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1、C 5 7 / B L 6小鼠骨髓间充质干细胞的体外优化培养和 酒精及其代谢物毒性效应的探讨 李红1屈卫东2吴德生1王霞2 【摘 要】目的建立C 5 7 / B L 6小鼠骨髓间充质干细胞( ma r r o wme s e n c h y ma l s t e m c e l l s , MS C s )的体外分离和 培养体系,探讨酒精及其代谢物对MS C s的毒性。方法从C 5 7 / B L 6小鼠的股骨骨髓中分离MS C s ,通过优化细胞的培 养方法进行有效培养、传代,最终获得纯度较高的MS C s ,并对第4代细胞进行C D 9 0和C D 3 4免疫组织化学染色鉴定。对 第2代细
2、胞以4 1 0 5个/ ml 密度接种于9 6孔板,每孔2 0 0 l ,第2天以用乙醇及乙醛进行染毒,剂量设计为乙醇5 . 7 、 1 7 . 0 、 5 0 . 0 、 1 0 0 . 0 、 1 5 0 . 0mmo l / L ,乙醛4 . 5 、 0 . 9 、 0 . 1 8 、 0 . 0 3 6 、 0 . 0 0 72 、 0 . 0 0 14 4 、 0 . 0 0 02 8 8mmo l / L ,对照组为MS C s以不加 乙醇及乙醛的1 0 %胎牛血清的 - ME M培养液培养。3d后MT T检测细胞增殖活性。结果 MS C s在前6代表现出较 好的稳定性和旺盛的自我
3、增殖能力,免疫组织化学染色显示第4代MS C s C D 9 0呈阳性、 C D 3 4呈阴性。 MT T检测乙醇在 1 7 . 0 、 1 0 0 . 0及1 5 0 . 0mmo l / L时出现细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义( P0 . 1 8mmo l / L 时随着浓度增加细胞增殖力减弱,在4 . 5mmo l / L时出现了细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义( P0 . 0 5 ) ,见表1 。 乙醛浓度0 . 1 8mmo l / L时,随着浓度的增加,细胞增殖减 弱, 4 . 5mmo l / L组对照组比较,差 异 有 统 计 学 意 义 ( P0 .
4、 0 3 6mmo l / L时出现细胞增殖减弱 趋势。其原因可能与低浓度时能刺激细胞有丝分裂,高 浓度出现细胞毒性有关。我们的实验还可以看出乙醇 出 现 毒 性 的 浓 度 (1 7 . 0 mmo l / L)较 乙 醛 ( 4 . 5mmo l / L )高,提示乙醛对MS C s毒性作用更强, 374 中国修复重建外科杂志2 0 0 6年第2 0卷第4期 其造成的损害不容忽视;该研究发现为酒精的毒性机 制研究和临床防治提供了新的思路,但乙醇尤其乙醛 对MS C s作用机制尚待进一步深入研究。 4 参考文献 1D o mi n i c i M,Ho f ma n nT J ,Ho r w
5、i t z E M.B o n e ma r r o wme s e n c h y - ma lc e l l s :b i o l o g i c a lp r o p e r i t i e sa n dc l i n i c a la p p l i c a t i o n s .JB i o l R e g u l Ho me o s t Ag e n t s ,2 0 0 1 , 1 5 ( 1 ) :2 8 - 3 4 . 2B a r r yF P ,Mu r p h yJ M.Me s e n c h y ma l s t e mc e l l s :c l i n i c
6、a l a p p l i c a - t i o n sa n db i o l o g i c a l c h a r a c t e r i z a t i o n .I n t J B i o c h eC e l l B i o l ,2 0 0 4 , 3 6 ( 4 ) :5 6 8 - 5 8 4 . 3R a h a ma nMN,Ma oJ J .S t e m c e l l - b a s e dc o mp o s i t et i s s u ec o n s t r - u c t sf o rr e g e n e r a t i v eme d i c i n
7、 e .B i o t e c h n o l B i o e n g ,2 0 0 5 ,9 1 ( 3 ) : 2 6 1 - 2 8 4 . 4 殷晓雪,陈仲强,郭昭庆,等.人骨髓间充质干细胞定向诱导分 化为成骨细胞及其鉴定.中国修复重建外科杂志,2 0 0 4 ,1 8 ( 2 ) : 8 8 - 9 1 . 5S h i b a n oK,Wa t a n a b eJ ,I wa mo t oM,e t a l .C u l t u r eo fs t r o ma l c e l l sd e r i v e df r o m me d u l l a r yc a v i t
8、yo fh u ma nl o n gb o n ei nt h e p r e s e n c eo f 1 , 2 5 - d i h y d r o x y v i t a mi nD 3 ,r e c o mb i n a n th u ma nb o n e mo r p h o g e n e t i cp r o t e i n - 2 ,o r i p r i f l a v o n e .B o n e ,1 9 9 8 , 2 2 ( 3 ) :2 5 1 - 2 5 8 . 6 唐云安,王瑞淑,张成,等.大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间质干 细胞的诱导分化作用.中风与神经疾病杂
9、志,2 0 0 3 ,2 0 ( 3 ) :1 9 6 - 1 9 8 . 7Me i r e l l e s L d aS ,Na r d i NB .Mu r i n e ma r r o w- d e r i v e dme s e n c h y ma l s t e m c e l l :i s o l a t i o n ,i nv i t r oe x p a n s i o n ,a n dc h a r a c t e r i z a t i o n .B r J Ha e ma t o l ,2 0 0 3 , 1 2 3 ( 4 ) :7 0 2 - 7 1 1 . 8K
10、u z n e t s o vS A,F r i e d e n s t e i nAJ ,R o b e yP G.F a c t o r sr e q u i r e df o r b o n ema r r o w s t r o ma lf i b r o b l a s tc o l o n yf o r ma t i o ni nv i t r o .B rJ Ha e ma t o l ,1 9 9 7 ,9 7 ( 3 ) :5 6 1 - 5 7 0 . 9 曹聪,董英海,董宇启,等.人血源性间充质干细胞培养与体外 成骨研究.中国修复重建外科杂志,2 0 0 5 , 1 9(
11、 8 ) :6 4 2 - 6 4 7 . 1 0 周敦华,黄绍良,吴燕峰,等.人间充质干细胞体外扩增及其生 物学特性的研究.中华儿科杂志,2 0 0 3 ,4 1 ( 8 ) :6 0 7 - 6 1 1 . 1 1G o n gZ ,We z e ma nF H.I n h i b i t o r ye f f e c t o f a l c o h o l o no s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o ni nh u ma nb o n ema r r o w- d e r i v e dme s e n c h y ma l s
12、t e m c e l l s .Al c o h o l C l i nE x pR e s ,2 0 0 4 , 2 8 ( 3 ) :4 6 8 - 4 7 9 . 1 2 屈卫东,王健,吴德生,等.乙醛对大鼠胚胎肢芽细胞增殖分化的 影响研究.中国工业医学杂志, 1 9 9 9 ,1 2 ( 1 ) :1 6 - 1 8 . (收稿: 2 0 0 5 - 1 0 - 1 9 修回: 2 0 0 6 - 0 1 - 1 2 ) (本文编辑:董奇男 刘丹) 信 息 第1 9届全国脊柱脊髓年会暨第2届国际脊髓损伤 学术大会征文通知 第1 9届全国脊柱脊髓年会暨第2届国际脊髓损伤学术大会拟定于2
13、 0 0 6年1 1月2日5日在广州召开。本次会议由国际脊髓学 会中国脊髓损伤学会、中国残疾人康复协会脊髓损伤专业委员会及中国脊髓损伤研究协作组主办,南方医科大学南方医院承办。 届时来自欧美、亚太地区、中国大陆以及港、澳、台地区的学者和临床医师就脊柱脊髓损伤治疗与康复等方面创新性研究及最新进 展将进行广泛的学术交流,包括特邀演讲、大会演讲、自由演讲、展板展示及脊柱外科新技术演示等交流形式。欢迎脊柱外科、泌尿 外科、康复医学、神经科学、中医等专业的临床医师、康复理疗师、护士、基础医学研究者以及研究生踊跃投稿。 征文内容: 脊柱外科:脊柱创伤、脊柱骨折治疗、脊柱外科新技术; 脊髓损伤基础研究:脊髓
14、继发性损伤机制、脊髓再生原 理、脊髓损伤修复;干细胞研究(分化调控、免疫耐受等) ; 脊髓损伤的临床研究:临床治疗、并发症的防治、功能重建(膀胱功能、性 功能及肢体功能重建) ; 临床试验结果; 脊髓损伤的康复治疗与护理 征文要求: 论文未在正式期刊上公开发表过,符合会议议题; 来稿请寄3 5 0 8 0 0字结构式摘要1分,并注明作者姓名、工作 单位、通讯地址、邮政编码(同时以wo r d格式通过E - ma i l发送,拟展板展示稿件请使用英文投稿,其他交流形式的稿件欢迎英文投 稿) ; 请在正文首页注明“拟参加展板(或会议发言等形式) “ ; 截止日期为2 0 0 6年8月3 1日; 详
15、情请登陆: www. s c i . g d . c n 。 来稿请寄:南方医科大学南方医院脊柱外科中心 广东省广州市广州大道北1 8 3 8号,邮编: 5 1 0 5 1 5 ;电话: 0 2 0 - 6 2 7 8 7 1 9 5 ;传真: 0 2 0 - 8 7 6 4 0 9 4 0 ; E - ma i l : p o s t ma s t e r n f g k . c o m;联系人:蒋晖、许玲。 2 0 0 6 - 0 4 - 0 2 474C h i n e s eJ o u r n a l o f R e p a r a t i v ea n dR e c o n s t r u c t i v eS u r g e r y ,2 0 0 6 ,Vo l 2 0 ( 4 )