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1、安徽农业大学学报， !“#， $ （%） ： %. 琳*， !， 胡丰林 *! ， 杨 成*， 万水霞*， 李婉珍*， 樊美珍* （*? 安徽农业大学微生物防治省重点实验室， 合肥 !$“$#； !? 皖南医学院微生物与免疫学教研室， 芜湖 !%*“*） 摘 要： 用二苯基苦基苯肼 （AAB） 自由基酶标仪法， 对拟青霉属 C 个种的 !“ 个菌株培养液提取物的自由基 清除活性进行了比较研究， 发现不同种拟青霉的甲醇提取液的自由基清除活性差异很大， 在浓度为 C? “ D6 DE F*， $G保温 *“ D5/ 时， 自由基清除活性最高为 *? )H， 最低为 *C? )H； 同种不同菌株之间
2、的活性也有较大的差 异。自由基清除活性均与反应时间和样品浓度成正相关关系。二苯基苦基苯肼自由基薄层实验结果表明， 该属菌 株培养液提取物中自由基清除剂都不是单一成分， 且组成也不完全相同。 关键词： 二苯基苦基苯肼自由基； 自由基清除率； 拟青霉 中图分类号： I%#? *!文献标识码： 3文章编号： *#!($C!J （!“#） “%(“%/6(15/*， N3OK P4;/6*， Q3O I4-5(R50*， EL Q0/(S4;/*， M3O T;5(S4;/* （*? 3/4-5 A.,:5/7501 U;= E0V,.08,.= 2,. T57.,V501 P,/8.,1， 3/4-
3、5 36.57-18-.01 9/5:;. 自由基 （2.; .0X5701） 又叫游离基， 是指带有一 个不成对电子的原子、 分子或离子。现代医学研究 表明， 人体的各种疾病和衰老过程等都与自由基有 着密切的关系。适量的自由基对机体是必要的， 它 具有促进细胞增值， 消炎， 灭菌， 分解毒物等作用， 但 过多就可能导致细胞膜中脂质发生氧化反应， 损伤 生物膜结构。自由基清除剂是一类可以与自由基反 应， 有效地清除体内产生的多余自由基， 从而维护人 体健康的物质 *。 目前对于外源性自由基清除剂的研究主要集中 在中草药和植物方面， 其抗氧化活性成分主要有黄 酮类化合物、 酚类化合物、 皂苷类和
4、多糖类， 还有一 些其它的诸如生物碱类、 蒽醌类、 蛋白类和酶类 等 !。但由于现代高通量筛选方法的应用， 使得大 !收稿日期： !“C(*(*C 基金项目： 国家自然科学基金项目 （$“C“* (D051： 4-2;/615/ 4,8D051? 7,D 部分中草药已被筛选， 因此开发新资源， 从微生物代 谢产物中寻找高效的自由基清除剂已为人们所关 注， 如覃爱娟等人对几种常见的食用菌抗氧化做了 研究， 发现它们对超氧阴离子自由基、 羟自由基有一 定清除作用 !； 凌建亚对浓香乳菌抗氧化做了研 究， 结果发现其活性成份可能是 “#$ 类抗氧化酶类 的物质 %； 5 *， 酵 母浸出粉5 *，
5、葡萄糖%5 *， 琼脂45 *， 水 555 ?5 *， 酵母浸出粉 5 *， 葡萄糖 %5 *， 水 555 ?， :2-()AB:4:-2CDAADE: FAB （$667） 、 麦角甾醇、 虫草素和腺苷从 “2*?E 公司 购得； 甲醇、 甘露醇和抗坏血酸等试剂均为国产分析 纯试剂。 !# !# (D?1 I21E)EBA,2, OPLM ;/ 高速离心机， 江苏图门离心机厂； KNLLQ#ML 4 冻干机， 美国 5S 的接种量接入装有455 ?/5 D ?2) U下摇床培养8 。 取出后于 / 555 D ?2) U转速下离心/ ?2) 收集上清液， 加入 两倍体积V/S 乙醇， %
6、T 下醇沉4 ， 后于/ 555 D ?2) U转速下离心/ ?2)， 收集并浓缩上清液至原体 积的W5， 于冻干机中冻干至粉末状。 准确称取!5 ?* 上述粉状样品溶于 ?5、 /和4. / ?* ?备用。 !# $# $“自由基清除活性的测定 V， 5= 加不同浓度 的样品溶液 55 ! $667 试液 55 !8 )? 波长下测定其吸光值 （34） ； 每隔 / ?2) 测定 次， 共测 % 次。测定不加 $667 的样品空白吸收值（30）和加 $667 但不加 样品 （以 95S 甲醇 55 ! 6 （34 6 30） 7 3?EX8 559 !# $# %“ 薄层试验 5= 在高效薄
7、层层析板上点样并 展开， 挥去展开剂， 在波长为 4/% )? 的紫外光下， 用 铅笔划下荧光猝灭点 （YB+1D(,C()C( Z+()C2)*） 斑点 （以实线圈出） 和波长 !3/ )? 下的荧光激发 （YB+1: D(,C()C( (XC2HEH21)） 斑点 （以虚线圈出） ， 然后喷 $6: 67 试剂， 45 ?2) 后用数码相机记录下图谱。显黄 色处为清除自由基成分， 因为 $667 为一种稳定的 自由基， 能强烈吸收 /8 )? 的长波 （呈紫色） ， 当与 自由基清除剂反应后， 其吸收波长蓝移 （变黄色） 。 $“ 结果与分析 $# !“ 不同浓度菌株自由基清除活性的比较
8、根据上述自由基清除率的测定方法， 对不同菌 株甲醇提取物的自由基活性进行测定， 结果见表 。 由表 可以得出供试菌株的自由基清除活性有 很大差别， 在浓度为5 ?*?时， 活性最高的是 菌株 -Y58， 其自由基清除率为 9V. 3S； 活性最低的 是菌株 -H5， 其清除率仅为 !%. /S。不同种之间差 异也很大， 如在浓度为5 ?*?时， 粉拟青霉、 环 链拟青霉、 蝉拟青霉和玫烟色拟青霉的平均清除率 都在 34S以上， 而细脚拟青霉还没达到 %/S。同种 但菌株不同， 其自由基清除活性也不完全相同， 粉拟 青霉中 -Y58 的活性最强， 其次为 -Y5!， 最弱为 -Y59； 环链拟青
9、霉和玫烟色拟青霉中 -C38， -Y+59 活性最 强， -C54， -Y+53 活性最弱； 而细脚拟青霉供试的几株 菌对 $667 自由基的清除率差异较小。此外不同菌 株的自由基清除率与其浓度大小成正比， 浓度越大， 其清除能力越强， 成一定的量效关系， 但增加幅度因 菌种而异。 99%安徽农业大学学报4553 年 表 !“ 不同浓度甲醇提取物的自由基清除率 !“#$% ,“.%/0+/0 )“1%- 23 %61)“,1- “1 *+33%)%/1 ,2/,%/1)“1+2/- I， AC ?;， EC ?;IA， BC 混合标 样， C ?;“， C ?;“C ?4$A， JC ?4$J
10、， FC ?4$E，C ?5B， C ?5I 和 F 号都有 虫草素斑点却无腺苷斑点， 而 J 号有腺苷斑点却无 虫草素斑点。有些种的图谱却表现出高度一致， 如 !“#$%IA 和玫烟色拟青霉 菌株 ?4$E 等都有较强的清除自由基活性， 特别是 粉拟青霉的菌株 ?4A 活性最强， 具有开发高效自由 基清除剂的可能， 值得进一步深入研究。就薄层色 谱的结果来看， 存在于拟青霉属中的自由基清除剂 以极性较大的化合物为主， 但可以排除是虫草素、 腺 甘和甘露醇的可能， 此与有关报道并不一致 E， 这 可能与研究模型的选择有关。 BF安徽农业大学学报I 年 参考文献： ! 孙存普， 张建中， 段绍瑾
11、“ 自由基生物学导论 # “ 合 肥： 中国科学技术大学出版社， !$： % 76?7 72;6BC672; 7?;6A6;61 BD EF4% 72 1CBGB( 1 G=B5?1 IH 7 J7=621 D672; 1DD1?; BD ()*)*+,$ *-%#.,$ + “ +B5=27; N， 96 Q Q， 1; 76?715;1=BJH?1;1 /“0“ 7 7 06301= 72;6BC672; ?7G7?6;H ;072 ;17 72 =1 R621 + “ O3=6?5 :BB /01J6;=H， %*， !： &%$%(&%$“ !. 胡丰林， 樊美珍， 李增智“ 一种白僵
12、菌代谢产物中生物 活性物质的研究 + “ 菌物系统， %.， !$ （,） ： # %(%)“ 欢迎订阅 !“# 年 西南农业学报 西南农业学报 是由西南六省、 市农科院联合主办的国内外公开发行的综合性农业学术期刊。%* 年 正式被国际农业生物中心文摘数据库 （/OST） 作为全世界 %!% 种中文收录期刊。%, 年起入选国家科技 部U中国科技论文统计源期刊U （中国科技核心期刊） ，% 年度中国科技期刊引证报告 公布了全国 L 种中国科技论文统计源期刊的文献计量指标，西南农业学报 影响因子为 .“ .L，在全国农业科学 （总论） 学报中列第 L 位， 在西部地区及全国大区农业科学 （总论）
13、和农业大学学报中列第 ! 位。本刊立足大西南， 面向国内外， 主要刊登农学、 林学、 植 （森） 保、 园艺、 土壤农化、 畜牧、 兽医、 农业机械与电子工程、 水利和建筑 工程、 食品科学等方面体现大西南地方特色的农牧业各专业学科在基础理论研究和应用技术理论研究方面 具有创见的学术论文、 领先水平的科研成果、 学术报告、 研究简报， 有新意的文献综述及学术动态、 科研成果、 新品种介绍等。 西南农业学报 为双月刊， !*L 页， 大 !L 开， 彩色封 %、 *， 每期定价 !. 元， 全年 L. 元。邮发代号 L% V !%， 全国各地邮局均可订阅。欢迎广大读者踊跃投稿和订阅。 地址： 成都市静居寺路 %. 号省农科院情报所内 邮编： L!L! 电话：（.%)） ),.,!$% E(J76： +C51I7BW 627“ ?BJ !$,* 卷 , 期桂X 琳等X %. 株拟青霉属虫生真菌甲醇提取物清除自由基活性的比较研究