痛风宁胶囊质量标准研究.doc

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1、精品论文痛风宁胶囊质量标准研究廖婉，傅超美，李锐，黄逸维，胡慧玲成都中医药大学药学院，成都 (611137)E-mail：摘要：目的：研究痛风宁胶囊质量控制方法，以提高痛风宁胶囊的质量标准。方法：采用 薄层色谱法对方中主要药味进行定性鉴别研究，采用 HPLC 法测定方中主要有效成分盐酸小檗碱的含量。结果：方中防己、黄柏、姜黄、薏苡仁、连翘 5 味药的薄层色谱具有鉴别特征，色谱斑点清晰，专属性强，Rf 值适中，阴性对照无干扰；HPLC 法测定盐酸小檗碱的 含量在 0.0826g0.826g 范围内线性关系良好，平均回收率为 98.9%(n=6)。结论：方法简便可靠，专属性强，重现性好，能较全面反

2、映该制剂内在质量，可用于该制剂的质量控制。 关键词：痛风宁胶囊，质量控制，薄层色谱，高效液相色谱中图分类号：查阅中国图书馆分类法1.引言痛风宁胶囊是由防己、姜黄、石膏、薏苡仁、木瓜、黄柏、滑石粉、连翘等药材加工而 成的纯中药复方制剂。具有清热利湿，活血通络的功效，用于急、慢性风湿性关节炎，慢性 风湿性关节炎活动期。原有研究中仅有防己、黄柏的薄层色谱鉴别，为有效地控制其内在质 量1，本次研究对方中其他药味的薄层鉴别方法进行了系统研究，增加了姜黄、连翘、薏苡 仁的薄层色谱鉴别；建立了高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量的方法，并制定了相应的含 量测定限度。本研究最终建立了准确、可控的质量控制方法，从而

3、为痛风宁胶囊质量标准的 提高提供了可靠依据。2.仪器与试剂2.1 仪器岛津 LC-10Avp 高效液相色谱仪；色谱柱：DiamonsilTM 钻石 C18 柱（200 mm4.6mm，5m）；Auto Science AS5150A 超声波清洗器；德国 Sartorius 公司 BP121S（万分之一）电 子天平。2.2 试剂与对照品黄柏对照药材，粉防己碱对照品，防己诺林碱对照品，姜黄素对照品，姜黄对照药材， 薏苡仁对照药材，连翘对照药材，盐酸小檗碱对照品均由中国药品生物制品检定所提供；乙 腈为色谱纯（fisher 公司），水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。3.方法与结果3.1 定性鉴别3.1

4、.1 防己薄层色谱鉴别取本品 10 粒，倾出内容物，加乙醇 20mL，加热回流 1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残 渣加 1%盐酸 15mL 溶解，加浓氨水调节 pH 值至 9，用三氯甲烷提取两次，每次 10mL，合 并提取液，滤过，滤液蒸干，加乙醇 1mL 使溶解，作为供试品溶液。另取粉防己碱、防己 诺林碱对照品，加乙醇制成每 1mL 各含 lmg 的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法- 7 -（中国药典2005 年版一部附录B）试验2，吸取上述溶液各 5L，分别点于同一硅胶 薄层板上，以三氯甲烷甲醇浓氨试液(50:10:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，

5、在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1 所示。图 1 防己薄层色谱鉴别图3.1.2 黄柏薄层色谱鉴别取本品 5 粒，倾出内容物，加甲醇 70mL 置 100mL 的锥形瓶中超声提取 20min，滤过， 滤浓缩至 2mL，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材 0.1g，加甲醇 5mL，加热回流 15min，。滤过，滤液补充甲醇至 5mL，作为对照药材溶液2另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版一部附录 B）试验2，吸取上述溶液各 10L，分别点于同一硅胶薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水 (7：1：2)为展开剂

6、，置氨蒸汽饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下 检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。 见图 2 所示。图 2 黄柏薄层色谱鉴别图3.1.3 姜黄薄层色谱鉴别取本品 15 粒，倾出内容物，加无水乙醇 20mL，振摇，放置 30min，滤过，滤液蒸干， 残渣加无水乙醇 2mL 使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材 0.5g，同法制成对照药 材溶液。再取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每 1mL 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法（中国药典2005 年版一部附录B）试验2，吸取上述溶液各 10L，分 别点于同一硅

7、胶 G 薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸(96:4:0.7)为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的 位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图 3 所示。图 3 姜黄薄层色谱鉴别图3.1.4 连翘薄层色谱鉴别取本品 10 粒，倾出内容物，加水煎煮 2h，煎煮液加三氯甲烷 20mL 萃取 3 次，每次 20mL。 收集三氯甲烷层溶液，用 10氨水洗涤 3 次，每次 40mL。收集三氯甲烷层置于水浴上蒸干， 残渣加甲醇 1mL 使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材 0.5g 加甲醇 15mL 回流提取60min，滤过，滤液浓缩至 3mL

8、，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版一部附录B）试验2，吸取上述溶液 10L，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲 烷甲醇冰醋酸（17:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5香草醛硫酸溶液，在100加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点。见图 4 所示。图 4 连翘薄层色谱鉴别图3.1.5 薏苡仁薄层色谱鉴别取本品 10 粒，倾出内容物，加石油醚（6090）30mL，超声提取 30min，滤过，滤 浓蒸干，残渣加石油醚（6090）2mL 使溶解，作为供试品溶液另取薏苡仁对照药材 1g， 同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典

9、2005 年版一部附录B）试验2，吸 取上述溶液各 10L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以石油 醚（6090）乙酸乙酯醋酸（10:3:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。见图5 所示。图 5 薏苡仁薄层色谱鉴别图3.2 含量测定3.2.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.033mol/L 磷酸二氢钾溶液乙腈（7030）为流 动相；检测波长为 349nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于 4000。3.2.2 对照品溶液的制备精密称取盐

10、酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每 1mL 含盐酸小檗碱 0.04mg 的溶液，即 得。对照品色谱图见图 6 所示。3.2.3 供试品溶液的制备取本品 1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液 50mL，称定重量，超声处理 30min， 放冷，称定重量，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取滤液即得供试品溶液。供试品溶液 色谱图见图 7 所示。3.2.4 阴性供试品溶液的制备 取除黄柏外的其它原料，按工艺方法制备，并按供试品溶液制备方法制得阴性供试品溶液。阴性样品色谱图见图 8 所示。3.2.5 线性范围的考察精密称取盐酸小檗碱对照品 16.8mg，加甲醇定容于 100mL 量瓶中，精密吸取对照品溶

11、液，分别稀释至浓度为 0.0168mg/mL、0.0336 mg/mL、0.0504 mg/mL、0.0672 mg/mL、0.168 mg/mL 的溶液，各精密吸取 5l 注入液相色谱仪。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X） 为横坐标，进行回归，得回归方程为：Y = 4018409.69X - 43943.05，R = 0.9998。由方程可 知，进样量在 0.0826g0.826g 间，进样量和积分面积间线性关系良好。3.2.6 精密度试验精密吸取对照品溶液 5L，重复进样 6 次，RSD2%，表明仪器精密度良好。3.2.7 稳定性试验精密吸取同一样品溶液和对照品溶液，于 0h、1h、2h

12、、4h 及 8h 分别进样，测得 RSD为 1.8%，表明对照品及样品在 8h 内稳定性较好，能满足测定要求。3.2.8 重现性试验 精密吸取供试品溶液与对照品溶液分别进样，计算盐酸小檗碱含量。RSD2%，该方法重现性好。3.2.9 加样回收率试验精密称定已知含量的样品 6 份，分别精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，并按上述色 谱条件进行测定，计算回收率，6 次试验的加样回收率测定结果均在 95105%之间，其平 均值为 98.9%，RSD 为 1.90%。具较好的回收率，测定方法可靠。 结果见表 1。表 1 盐酸小檗碱加样回收率试验结果平均编号回收率(%)123RSD (%)98.91.90

13、45取样量(g)样品中盐酸小 檗碱含量(mg)加入对照 品量(mg)测得盐酸小檗 碱的量(mg)回收率(%)0.50070.98990.98161.941997.00.49590.98040.98161.947798.50.48630.96140.98161.923298.00.50220.99280.98161.9891101.50.49090.97050.98161.9619101.00.49970.98790.98161.945197.563.2.10 供试品的含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5L，注入液相色谱仪，测定。考虑到药材的 来源、炮制加工、制剂生产及贮存等因素，含

14、量限度在 3 批均值的基础上下降 20%，故正 文暂定本品含量限度为 0.50mg/粒。结果见表 2 所示。表 23 批样品含量测定结果表（n=2）盐酸小檗碱含量（mg/批号取样量（g）峰面积值粒）盐酸小檗碱平均 含量（mg/粒）2005070120050702200507031.0202764542.80.60741.0363776488.90.60730.9751736545.60.61231.0066761222.40.6131.0127753262.40.60290.9915735723.20.60150.60740.61260.6021图 6 盐酸小檗碱对照品色谱图图 7 供试品溶液

15、色谱图4. 讨论图 8 阴性样品色谱图4.1对防己和黄柏鉴别方法的提高按已有方法在同一条件中对防己和黄柏进行薄层色谱鉴别，结果发现防己主斑点的日光 检视分离度好，斑点清晰；而黄柏效果不佳，特征斑点背景干扰较严重，故对处方中防己、 黄柏分别进行薄层鉴别。防己仍用原有条件3，结果表明，与对照品色谱相应的位置上，显相同桔红色斑点清晰， 阴性无干扰；根据黄柏中有效成分的理化性质，设计以盐酸小檗碱，黄柏对照药材为对照， 并改变黄柏样品处理、显色及检视方法。在黄柏供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱 相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点清晰，专属性强，Rf 值适中4.2 新增薄层色谱鉴别研究新增药味有姜

16、黄、连翘、薏苡仁。根据上述 3 味药中有效成分的理化性质，并参照中 国药典2005 年版一部各药材项下薄层鉴别方法，分别设计并进行多次实验研究，最终确 定了姜黄、连翘、薏苡仁的薄层色谱鉴别条件，所得色谱斑点清晰，分离度重现性良好，阴 性无干扰，可作为该制剂质量控制的指标，为进一步提高其质量标准提供了可靠依据。4.3 含量测定研究为了更好地控制本品质量，本次研究查阅了大量文献资料，拟建立含量测定方法。根 据处方的功能主治，拟选用处方中的主要药材黄柏进行含量测定，以黄柏中主要有效成分盐 酸小檗碱为指标进行含量测定，目前主要方法有：高效液相色谱法、薄层扫描法等。通过分 析对比，HPLC法具有样品处理

17、简便，分离效果好，快速、简便、精确、灵敏并且重现性好 等优点，故本研究拟选择盐酸小檗碱作为质控指标。进行了色谱条件与系统适用性筛选试验， 在参考大量文献资料和实验室已有研究的基础上，考察了流动相乙腈-0.1磷酸溶液（50:50）（每100mL 加十二烷基磺酸钠0.1g ）及不同比例的0.033mol/L 磷酸二氢钾溶液 乙腈（60:40）、（7030）、（80:20）。结果发现以磷酸二氢钾溶液乙腈（7030）为流动 相时保留时间适中，盐酸小檗碱色谱峰峰形对称性较好，分离度好。故选择流动相为磷酸二 氢钾溶液乙腈（7030）。根据预实验结果，确定其色谱条件与系统适用性。并系统的进 行了方法学研究，

18、最终建立了高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量的方法，并制定了相应的 含量测定限度。参考文献1王宝琴中成药质量标准与标准物质研究M北京：中国医药科技出版社，2000 2国家药典委员会中华人民共和国药典(一部)M北京：化学工业出版社2005 3谢培山，等中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集M中华人民共和国卫生部药典委员会广 东：广东科技出版社，1993Quality Standard for Tongfengning CapsuleLiao Wan，Fu Chaomei ，Li Rui ，Huang Yiwei，Hu HuilingPharmacy college of Chengdu Unive

19、rsity of TCM，Chengdu(611730)AbstractObjective：To establish the quality standard for Tongfengning CapsuleMethod：Medicines in thisDescription were identified by TLCThe content of Berberine which is the effective element in the preparation was determined as the index by HPLCResults: Radix Stephaniae Te

20、trandrae，Cortex Phellodendri，Rhizoma Curcumae Longae, Semen Coicis and Fructus Forsythiae could be detected byTLC from three batches of samplesThe linear correlation of the Berberine is good in extent of0.0826g0.826g and the recovery is 98.9%(n=6)Conclusion: The quality control is feasible and can be applied to control the products from mass productionIt can be ensured the stability of thepharmaceutical qualityKeywords：Tongfengning capsule，Quality standard，TLC，HPLC