30%白僵菌可湿性粉剂小鼠急性致病性实验研究.pdf

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1、2 0 0 6年 1 0月 第 1 6 卷第 1 0 期 中国比较医学杂志 C H I N E S E J O U R N A L O F C O MP A R A T I V E M E D I C I N E O c t o b e r , 2 0 0 6 V o l . 1 6 N o . 1 0 % la F 9; #f SS (蕊 、 、 - - 3 0 %白僵菌可湿性粉剂小鼠急性致病性实验研究 田泽敏， 吴冬梅， 刘琳， 涂英娥， 刘志勇， 杨新跃 ( 江西省劳动卫生职业病防治研究所毒理室， 江西 南昌3 3 0 0 0 6 ) 【 摘要】 目 的了解白 僵菌致病性强弱。方法按 微

2、生物农药急性致病性试验方法 ( 试行) 1 9 9 8 执行。结 果小鼠经腹腔染毒后主要中毒症状: 被毛蓬松， 活动减少， 体重减轻。不同时间段处死小鼠巨检可见脾脏肿大， 病理组织学镜检脾脏网内细胞增生明显， 以淋巴细胞及单核细胞为主， 并见有中性白细胞浸润， 多核巨细胞明显增 多。结论白僵菌对小鼠具有弱致病性。 【 关键词】 农药; 白僵菌; 急性毒性试验; 毒力 中图分类号 R - 3 3 文献标识码I A 文章编号 1 6 7 1 - 7 8 5 6 ( 2 0 0 6 ) 1 0 - 0 6 1 2 - 0 3 A c u t e P a t h o g e n i c i t y o

3、 f B e a u v e r i a B a s s i a n a i n Mi c e D e m o n s t r a t e d b y A c u t e P a t h o g e n i c T e s t T I A N Z e - m i n , Wu D o n g - m e i , L I U L i n , T U Y i n g - e , L I U Z h i - y o n g , Y A N G X i n - y u e ( J i a n g x i I n s t i t u t e o f L a b o u r H y g i e n e a

4、 n d O c c u p a t i o n a l M e d i c i n e , N a n c h a n g 3 3 0 0 0 6 ， C h i n a ) ( A b s t r a c t O b j e c t i v e T o c l a r ify t h e p o s s i b l e p a t h o g e n i c c a p a b i li t y o f B e a u v e r ia b a s s ia n a i n m i c e . M e t h o d s A c u t e p a t h o g e n i c e x

5、p e r i m e n t w a s c a r r ie d o u t a c c o r d i n g t o t h e M e t h o d s o f A c u t e p a t h o g e n ic t e s t o f M i c ro b i a l P e s t i c id e s ( t ry o u t ) ( 1 9 9 8 ) . R e s u l t s A c u t e t o x i c e f f e c t s w e r e s h o w n a t 7 d a y s a ft e r i n t r a p e r i

6、t o n e a l i n j e c t i o n o f B a u v e r ia b a s s ia n a . I n c o m p a r i s o n w i t h t h e c o n t ro l m i c e , r e m a r k a b l e h y p e r p l a s ia o f l y m p h o c y t e s a n d m o n o c y t e s i n t h e s p l e e n o f t h e m i c e a f t e r B e a u v e r ia b a s s i a n a

7、 a d m i n i s t r a t i o n w a s r e v e a l e d场 h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n . C o n c l u t i o n O u r f i n d i n g s s h o w e d t h a t B e a u v e r i a b a s s i a n a c a n c a u s e r e m a r k a b l e d a m a g e t o t h e s p l e e n o f t h e m i c e , s u g g e s t

8、i n g t h a t B a u v e r i a b a s s ia n a b e l o n g s t o g r a d e 1 1 w e a k s e n s i t i z i n g a g e n t w i t h l o w p a t h o g e n i c i t y . I K e y w o r d s 】 P e s t i c id e s ; B e a u v e r ia b a s s ia n a ; A c u t e t o x ic it y t e s t ; P a t h o g e n ic i t y ; M i c

9、 e 白僵菌是当今世界上防治害虫应用较广的一种 虫生真菌， 通过其抱子的增殖作用对多种农林害虫 具有致死作用。白僵菌原药的急性经口 L D , 5 0 0 0 m g / k g 属微毒性， 经口长期毒性未引起动物异 常反应， 无致突变、 致畸、 致癌作用。但长期吸入 1 0 0 m g / 耐可致大、 小鼠间质性肺炎。 生产和使用人 员长期接触白僵菌抱子会有发热、 咳嗽、 乏力等表 现， 现场调查提出对长期接触人员有致病性， 能引起 接触人员的肺间质性炎症 1 - 4 1 。为了解白僵菌抱子 在使用过程中是否产生致病性及其作用靶器官， 我 们对3 0 %白僵菌可湿性粉剂进行了小鼠急性致病 性

10、实验。 1 材料和方法 1 . 1 受试物 3 0 %白僵菌可湿性粉剂主要成分为4 0 0 亿个抱 子/ g ， 由江西天人生态工业有限责任公司提供。 1 . 2 动物及环境 B a l b / c 小鼠6 0 只， 雌雄各半， 清洁级， 体重 1 8 - 2 2 g ， 由湖北省实验动物研究中心提供， 许可证号 S C X K ( 鄂) ， 2 0 0 3一0 0 0 5 。实验在许可证号 S Y X K ( 赣) 2 0 0 3 一 0 0 0 3 的环境中实施。 1 . 3 方法 按 微生物农药急性致病性试验方法 ( 试行) 1 9 9 8 执行。 作者简介田 泽敏( 1 9 5 3 通

11、讯作者I 杨新跃( 1 9 6 0 ) ， 女 一) ， 男， 主管技师， 主要从事毒理学及实验动物学实验研究。 主任医师， 主要从事毒理学研究。 中国比较医学杂志2 0 0 6 年1 0 月第1 6 卷第1 0 期C h i n J C o m p M e d , O c t o b e r 2 0 0 6 , V o l . 1 6 . N o . 1 0 61 3 1 . 3 . 1 剂量分组: 该受试物急性经口I D , 5 0 0 0 m g / k g ， 按方法规定选用5 0 0 m g / k g 剂量进行急性致 病性实验， 同时设生理盐水空白对照组。 1 . 3 . 2 样品

12、处理: 无菌操作用灭菌生理盐水将受 试物配制成2 5 m g / m L 样品混悬液。 1 . 3 . 3 染毒方法: 实验组小鼠按0 . 4 m I J 2 0 g 体重 一次性腹腔注射， 对照组注射等量生理盐水。观察 1 4 d内小鼠中毒症状和死亡情况， 于第3 天、 第 7天 分别处死实验组小鼠1 0 只( 早、 矛各5 只) ， 对照组 小鼠6 只( 早、 矛各3 只) ， 第 1 4 天处死剩余小鼠， 做 病理学检查， 同时称量小鼠脏器重量， 计算脏器系 数。 1 . 4 统计学方法 S P S S 统计分析软件中的 t 检验。 2 结果 2 . 1 生长情况和中毒症状 动物给予受试

13、物后观察期内无死亡。实验组动 物主要中毒症状: 被毛蓬松、 活动减少、 体重减轻， 第 1 4 天大部分小鼠体重恢复并增重。对照组动物无 异常。 2 . 2 对体重及脏器系数的影响 腹腔注射后第3 天实验组小鼠体重减轻， 与对 照组比 较差异有显著性( p 0 . 0 5 ) ， 第1 4 天大部分 小鼠体重恢复并增重。实验第 3 天处死小鼠巨检各 脏器未见异常， 第7天可见实验组小鼠脾脏增大， 第 1 4 天脾脏增大明显， 对照组小鼠未见异常。第 3 天、 第7 天和第 1 4 天实验组小鼠脾/ 体比与对照组 比 较差异有非常显著性( p 0 . 0 1 ) 。 第1 4 天肝/ 体 比 与

14、对照组比较差异有显著性( p 0 . 0 5 ) , ( 见表 1 ) 。 2 . 3 急性致病性实验及病理学检查结果 不同时间段处死小鼠大体病理学检查表明， 随 染毒时间延长实验组小鼠脾脏增大明显， 第 7天和 第 1 4 天病理组织学检查可见脾脏网内细胞增生明 显， 以淋巴细胞及单核细胞为主， 并有中性白细胞浸 润， 多核巨细胞明显增多。( 见表2 ) 0 表 1 对体重及脏器系数的影响 ( 无 士。 ) T a b . 1 E f f e c t s o f B e a u m r ia b a s s i a n a o n b o d y w e i g h t a n d o r

15、g a n i n d e x e s i n t h e m i c e 分组 G ro u p 动物数 Nu mb e r o f mi c e 始重 I n i t i a l b o d y w e i g h t 终重 F i n a l b o d y w e i g h t 肝/ 体比 L i v e r w e i g h t / b o d y w e i g h t 脾/ 体比 S p l e e n w e i g h t / b o d y w e i g h t 0 . 0 0 6士0 . 0 0 1 “ 0 . 0 0 5 t 0 . 0 0 1 0 . 0 1 3

16、土0 . 加5 “ 0 . 0 0 4士0 . 0 0 1 0 . 0 1 2 t 0 . 0 0 4 “ 0 . 1 兀 闷士0. 0 0 1 oo80l9oo50l3073 2 0 . 0士1 . 2 2 0 . 1土1 . 4 2 0 . 6士1 . 2 1 9 . 6 t 1 . 0 2 0 . 5士1 . 2 2 0 . 3土0 . 8 1 7 . 7士1 . 9 “ 1 . 1 2 士0 . 1 2 2 0. 1士1 . 4 1 . 1 7 t0 . 肠 2 0 . 3土2 . 1 1 . 2 2士0 . 1 6 2 0. 0士1 . 4 1 . 1 1 10 . 1 2 2 2

17、. 8 士2 . 5 1 . 4 0 士 0 . 1 8 “ 2 2 . 5士0 . 7 1 . 2 8士0 . 0 7 0. 0 6 3土0. 0 0 6 0. 0 5 8 t 0. 0 0 4 0. 0 6 0士0 . 侧只 0. 0 5 6士0 . 0 0 4 0 . 0 6 2士0 . 0 0 8 “ 0. 0 5 7士0 . 0 0 2 脾重 S p l e e n w e i g h t 0. 1 1 1士0. 0 . 0 9 7士0 . 0. 2 5 9士0 0 . 0 8 2土0 . 0 . 2 6 6土0 . 0. 的 4 t 0. 0 2 6 106106208 观察时间

18、T i me o f o b s e r v a t i o n 第 3天 3 司d a y 第 7天 7 t h d a y 第 1 4天 实验组E x p e r i n m e t 对照组 C o n t r o l 实验组e x p e ri m e n t 对照组C o n t r p l 实验组e x p e r i m e n t 对照组 c o n t ro l P 0 . 0 5 差异有显著性， , * P 0 . 0 1 差异有非常显著性 N o t e : P 0 . 0 5 , s i g n i f i c a n t d iff e re n c e ; P 0 .

19、 0 1 ， v e ry s i g n i f i c a n t d if f e re n c e 表2 急性致病性实验及病理学检查结果 Ta b. 2 P a t h o l n v i c a l a l t e r a t i o n s r e v e a l e d a ft e r a c u t e t o x i c i t v t e s t i n t h e 组别 G ro u p 观察时间 T i me o f o b s e r v a t i o n 性别 S e x 死亡动 处死动 物数物数 Di e d Ki ll e d 大体病理 学检查 Gr o s

20、 s a l t e r a t i o n 病理组织学检查 H i s t o l o g i c a l A l t e r a t i o n 第 3 天 3 r d d a y 早、 a 第7 天 7 t h d a y 早. a 天 d a y 早、 a 未见异常未见异常 N o t o b s e r v e d N o t o b s e r v e d 镜检可见脾脏网内细胞增生明显， 以淋巴及单核细胞为主， 并见有中性白细胞浸 脾脏体积增大润， 多核巨细胞增多。 S p l e n o m e g a l i a P ro l if e r a t i o n o f r e

21、t i c u l o- e n d o th e l ia l c e ll s i n t h e s p l e e n , p re d o m i n a n t l y l y m p h o c y t e s a n d m o n o c y t e s . I n f i l t r a t i o n o f n e u t ro p h i l s . I n c r e a s e d a m o u n t o f m u l t i - n u c l e a r g i a n t c e l l s . 镜检可见脾脏网内细胞增生明显， 以淋巴及单核细胞为主，

22、并见有中性白细胞浸 脾脏体积明显增大 润， 多核巨细胞明显增多。 R e m a r k a b l e P ro l i f e r a t i o n o f r e t i c u l o - e n d o t h e l i a l c e l l s i n t h e s p l e e n , p r e d o m i n a n t l y l y m p h o c y t e s a n d s p le n o m e g a l i a m o n o c y t e s . I n f il t r a t i o n o f n e u t ro p h i l

23、 s . R e m a r k a b ly i n c r e a s e d a m o u n t o f m u l t i - n u c le a r g i a n t c e ll s . 未见异常未见异常 N o t o b s e r v e d N o t o b s e r v e d 未见异常未见异常 N o t o b s e r v e d N o t o b s e r v e d 未见异常未见异常 N o t o b s e r v e d N o t o b s e r v e d 实验组冈洲况，ment 000 夕多矛 、 早早早 第 7 球day沃甸1

24、4x吻 对照组C吕口乞 61 4 中国比较医学杂志2 0 0 6 年 1 0 月第 1 6 卷第1 0 期C h i n J C o m p M e d , O c t o b e r 2 0 0 6 , V o l . 1 6 . N o . 1 0 3 讨论 白僵菌是一种微生物农药， 是研究和使用最广 泛的虫生真菌杀虫剂。在自然界可寄生百余种昆 虫， 具有分布广、 感染力强和扩散流行的特点， 在生 物防治中受到人们极大的重视， 被公认是一种高效、 低毒、 无残留的环保型生物农药。我国从5 0 年代开 始用于防治农业害虫， 7 0 年代后大量应用防治农林 业害虫和杀灭医学昆虫， 近年进入规模

25、化工业生产。 前苏联学者认为它是非致病菌， 无致病作用。国内 调查发现健康工人接触大量白僵菌粉可出现乏力、 咽干、 咳嗽、 胸闷、 发热等临床症状， 而且生产工人接 触菌粉后往往集体发病， 认为白僵菌对人有致病作 用 5 1 。动物实验白 僵菌原药的急性经口、 急性经皮、 急性吸人属微毒性， 急性眼刺激、 皮肤刺激实验为无 刺激性， 致敏实验为n 级轻度致敏物 ; 经口 长期毒 性未引起动物异常反应， 无致突变、 致畸、 致癌作用; 长期吸人1 0 0 m g / 耐对大、 小鼠有一定影响， 可引起 肺脏间质性炎症， 但抱子不能吸收分布到全身引起 其它部位病变2 ,3 ,4 。 本实验观察到3

26、 0 %白僵菌可湿性粉剂5 0 0 m g / k g 剂量经腹腔染毒后动物未出现死亡， 第3 天实验 组小鼠 体重减轻， 与对照组比较差异有显著性( p 0 . 0 5 ) 。第7 天处死实验组小鼠可见脾脏增大， 第 1 4 天增大明显， 病理镜检可见脾脏网内细胞增生明显， 以淋巴及单核细胞为主， 并有中性白细胞浸润， 多核 巨细胞明显增多， 第3 天、 第7 天和第 1 4 天实验组 小鼠的脾/ 体比与对照组比较差异有显著性( p 0 . 0 1 ) 。统计学分析第 1 4 天实验组小鼠肝脏增大， 肝/ 体比与对照组比 较有显著差异( p 0 . 0 5 ) 。依照 微生物农药急性致病性试

27、验方法 ( 试行) 1 9 9 8 急 性致病性判定标准， 对小鼠急性致病性具有弱致病 性， 作用靶器官为脾脏。因此对白僵菌的致病性应 作进一步研究。 参考文献 : 3 周银平， 刘志勇， 李启富， 等. 白僵菌的急性毒性及致敏实验 观察 1 1 、 中国比 较医学杂志， 2 0 0 4 , 1 4 ( 3 ) : 1 3 9 - 1 4 1 . 洪生明， 李月华， 詹丽芬， 等. 白僵菌对大鼠慢性毒性和致病 作用的实验研究【 J 1 . 中国公共卫生学报， 1 9 9 6 , 1 5 ( 3 ) : 1 5 4 - 1 5 5. 洪生明， 崔秀娟， 詹丽芬， 等.白僵菌对小鼠慢性毒性和致病

28、作用的实验研究【 J l . 中国实验动物学杂志， 1 9 9 6 , 6 ( 2 ) : 7 6 - 7 9. 洪生明， 詹丽芬， 张玉芝， 等. 白僵菌对小白鼠致癌作用的实 验研究【 J 7 . 癌变. 畸变. 突变， 1 9 9 7 , 9 ( 2 ) : 1 0 5 一 1 0 7 . 王乱友， 胡才炳.白僵菌的毒性研究概况【 7 l . 职业医学， 1 9 9 5 , 2 2 ( 3 ) : 4 1 一 4 2 . 飞.J，J ，12 resLL.1 ，J飞esJ 45 户LFesL 收稿日 期 2 0 0 6 - 0 5 - 2 3 1 3 8 . 方喜业， 主编. 医学实验动物学

29、【 M l . 北京: 人民卫生出版社， 1 9 9 5 . 1 0 6 . 田小芸， 孙敬芳. 近交系 N J S 小鼠的生物学特性研究【 J l . 实 验动物科学与管理， 1 9 9 6 , 1 3 ( 4 ) : 1 一 4 . 练有文. 清洁级 K M小鼠不同胎次繁殖性能观察分析【 J l . 动 物科学与动物医学， 2 0 0 4 , 2 1 ( 2 ) : 2 8 一 2 9 . 孟琼， 杨锡平， 胡一江， 等. 个不同品种小鼠繁殖性能及生长 发育的比 较观察 J 7 . 湖南中医学院学报， 2 0 0 0 , 2 0 ( 3 ) : 9 - 1 0. 左谦益， 宁磊昆明小鼠生长

30、发育指标及繁殖性能测定【 J l . 中国实验动物学杂志， 2 0 0 1 , 1 1 ( 4 ) : 1 9 9 一 2 0 2 . 孙全文， 杜建华， 常宝， 等. 6 0 C o 辐照日粮对 K M小鼠发育情况 的影响 J l . 张家口医学院学报， 2 0 0 3 , 2 1 ( 5 ) : 3 0 - 3 1 . 川3j 4 5 ，JesJJ 67 resL户L ( 上接第6 0 7 页) 小鼠体重与同一文献上记载的数据基本吻合v 1 。出 现以上生长现象的可能原因是动物喂料不同造成 的， 由于种鼠除喂食灭菌饲料以外每周还加喂鸡蛋 和葵花仔两次， 确保了本身的营养需要， 使哺乳期内

31、仔鼠得到足够的营养来源， 致使体重增长较快。而 非种鼠除喂饲正常灭菌饲料以外未添加任何额外营 养， 由于动物饲料是通过高温灭菌， 会导致部分营养 成份不够全面， 可能是导致离乳后小鼠体重增长减 缓的原因。有文献报道 7 l ， 喂饲6 0 C 。 辐照饲料比喂 饲高温灭菌饲料小鼠体重增长较快， 但至今未见报 道较全面弥补高温灭菌导致动物饲料营养损失的方 法。综上因素， 本文得出S P F 级 C 5 7 B I J 6 J 小鼠生长 繁殖性能数据仅供参考。 参考文献: 1 了 罗满林， 主编. 实验动物学【 Ml . 北京: 中国农业出版社， 2 0 0 2 . 收稿日 期) 2 0 0 6 - 0 6 - 0 1