Aβ25-35对大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响.pdf

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1、增葬则员 责葬则增蚤枣燥造蚤怎皂（栽云粤） 燥灶 粤晕陨栽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 蚤灶贼则葬澡藻责葬贼蚤糟 糟澡燥造藻泽贼葬泽蚤泽 蚤灶 则葬贼泽援 酝藻贼澡燥凿泽摇粤灶蚤皂葬造 皂燥凿藻造泽 燥枣 蚤灶贼则葬鄄 澡藻责葬贼蚤糟 糟澡燥造藻泽贼葬泽蚤泽 憎藻则藻 责则燥凿怎糟藻凿 憎蚤贼澡 粤晕陨栽援 陨灶贼则葬早葬泽鄄 贼则蚤糟 葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶（蚤早） 苑凿 葬灶凿 蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥枣 员园豫 怎则藻贼澡葬灶藻 泽燥造怎贼蚤燥灶 憎藻则藻 责则藻枣燥则皂藻凿 贼燥 葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻 则葬贼泽， 糟澡燥造藻糟赠泽贼藻糟贼燥皂赠 憎葬泽 责藻则

2、枣燥则皂藻凿 葬灶凿 遭蚤造藻 凿怎糟贼 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 贼燥 凿则葬蚤灶葬早藻 遭蚤造藻援 栽澡藻 遭蚤造藻 枣造燥憎 增燥造怎皂藻 责藻则 澡燥怎则 憎葬泽 灶燥贼藻凿援 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 栽云粤 燥灶 贼澡藻 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 蚤灶凿藻鄄 曾藻泽 燥枣 泽藻则燥造燥早赠 葬灶凿 造蚤增藻则 贼蚤泽泽怎藻 蚤灶 则葬贼泽 憎藻则藻 燥遭泽藻则增藻凿， 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 糟燥灶贼则葬泽贼藻凿 早则燥怎责（哉则泽燥凿藻燥曾赠糟澡燥造蚤糟 ）葬贼 贼澡藻 泽葬皂藻 贼蚤皂藻援 砸藻泽怎造贼泽 摇悦燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 皂燥凿藻造 早则燥怎责，贼澡藻

3、 粤蕴栽， 粤杂栽， 粤蕴孕， 栽月陨蕴，郧郧栽 燥枣 泽藻则燥造燥早赠 憎藻则藻 燥遭增蚤燥怎泽造赠 凿藻糟则藻葬泽藻凿 （孕 约 园援 园员）葬灶凿 晕葬 垣 ， 运 垣 鄄 粤栽孕 燥枣 造蚤增藻则 贼蚤泽泽怎藻 憎葬泽 皂葬则噪藻凿造赠 蚤皂责则燥增藻凿 （孕 约园郾 园员） 葬枣贼藻则 责则藻增藻灶贼蚤增藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 栽云粤援 粤灶凿 栽云粤 糟燥怎造凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 蚤灶糟则藻葬泽藻 遭蚤造藻 枣造燥憎 蚤灶 则葬贼泽 憎蚤贼澡 蚤灶贼则葬澡藻责葬贼蚤糟 糟澡燥造藻泽贼葬泽蚤泽 （孕 约 园郾 园员） 援 蕴葬则早藻 凿燥泽藻 早则燥怎责 燥枣 栽

4、云粤 藻曾鄄 糟藻造造藻凿 哉则泽燥凿藻燥曾赠糟澡燥造蚤糟 早则燥怎责 憎蚤贼澡 遭蚤造藻 枣造燥憎， 晕葬 垣 ， 运 垣 鄄 粤栽孕 燥枣 造蚤增藻则 贼蚤泽泽怎藻 葬灶凿 栽月陨蕴， 粤蕴孕 燥枣 泽藻则燥造燥早赠援 悦燥灶糟造怎鄄 泽蚤燥灶摇 栽云粤 澡葬泽 葬 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 藻枣枣藻糟贼 燥灶 蚤灶贼则葬澡藻责葬贼蚤糟 糟澡燥鄄 造藻泽贼葬泽蚤泽， 澡葬泽 早燥燥凿 责则燥泽责藻糟贼泽 枣燥则 糟造蚤灶蚤糟葬造 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶， 葬灶凿 糟葬灶 遭藻 凿藻增藻造燥责藻凿 蚤灶贼燥 葬 灶藻憎 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 责葬鄄 贼藻灶贼 皂藻凿蚤糟蚤

5、灶藻援 运藻赠 憎燥则凿泽： 月怎责造藻怎则怎皂 泽皂蚤贼澡蚤蚤 宰燥造枣枣 增葬则员 责葬则增蚤枣燥造蚤怎皂 杂澡葬灶 藻贼 再援 蕴蚤； 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 燥枣 贼澡藻 葬藻则蚤葬造 责葬则贼； 粤晕陨栽； 蚤灶贼则葬澡藻责葬贼蚤糟 糟澡燥造藻泽贼葬泽蚤泽； 遭蚤造藻 枣蚤燥憎； 栽月陨蕴 粤 圆缘鄄猿缘 对大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响 于摇 洋员， 圆， 薛摇 改圆， 吴红海圆， 李莎莎员， 圆， 侯艳宁员， 圆 （员援 河北医科大学药理学教研室， 河北 石家庄摇 园缘园园员苑； 圆援 中国人民解放军白求恩国际和平医院药学部， 河北 石家庄摇 园缘园园愿圆） 中国

6、图书分类号： 砸鄄猿猿圆； 砸 猿圆圆援 愿员； 砸 猿圆怨援 圆缘； 砸 苑源缘援 苑； 砸 怨苑苑援 远 文献标识码： 粤 文章编号： 员园园员 原员怨苑愿 （圆园员园） 园远 原园苑愿猿 原园源 摘要： 目的摇 研究 粤圆缘鄄猿缘对大鼠大脑皮质神经元合成神经甾 体的影响。方法摇 采用 粤圆缘鄄猿缘（员 皂燥造蕴 原员） 处理原代培养 的大鼠大脑皮质神经元， 固相萃取结合高效液相色谱 原 质谱 联用法测定细胞培养液中神经甾体的浓度， 四甲基偶氮唑 （酝栽栽） 法检测细胞活性。结果摇与对照组相比， 粤圆缘鄄猿缘处理 后神经元存活率降低约 缘园豫 （孕 约园郾 园员） ， 胆固醇处理组神经 元

7、存活率未见改变 （孕 跃 园郾 园缘） ， 但 粤 垣 胆固醇组的神经元 存活率明显高于 粤 处理组 （孕 约 园郾 园员） 。与胆固醇组相比， 粤 圆缘鄄猿缘处理后神经甾体 孕砸耘郧 水平略有降低 （孕 跃 园郾 园缘） ， 孕砸韵郧 水平明显下降 （孕 约 园郾 园员） ， 粤孕 水平明显增高 （孕 约 园郾 园员） 。结 论 摇神 经 甾 体 孕砸耘郧鄄孕砸韵郧鄄粤孕 代 谢 通 路 在 粤 圆缘鄄猿缘引起的大鼠大脑皮质神经元损伤时发生明显改变， 并 能部分地对抗 粤 的神经毒性作用。 关键词： 鄄淀粉样蛋白； 神经甾体发生； 液相色谱 原 质联用 收稿日期： 圆园员园 原园圆 原圆缘，

8、 修回日期： 圆园员园 原园猿 原圆圆 作者简介： 于摇 洋 （员怨苑员 原 ） ， 男， 博士生， 副主任药师， 研究方向： 阿 尔采末病防治策略， 栽藻造： 园猿员员鄄愿苑怨苑愿缘园猿， 耘鄄皂葬蚤造： 赠怎赃赠燥怎灶鄄 早藻则岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶； 侯艳宁 （员怨缘苑 原 ） ， 女， 博士， 教授， 博士生导师， 研究方向： 神经药理学， 通讯作者， 栽藻造： 园猿员员鄄愿苑怨苑愿圆员员， 云葬曾： 园猿员员鄄 愿苑怨苑愿源愿园， 耘鄄皂葬蚤造： 澡燥怎赠灶岳员远猿援 糟燥皂 法； 皮质神经元； 神经毒性； 阿尔采末病 摇 摇 神经甾体是一类由脑组织经胆固醇在各种酶的 作用

9、下合成的甾体化合物， 它们具有广泛的生物学 活性， 被视为第四代神经递质， 其中主要的神经甾体 包括孕烯醇酮 （责则藻早灶藻灶燥造燥灶藻， 孕砸耘郧） 及其硫酸酯 （责则藻早灶藻灶燥造燥灶藻 泽怎造枣葬贼藻， 孕砸耘郧杂） 、 脱氢表 雄 酮 （ 凿藻鄄 澡赠凿则燥藻责蚤葬灶凿则燥泽贼藻则燥灶藻， 阅匀耘粤） 及其硫酸酯 （凿藻澡赠凿则燥藻鄄 责蚤葬灶凿则燥泽贼藻则燥灶藻 泽怎造枣葬贼藻， 阅匀耘粤杂） 、 孕酮 （责则燥早藻泽贼藻则燥灶藻， 孕砸韵郧） 及别孕烯醇酮 （葬造造燥责则藻早灶葬灶燥造燥灶藻， 粤孕） 等 员 原猿。 近年来， 神经甾体对神经系统的保护作用日益受到 关注， 对防治各

10、种神经退行性疾病， 尤其是对阿尔采 末病 （粤造扎澡藻蚤皂藻则泽 凿蚤泽藻葬泽藻，粤阅） 极具潜力 源， 缘。 摇 摇 目前的研究认为， 细胞外 鄄淀粉样蛋白 （鄄粤皂鄄 赠造燥蚤凿，粤） 积聚是 粤阅 致病的核心机制， 大脑皮质内 粤 纤维堆积是 粤阅 病理发生早期的关键性事件， 并 最终导致了 粤阅 的其它病理症状 远， 苑。研究发现愿， 脑内神经甾体水平下降可能与 粤阅 发病有关。但神 经甾体发生与 粤阅 致病的关键蛋白 粤 之间直 接作用的研究却少有报道。虽然神经甾体发生 （灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽） ， 即内源性神经甾体在脑内的 合成， 这一事实已被证明， 但对内源性

11、神经甾体参与 粤阅 病变的细胞机制仍知之甚少。本研究通过建立 猿愿苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） ： 苑愿猿 耀远 粤 的活性片段 粤圆缘 原猿缘损伤的神经元原代培养模 型， 采用固相萃取结合液相色谱 原 质谱联用 （蕴悦鄄 酝杂） 技术， 分析测定 粤圆缘 原猿缘对大脑皮质神经元主要 神经甾体合成的影响， 在细胞水平探讨 粤圆缘 原猿缘损伤 与神经甾体水平变化之间的关系。 员摇 材料与方法 员援员摇 动物摇 新生 杂责则葬怎早藻 阅葬憎造藻赠 （杂阅） 大鼠， 购自河 北省实验动物中心 （清洁级， 合格

12、证号： 怨员员园怨园） 。 员援 圆摇药物及试剂摇水溶性胆固醇、 孕砸耘郧、 阅匀耘粤、 孕砸韵郧 及 粤孕 对照品及 粤圆缘鄄猿缘均购自美国 杂蚤早皂葬 公 司， 甲睾酮 （皂藻贼澡赠造贼藻泽贼燥泽贼藻则燥灶藻， 酝栽） 购自中国药品生 物检定所， 阅酝耘酝 培养基 （阅怎造遭藻糟糟燥泽 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 耘葬早造藻 泽 皂藻凿蚤怎皂） 及胎牛血清 （枣藻贼葬造 遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂，云月杂） 购 自美国 匀赠糟造燥灶藻 公司， 灶藻怎则燥遭葬泽葬造 培养基及 月圆苑购自 美国 郧蚤遭糟燥 公司， 胰蛋白酶 （员 颐 圆缘园） 、 四甲基偶氮唑 盐 （酝栽栽） 和二甲基亚砜 （阅酝杂韵）

13、 购自美国 粤皂则藻泽糟燥 公司。乙腈为色谱纯， 其它试剂均为分析纯。衍生 化试剂 圆鄄硝基鄄源鄄三氟甲基苯肼 （圆晕云孕匀） 参考文献 方法制备 怨。 员援 猿摇主要仪器摇 猿员猿员 型水套式 悦韵圆培养箱 （美国 栽澡藻则皂燥 云燥则皂葬 公司） ， 员员园园 蕴悦辕 酝杂阅 液质联用仪 （美 国 粤早蚤造藻灶贼 公司） ， 灾蚤泽蚤责则藻责 阅蕴 固相萃取装置 （美国 杂怎责藻造糟燥 公司） ， 韵葬泽蚤泽 匀蕴月 杂孕耘 固相萃取柱 （美国 宰葬贼藻则泽 公司， 猿园 皂早辕员 糟糟） ， 氮气吹干仪 （北京八方世 纪公司） ， 蕴阅在缘鄄圆 型台式离心机 （上海安亭科学仪器 厂） ，

14、 载宰鄄愿园粤 旋涡混合器 （上海精科实业有限公 司） ， 月孕圆员员阅 型十万分之一天平 （德国 杂葬则贼燥则蚤怎泽 公 司） ， 灾藻则泽葬酝葬曾 连续波长多功能酶标仪 （美国 酝燥造藻糟鄄 怎造葬则 阅藻增蚤糟藻泽 公司） 。 员援 源摇 细胞培养及给药分组摇 参照文献方法， 略加改 进 员园。取新生大鼠大脑皮质， 剪碎后用 员郾 圆缘 早 蕴 原员胰酶在 猿苑益 水浴箱内消化， 用尖端钝化的巴氏 滴管缓慢吹打成细胞悬液， 调整活细胞密度为 员郾 园 伊员园怨蕴 原员， 接种于预先用多聚赖氨酸包被的 远 孔 培养板中， 每孔 圆 皂造， 置 悦韵圆体积分数为 园郾 园缘 及饱 和湿度的

15、猿苑益恒温细胞培养箱中培养， 圆源 澡 后首次 换液为 灶藻怎则燥遭葬泽葬造 完全培养基 （每 员园园 皂造 加 月圆苑圆 皂造） ， 以后每隔 圆 凿 换半液量 员 次。神经元培养 凿 愿， 随机分为对照组 （悦燥灶贼则燥造） 、 粤 损伤组 （粤， 粤圆缘 原猿缘 终浓度为 员 皂燥造蕴 原员） 、 胆固醇组 （悦， 胆固醇终浓 度为 员园 皂燥造蕴 原员） 及 粤 垣 胆固醇组 （粤 垣 悦， 粤 圆缘 原猿缘及胆固醇终浓度分别为 员 皂燥造蕴 原员 及 员园 皂燥造蕴 原员） ， 继续培养 圆源 澡， 收集细胞及细胞培养 液进行测定。 员援 缘摇 细胞样品的收集与定量摇参考文献 员员，

16、 将细 胞培养板置于冰上， 吸出培养液， 冻存待测； 收集细 胞， 紫外分光光度法测定细胞蛋白浓度。 员援 远摇 神经甾体测定摇在本实验室建立的生物样品 中神经甾体测定方法基础上改进， 增加了 孕砸韵郧 的 测定 员圆。取收集的细胞液 员 皂造， 加入内标 酝栽 （缘园 灶早 蕴 原员） 及甲醇各 员园园 造， 涡旋混匀， 离心， 上样至 预先活化的固相萃取柱， 分别以体积分数 园郾 园缘 甲醇 员 皂造 及体积分数 园郾 源 甲醇 圆 皂造 淋洗， 最后以甲醇 猿 皂造 洗脱收集洗脱液， 缘园 益 氮气吹干， 加入 圆晕云孕匀 （园郾 员园 早 蕴 原员） 员园园 造 及无水乙醇 源园 造，

17、 混匀， 远缘益衍生化反应 员 澡， 氮气吹干， 残渣用乙腈 员园园 造 复溶， 进样 圆园 造 用于 蕴悦鄄酝杂 检测。 摇 摇 蕴悦鄄酝杂 分析条件： 匀孕蕴悦 分析柱为 月阅杂 匀赠责藻则泽蚤造 悦员愿柱 （美国 栽澡藻则皂燥 公司， 圆郾 员 伊 员缘园 皂皂， 缘 皂） ， 保 护柱为 在燥则遭葬曾 杂月 悦员愿柱 （美国 粤早造蚤藻灶贼 公司， 源郾 远 伊 员圆郾 缘 皂皂， 缘 皂） ， 流动相为乙腈 原 水， 梯度洗脱 （员 耀 猿 皂蚤灶， 体积分数为 园郾 苑 乙腈； 猿 耀远 皂蚤灶， 体积分数为 园郾 愿 乙腈； 远 耀员园 皂蚤灶， 乙腈； 员园 耀员缘 皂蚤灶，

18、体积分数为 园郾 苑 乙腈） ， 流速员 皂造皂蚤灶 原员， 柱温为源园益； 酝杂 分析 采用大气压化学离子化源 （粤孕悦陨） ， 负离子检测， 用 于选择离子监测 （杂陨酝） 定量分析的离子分别为 皂辕 扎 缘员愿 （ 孕砸耘郧鄄圆晕云孕匀， 酝鄄匀 原 ） 、 皂辕 扎 源怨园（ 阅匀耘粤鄄 圆晕云孕匀，酝鄄匀 原 ） 、 皂辕 扎 苑员怨 （孕砸韵郧鄄圆 （圆晕云孕匀） ，酝鄄 匀 原 ） 、 皂辕 扎 缘圆园 （粤孕鄄圆晕云孕匀，酝鄄匀 原 ） 及 皂辕 扎 缘园源 （酝栽鄄圆晕云孕匀，酝鄄匀 原 ） ， 具体的质谱参数详见文 献 员圆。 员援 苑摇 细胞存活率检测摇 细胞以 员郾 园

19、 伊 员园愿蕴 原员密 度接种于 怨远 孔板， 按上述方法培养、 分组处理， 弃去 培养液， 酝栽栽 法检测细胞存活率， 在多功能酶标仪 上测定 苑缘园 灶皂 的吸收度值， 以对照组平均吸收值为 员园园豫， 以各处理组吸收值与对照组的比值计算存活 率。 员援 愿摇 数据处理及统计摇 结果均以珋曾 依 泽 表示。采用 杂孕杂杂 员源郾 园 软件进行统计分析， 多组间比较采用单 因素方差分析， 两组间比较采用 贼 检验。 圆摇 结果 圆援 员摇 神经甾体测定方法学摇本实验条件下各待测 物离子色谱峰分离良好， 细胞培养液中的杂质亦不 干扰测定， 阅匀耘粤、 孕砸耘郧、 孕砸韵郧、 粤孕 及内标 酝栽

20、 的保 留时间分别为 缘郾 远、 苑郾 圆、 愿郾 怨、 苑郾 猿 和 远郾 缘 皂蚤灶 左右。 以各待测物峰面积与内标峰面积的比值 （再） 对各待 测物浓度 （悦） 用最小二乘法进行加权 （员辕 悦） 回归运 算， 得回归方程： 再孕砸耘郧越 远郾 怨圆 伊 员园 原员 悦 垣 员郾 园苑 伊 员园 原圆， 则 越 园郾 怨怨苑员； 再 阅匀耘粤 越 缘郾 员圆 伊 员园 原员 悦 垣 员郾 源远 伊 员园 原圆， 则 越 园郾 怨怨怨园； 再 孕砸韵郧 越 缘郾 愿圆 伊 员园 原员 悦 垣 员郾 远远 伊 源愿苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻

21、贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） 员园 原圆， 则 越园郾 怨怨愿怨； 再 粤孕越缘郾 员缘 伊员园 原员 悦 垣员郾 远缘 伊员园 原圆， 则 越园郾 怨怨远远。 摇 摇 在 园郾 园圆 耀 远郾 园 早蕴 原员范围内， 各待测物线性 关系良好， 最低定量限 （蕴蕴韵匝） 均为 园郾 园圆 早蕴 原员。 各待测物的日内、 日间变异均分别小于 苑郾 缘豫 和 苑郾 苑豫 （灶 越 缘） ， 准确度 （相对误差） 均小于 圆郾 园豫。 圆援 圆摇 粤对神经元合成神经甾体的影响摇 神经元培 养液中神经甾体的测定结果见 栽葬遭 员。对照组及 粤 处理组因未加入神经甾体合成必需的底物胆固醇，

22、 均未测得各种神经甾体。胆固醇组及 粤 垣 胆固醇 组 阅匀耘粤 的浓度低于 蕴蕴韵匝。与胆固醇组相比， 粤 圆缘 原猿缘处理后神经甾体 孕砸耘郧 水平略有降低 （孕 跃 园郾 园缘） ， 孕砸韵郧 水平下降了 圆怨郾 愿豫 （孕 约园郾 园员） ， 粤孕 水 平增高 缘员郾 缘豫 （孕 约园郾 园员） 。 栽葬遭 员摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 粤圆缘 原猿缘燥灶 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽 蚤灶 责则蚤皂葬则赠 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽援（珋曾 依 泽，灶 越怨） 郧则燥怎责 蕴藻增藻造泽 燥枣 灶藻怎则燥泽贼藻

23、则燥蚤凿泽辕 早早 原员 孕则燥 阅匀耘粤孕砸耘郧孕砸韵郧粤孕 悦晕阅员援 圆愿 依园援圆缘圆远援 圆 依圆援 猿员园援 员 依园援 愿 粤 垣 悦晕阅员援 员源 依园援员园员愿援 源 依员援 圆员缘援 猿 依员援 园 摇 摇 孕 约园郾 园员 增泽 悦；晕阅：糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 枣燥怎灶凿 遭藻造燥憎 蕴蕴韵匝援 圆援 猿摇 粤对神经元存活率的影响摇与对照组相比， 粤 圆缘鄄猿缘处理后神经元存活率明显降低 （孕 约园郾 园员） ， 胆 固醇处理组神经元存活率未见明显改变 （ 孕 跃 园郾 园缘） ， 但 粤 垣 胆固醇组的神经元存活率明显高于 粤 处理组 （孕 约园郾 园员） ， 见

24、 云蚤早 员。 云蚤早 员摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 粤圆缘 原猿缘燥灶 糟藻造造 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 蚤灶 责则蚤皂葬则赠 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 （灶 越远） 摇 摇 孕 约园郾 园员 增泽 糟燥灶贼则燥造；裕裕孕 约园郾 园员 增泽 粤；孕 约园郾 园员 增泽 悦援 猿摇 讨论 摇 摇 蕴悦鄄酝杂 结合衍生化是神经甾体测定的常用方 法 员猿。本文在本实验室建立的生物样品中神经甾 体测定的 匀孕蕴悦鄄酝杂 法基础上进一步完善。采用内 径为 员圆郾 缘 皂皂 的窄径柱为分离固定相， 实现了 孕砸韵郧 的测定。孕砸韵郧 经圆晕云孕匀 衍生后形成 孕

25、砸韵郧鄄 圆 （圆晕云孕匀） ， 极性非常低， 采用传统内径的色谱样极 难洗脱。本文所建方法利用 蕴悦鄄酝杂 特有的专属性 强、 不需色谱峰完全分离即可进行定量分析的特点， 优化了梯度洗脱程序， 每个样品一次运行在 员缘 皂蚤灶 内完成， 并实现了 孕砸耘郧、 阅匀耘粤、 孕砸韵郧 及 粤孕 源 种成 分的同时测定； 采用固相萃取法进行样品提取， 简化 了样品处理步骤； 检测灵敏度高， 达 责早 水平， 能够满 足样本中神经甾体测定的需要。 摇 摇 应用上述方法， 本文首次对 粤圆缘 原猿缘引起原代培 养的大鼠皮质神经元损伤时神经甾体水平的变化进 行了研究。结果表明终浓度为 员 皂燥造 蕴 原

26、员 的 粤 圆缘 原猿缘处理 圆源 澡 可引起大鼠皮质神经元 缘园豫 左右 的损伤 （孕 约 园郾 园员） ， 胆固醇处理的神经元细胞存活 率未见改变 （孕 跃园郾 园缘） ， 但 粤圆缘 原猿缘合用胆固醇处理 的神经元细胞存活率明显高于 粤 处理组 （孕 约 园郾 园员） 。与胆固醇组相比， 粤圆缘 原猿缘处理后 孕砸耘郧 水 平略有降低 （孕 跃 园郾 园缘） ， 孕砸韵郧 水平明显下降 （孕 约 园郾 园员） ， 粤孕 水平明显增高 （孕 约园郾 园员） 。此外， 胆固醇 处理能部分对抗 粤 对皮质神经元的损伤作用， 可 能也与其代谢生成神经甾体所发挥的保护作用有 关。 摇 摇 虽然 阅

27、匀耘粤 在脑组织内含量较高， 但 孕源缘园 糟员苑 在脑内皮质部位的表达却很少 员源。本研究在离体 培养的神经元培养液中测得的 阅匀耘粤 极低， 可能与 皮质神经元 孕源缘园糟员苑 表达量少有关。本研究结果还 表明， 粤 致神经元损伤时 孕砸耘郧鄄孕砸韵郧鄄粤孕 代谢通 路发生明显改变， 而 孕砸韵郧 水平下降的情形亦见于 人神经母瘤细胞的 粤 损伤模型中 员缘。上述结果 表明， 粤 对神经甾体代谢通路的影响具有选择性。 摇 摇 有研究表明 孕砸耘郧 处理对 粤 引起的神经元损 伤具有保护作用 员远。作为各种合成其它神经甾体 的前体， 这一保护作用可能是 孕砸耘郧 本身及由其代 谢生成的各种神

28、经甾体共同作用的结果。尤其是 孕砸韵郧鄄粤孕 代谢通路的明显改变提示其在 粤 引起 的神经元损伤中可能具有关键作用， 它们对 粤 损 伤神经元的保护作用和机制值得进一步研究。 参考文献： 员 摇砸燥遭藻造 孕，月葬怎造蚤藻怎 耘 耘援 晕藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 允 援 栽则藻灶凿泽 耘灶凿燥糟则蚤灶燥造 酝藻贼葬遭， 员怨怨源， 缘 （员） ： 员 原愿 圆 摇 酝藻造造燥灶 杂 匀，郧则蚤枣枣蚤灶 蕴 阅援 晕藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽：遭蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 糟造蚤灶蚤糟葬造 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 允 援 栽则藻灶凿泽 耘灶

29、凿燥糟则蚤灶燥造 酝藻贼葬遭，圆园园圆，员猿 （员） ：猿缘 原 源猿援 缘愿苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） 猿 摇 运葬憎葬贼燥 杂， 再葬皂葬凿葬 酝， 运蚤皂燥贼燥 栽援 月则葬蚤灶 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽 葬则藻 源贼澡 早藻灶鄄 藻则葬贼蚤燥灶 灶藻怎则燥皂藻泽泽藻灶早藻则泽 蚤灶 贼澡藻 遭则葬蚤灶：糟藻造造 遭蚤燥责澡赠泽蚤糟葬造 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 泽贼藻则燥蚤凿 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 允 援 粤凿增 月蚤燥责澡赠泽， 圆园园猿， 猿苑： 员 原源愿援 源 摇 蕴

30、葬责糟澡葬噪 孕 粤，粤则葬怎躁燥 阅 酝援 孕则藻糟造蚤灶蚤糟葬造 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 灶藻怎则燥泽贼藻鄄 则燥蚤凿泽 葬泽 灶藻怎则燥责则燥贼藻糟贼蚤增藻 葬早藻灶贼泽 枣燥则 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 燥枣 灶藻怎则燥凿藻早藻灶藻则葬鄄 贼蚤增藻 凿蚤泽藻葬泽藻泽 允 援 陨灶贼 砸藻增 晕藻怎则燥遭蚤燥造， 圆园园员， 源远： 猿苑怨 原怨苑援 缘 摇 宰燥躁贼葬造 运，栽则燥躁灶葬则 酝 运，悦扎怎糟扎憎葬则 杂 允援 耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 灶藻怎则燥责则燥贼藻糟鄄 贼蚤增藻 枣葬糟贼燥则泽：灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽 允 援 孕澡葬则皂葬糟燥造 砸藻责，圆园园远， 缘愿

31、 （猿） ： 猿猿缘 原源园援 远 摇 耘灶早藻造遭燥则早澡泽 杂，阅藻 阅藻赠灶 孕 孕援 栽澡藻 灶藻怎则燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 燥枣 粤造扎澡藻蚤皂藻则 泽 凿蚤泽藻葬泽藻 允 援 粤糟贼葬 晕藻怎则燥造 月藻造早， 员怨怨苑， 怨苑 （圆） ： 远苑 原愿源 苑 摇 匀葬则凿赠 允 粤，匀蚤早早蚤灶泽 郧 粤援 粤造扎澡藻蚤皂藻则 泽 凿蚤泽藻葬泽藻：贼澡藻 葬皂赠造燥蚤凿 糟葬泽鄄 糟葬凿藻 澡赠责燥贼澡藻泽蚤泽 允 援 杂糟蚤藻灶糟藻， 员怨怨圆， 圆缘远 （缘园缘源） ： 员愿源 原缘援 愿 摇宰藻蚤造造鄄耘灶早藻则藻则 杂，阅葬增蚤凿 允 孕，杂葬扎凿燥增蚤贼糟澡 灾，藻贼 葬造

32、援 晕藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿 择怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 澡怎皂葬灶 遭则葬蚤灶 则藻早蚤燥灶泽：糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 遭藻贼憎藻藻灶 粤造扎澡藻鄄 蚤皂藻则 泽 葬灶凿 灶燥灶凿藻皂藻灶贼藻凿 责葬贼蚤藻灶贼泽 允 援 允 悦造蚤灶 耘灶凿燥糟则蚤灶燥造 酝藻贼葬遭， 圆园园圆， 愿苑 （员员） ： 缘员猿愿 原源猿援 怨 摇 匀蚤早葬泽澡蚤 栽，栽葬噪蚤凿燥 晕，再葬皂葬怎糟澡蚤 粤，杂澡蚤皂葬凿葬 运援 耘造藻糟贼则燥灶鄄糟葬责贼怎鄄 则蚤灶早 凿藻则蚤增葬贼蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 灶藻怎贼则葬造 泽贼藻则燥蚤凿泽 枣燥则 蚤灶糟则藻葬泽蚤灶早 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 蚤灶 造蚤择

33、怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠辕 灶藻早葬贼蚤增藻 葬贼皂燥泽责澡藻则藻 责则藻泽泽怎则藻 糟澡藻皂蚤糟葬造 蚤鄄 燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶鄄皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠 允 援 粤灶葬造 杂糟蚤，圆园园圆， 员愿 （员圆） ：员猿园员 原苑援 员园薛摇 改，吴红海， 侯艳宁援 孕酮对大鼠大脑皮质神经元氨基酸 类神经递质释放的影响 允 援 中国药理学通报，圆园园愿，圆源 （缘） ： 远愿园 原猿援 员园载怎藻 郧， 宰怎 匀 匀，匀燥怎 再 晕援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 责则燥早藻泽贼藻则燥灶藻 燥灶 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 灶藻怎则燥贼则葬灶泽皂蚤贼贼藻则泽 则藻造藻葬泽藻凿 枣则燥皂 则

34、葬贼 糟藻则藻遭则葬造 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂葬糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （缘） ： 远愿园 原猿援 员员江摇平，侯艳宁援 吗啡对原代培养大鼠皮质神经元神经甾体 水平的影响 允 援 中国药理学通报， 圆园园远， 圆圆 （员圆） ： 员源愿怨 原怨猿援 员员允蚤葬灶早 孕，匀燥怎 再 晕援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻 燥灶 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣 责则蚤皂葬则赠 糟怎造贼怎则藻凿 则葬贼 糟藻则藻遭则葬造 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂葬鄄 糟燥造 月怎造造， 圆园园远， 圆圆

35、（员圆） ： 员源愿怨 原怨猿援 员圆任进民，侯艳宁援 高效液相色谱 原 质谱联用测定大鼠不同脑 区的游离型神经甾体 允 援 药学学报， 圆园园缘， 源园 （猿） ： 圆远圆 原远援 员圆砸藻灶 允 酝，匀燥怎 再 晕援 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 怎灶糟燥灶躁怎早葬贼藻凿 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽 蚤灶 则葬贼 遭则葬蚤灶 则藻早蚤燥灶泽 遭赠 造蚤择怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠辕 灶藻早葬贼蚤增藻 葬贼皂燥泽责澡藻则蚤糟 责则藻泽泽怎则藻 蚤燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠 允 援 粤糟贼葬 孕澡葬则皂 杂蚤灶， 圆园园缘， 源园 （猿） ： 圆远圆

36、原远援 员猿匀蚤早葬泽澡蚤 栽，杂澡蚤皂葬凿葬 运援 阅藻则蚤增葬贼蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 灶藻怎贼则葬造 泽贼藻则燥蚤凿泽 贼燥 藻灶鄄 澡葬灶糟藻 贼澡藻蚤则 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 蚤灶 造蚤择怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 原 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠 允 援 粤灶葬造 月蚤燥葬灶葬造 悦澡藻皂，圆园园源，猿苑愿 （源） ： 愿苑缘 原愿圆援 员源悦燥皂责葬早灶燥灶藻 晕 粤，月怎造枣燥灶藻 粤，砸怎遭藻灶泽贼藻蚤灶 允 蕴，酝藻造造燥灶 杂 匀援 杂贼藻鄄 则燥蚤凿燥早藻灶蚤糟 藻灶扎赠皂藻 孕源缘园糟员苑 蚤泽 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 贼

37、澡藻 藻皂遭则赠燥灶蚤糟 糟藻灶贼则葬造 灶藻则增燥怎泽 泽赠泽贼藻皂 允 援 耘灶凿燥糟则蚤灶燥造燥早赠， 员怨怨缘， 员猿远 （员员） ： 缘圆员圆 原圆猿援 员缘 杂糟澡葬藻枣枣藻则 灾，酝藻赠藻则 蕴，孕葬贼贼藻鄄酝藻灶泽葬澡 悦，藻贼 葬造援 阅燥泽藻鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻鄄泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 葬皂赠造燥蚤凿鄄 责藻责贼蚤凿藻 燥灶 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤鄄 凿燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 澡怎皂葬灶 灶藻怎则燥遭造葬泽贼燥皂葬 糟藻造造泽 允 援晕藻怎则燥糟澡藻皂 陨灶贼， 圆园园愿， 缘圆 （远） ： 怨源愿 原缘缘援 员远郧怎则泽燥赠 耘

38、，悦葬则凿燥怎灶藻造 粤，运葬造蚤皂蚤 酝援 孕则藻早灶藻灶燥造燥灶藻 责则燥贼藻糟贼泽 皂燥怎泽藻 澡蚤责责燥糟葬皂责葬造（匀栽鄄圆圆）糟藻造造泽 葬早葬蚤灶泽贼 早造怎贼葬皂葬贼藻 葬灶凿 葬皂赠造燥蚤凿 遭藻贼葬 责则燥贼藻蚤灶 贼燥曾蚤糟蚤贼赠 允 援 晕藻怎则燥糟澡藻皂 砸藻泽， 圆园园员， 圆远 （员） ： 员缘 原圆员援 耘枣枣藻糟贼 燥枣 粤圆缘 原猿缘燥灶 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 责则蚤皂葬则赠 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 再哉 再葬灶早员， 圆， 载哉耘 郧葬蚤圆， 宰哉 匀燥灶早鄄澡葬蚤圆， 蕴陨 杂澡葬鄄泽澡葬员， 圆， 匀韵哉 再

39、葬灶鄄灶蚤灶早员， 圆 （员援 阅藻责贼 燥枣 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠， 匀藻遭藻蚤 酝藻凿蚤糟葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠， 杂澡蚤躁蚤葬扎澡怎葬灶早摇 园缘园园员苑， 悦澡蚤灶葬； 圆援 阅藻责贼 燥枣 孕澡葬则皂葬糟赠， 月藻贼澡怎灶藻 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 孕藻葬糟藻 匀燥泽责蚤贼葬造 燥枣 孕蕴粤， 杂澡蚤躁蚤葬扎澡怎葬灶早摇 园缘园园愿圆， 悦澡蚤灶葬） 粤遭泽贼则葬糟贼： 粤蚤皂摇 栽燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 粤圆缘 原猿缘燥灶 贼澡藻 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 责则蚤皂葬则赠 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎鄄 则燥灶泽

40、援 酝藻贼澡燥凿泽摇孕则蚤皂葬则赠 糟怎造贼怎则藻凿 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 憎藻则藻 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 粤圆缘 原猿缘（员 皂燥造 蕴 原员 ） ， 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 责则藻早灶藻灶燥造燥灶藻 （ 孕砸耘郧） ， 凿藻澡赠凿则燥藻责蚤鄄 葬灶凿则燥泽贼藻则燥灶藻 （阅匀耘粤） ， 责则燥早藻泽贼藻则燥灶藻 （孕砸韵郧） 葬灶凿 葬造造燥鄄 责则藻早灶葬灶燥造燥灶藻 （粤孕） 憎藻则藻 皂藻葬泽怎则藻凿 遭赠 蕴悦鄄酝杂 葬枣贼藻则 泽燥造鄄 蚤凿鄄责澡葬泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶援 栽澡藻 灶藻怎则燥灶泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 憎葬泽

41、 凿藻贼藻则鄄 皂蚤灶藻凿 葬泽 泽怎则增蚤增蚤灶早 则葬贼藻 遭赠 酝栽栽援 砸藻泽怎造贼泽摇悦燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责， 贼澡藻 灶藻怎则燥灶泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 憎葬泽 则藻鄄 凿怎糟藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 贼燥 葬遭燥怎贼 缘园豫 （孕 约 园郾 园员） 葬枣贼藻则 遭藻鄄 蚤灶早 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 粤圆缘 原猿缘援 栽澡藻 灶藻怎则燥灶泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 憎葬泽 灶燥贼 葬枣枣藻糟贼藻凿 遭赠 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 贼则藻葬贼皂藻灶贼援 宰澡蚤造藻 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 粤 圆缘 原猿缘泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽造赠，

42、糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 葬怎早皂藻灶贼藻凿 贼澡藻 灶藻怎鄄 则燥灶泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 贼燥 葬遭燥怎贼 愿园豫（孕 约 园郾 园员） ， 责燥泽泽蚤遭造赠 遭赠 遭藻蚤灶早 皂藻贼葬遭燥造蚤扎藻凿 贼燥 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿泽援 悦燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 贼则藻葬贼皂藻灶贼 早则燥怎责， 憎澡藻灶 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 粤圆缘 原猿缘， 孕砸耘郧 造藻增藻造 则藻凿怎糟藻凿 泽造蚤早澡贼造赠， 葬灶凿 孕砸韵郧 造藻增藻造 则藻凿怎糟藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 （孕 约 园郾 园员） ， 憎澡蚤造藻 粤孕 造藻增藻造 早则藻葬贼造赠 蚤灶鄄

43、 糟则藻葬泽藻凿 （孕 约 园郾 园员） 援 悦燥灶糟造怎贼蚤燥灶摇栽澡藻 责则藻泽藻灶贼 泽贼怎凿赠 枣蚤则泽贼造赠 泽澡燥憎泽 贼澡葬贼 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽 蚤灶 责则蚤皂葬则赠 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 糟澡葬灶早藻 早则藻葬贼造赠 憎澡藻灶 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 粤 圆缘 原猿缘， 藻泽责藻糟蚤葬造造赠 贼澡藻 孕砸耘郧鄄孕砸韵郧鄄粤孕 责葬贼澡憎葬赠援 悦澡燥鄄 造藻泽贼藻则燥造， 贼澡藻 灶藻糟藻泽泽葬则赠 泽怎遭泽贼则葬贼藻 枣燥则 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻鄄 泽蚤泽， 糟葬灶 遭藻 责葬则贼蚤葬造造赠 葬早葬蚤灶泽贼 贼澡藻 粤圆缘 原猿缘灶藻怎则燥贼燥曾蚤糟蚤贼赠 燥灶 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽援 运藻赠 憎燥则凿泽： 粤圆缘 原猿缘； 灶藻怎则燥泽贼藻则燥蚤凿燥早藻灶藻泽蚤泽； 蕴悦鄄酝杂 葬泽鄄 泽葬赠； 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽； 灶藻怎则燥贼燥曾蚤糟蚤贼赠； 粤造扎澡藻蚤皂藻则泽 凿蚤泽藻葬泽藻 远愿苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远）