CDK4在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义.pdf

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1、实用医学杂志 2006 年第 22 卷第 4 期380 作者单位: 200080上海交通大学附属第一人民医院肾移植科(陈 晓波,谭建明);530021南宁市,广西医科大学第一附属医院泌尿外 科(陈坚) 细 胞 周 期 的 内 源 性 调 控 主 要 是 通 过 Cyclin-CDK-CDI 网络来实现,周期素依赖激酶 (CDK) 如同 “细胞周期引擎” , 控制细胞生长周期的进展1。 作 为 CDK 家族成员的 CDK4 已被证实是一种癌基因, 其 异常表达可促进肿瘤的发展,有学者认为其具有早期 诊断和判断预后的价值 2 - 3。笔者采用免疫组织化学 方法对膀胱移行细胞癌 (BTCC) 中 C

2、DK4 蛋白的表达 进行检测,以探讨其与 BTCC 发生发展的关系及其临 床意义。 1材料与方法 1. 1标本来源与处理40 例膀胱肿瘤标本取自广 西医科大学一附院 2000 - 2003 年间开放手术切除的 BTCC 组织。其中男 33 例, 女 7 例; 年龄 34 77 岁; 肿 瘤单发 22 例 , 多发 18 例; 初发 27 例, 复发 13 例。膀 胱肿瘤标本病理分级按 WHO 标准: G1级 19 例, G2级 13 例, G3级 8 例 。 临床分期按 UICC-TNM 标准 Tis T1 期 25 例, T2 T4期 15 例。10 例对照者为前列腺手术 时取得的正常膀胱黏

3、膜组织。标本均经病理证实, 10%福尔马林固定, 石蜡包埋。 1. 2试剂鼠抗人 CDK4 单克隆抗体, S-P 免疫组化 试剂盒, 柠檬酸抗原修复缓冲液, PBS 磷酸盐缓冲液, DAB 显色液 (均购于北京中山生物技术公司)。 1. 3免疫组化染色石蜡切片常规脱蜡, 水化, 高温 修复, 冷至室温, PBS 液冲洗, 加过氧化酶阻断液, 室温 孵育 10 min, PBS 液冲洗 3 3 min, 加非免疫性动物血 清, 室温孵育 10 min, 甩去血清, 加 CDK4 单抗, 置 4 湿盒中过夜, PBS 液冲洗 3 5 min , 加生物素标记的 二抗, 室温孵育 10 min, P

4、BS 液冲洗 3 3 min, 加链霉 菌抗生物素 - 过氧化物酶溶液, 室温孵育 10 min, PBS 液冲洗 3 3 min, 加新鲜配制的 DAB 溶液, 显微镜下 控制染色, 苏木素复染, 盐酸酒精 (0. 1%) 分化, 水洗, PBS 液冲洗返蓝, 梯度酒精脱水干燥, 二甲苯透明, 中 性树胶封固。 1. 4结果判定CDK4 阳性染色主要位于细胞核, 呈棕黄色, 在高倍镜下( 400)随机观察 3 个视野。染 色结果结合阳性细胞百分率和染色强度进行半定量 分析。结果判定标准: 阴性为 0 分, 染色弱但明显高于 阴性对照为 1 分, 染色清晰为 2 分, 染色强为 3 分。阳 性

5、细胞百分率 50 为 3 分。两项指标之和 2 分为阴性 临 床 研 究 CDK4 在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义 陈晓波谭建明陈坚 摘要目的: 探讨 CDK4 蛋白在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义。 方法: 采用免疫组化方法, 测定 10 例正常膀胱黏膜及 40 例 BTCC 标本中的 CDK4 蛋白的表达。结果: CDK4 蛋白在正常膀胱黏膜和 BTCC 中的阳性表 达率分别为 0. 00%、 52. 50%(P 0. 05 ) ; 在 T isT1中 CDK4 阳性表达率为 40. 00%, 明显低于 T2T4中的 73. 33%(P 0. 05). The pos

6、itive rate of CDK4 in Tis T1was significantly lower than that in T2 T4(P 0. 05 0. 05 0. 05 0. 05 0. 05 0. 05 ( - ), 2 分为阳性( + )。 1. 5统计学处理采用 x2检验和 Fishers 精确检验 (P 0. 05)。浅表性 (Tis T1)BTCC 中 CDK4 蛋 白 的 阳 性 表 达 率 为 40. 00%, 浸润性 (T2T4)BTCC 中 CDK4 蛋白的阳性表 达率为 73. 33%, 差异有显著性( P 0. 05) , 可能是由于研究的病例数较少的 缘故,

7、 有待于进一步大样本观察。另外, CDK4 蛋白在 浸润性 BTCC 中的阳性表达率达 73. 33% ,明显高于 表浅性 BTCC 中的 40. 00%,二者间差异有显著性(P 0. 05) ,提示 CDK4 与膀胱移行细胞癌的浸润深度 及病程进展有关,可作为判断 BTCC 恶性生物学行为 的指标之一, 对判断预后有一定价值。 4参考文献 NURSE P. A long twentieth century of the cell cycle and beyond J. Cell, 2000, 100(1) 71 - 78. PILOTTI S,DELLA TORRE G,MEZZELANI

8、A,et al.The expression of MDM2 / CDK4 gene product in the differential diagnosis of well differentiated liposarcoma and large deep-seated lipoma J . Br J Cancer, 2000, 82(7) 1271 - 1275. DONG Y, SUI L, SUGIMOTO K, et al. Cyclin D1-CDK4 complex, a possible critical factor for cell proliferation and p

9、rognosis in laryngeal squamous cell carcinomas J. Int J Cancer, 2001, 95(4) 209 -215. SAID T K, MORAES R C, SINGH U, et al. Cyclin-dependent kinase (cdk)inhibitors / cdk4 / cdk2 complexes in early stages of mouse mammary preneoplasia J. Cell GrowthDiffer, 2001,12(6): 285 -295. WANG Y L, UHARA H, YAM

10、AZAKI Y, et al. Immunohistochemical detection of CDK4 and P16INK4 protein in cutaneous malignant melanoma J. Bri J Dermatol, 1996, 134(2) 269 -275. ZHANGT,NANNEYLB,LUONGOC,etal.Concurrent overexpression of cyclin D1 and cyclin-dependent kinase 4 (Cdk4) in intestinal adenomas from multiple intestinal

11、 neoplasia (Min) mice and human familial adenomatous polyposis patients J. Cancer Res, 1997, 57(1) 169 - 175. HE J, OLSON J J, JAMES C D. Lack of p16INK4 or retinoblastoma protein(pRb), or amplification-associated overexpression of cdk4 is observed in distinct subsets of malignant glial tumors and cell lines J. Cancer Res, 1995, 55(21) 4833 - 4836. SIMON R, STRUCKMANN K, SCHRAML P, et al. Amplification pattern of 12q13-q15 genes (MDM2, CDK4, GLI) in urinary bladder cancer J. Oncogene, 2002, 21(16) 2476 - 2483. (收稿: 2005 - 11 - 01) 1 2 3 4 5 6 7 8

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