递药系统的构建模式及其鼻 腔给药研究国内外未见报道，具有较高的创新性。该递药系统可为稳定性差、难以 通过血脑屏障的蛋白多肽药物的脑内递送提供有效的手段。References1Melgarejo Moreno P, Hellin Meseguer D, Melgarejo Moreno C. Olfactory epithelium of the rat: Lectin-mediated histochemical studies J. An Otorrinolaringol Ibero

46、 Am, 1998, 25:471-480.2Lundh B, Brockstedt U, Kristensson K. Lectin-binding pattern of neuroepithelial and respiratory epithelial cells in the mouse nasal cavity J. Histochem J, 1989, 21:33-43.3Dogrukol-Ak D, Banks WA, Tuncel N, et al. Passage of vasoactive intestinal peptide across the blood-brain barrier J