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1、!“ # 通道阻断剂对 $%:28； 关永源， 男， # 岁， 教授， 博士生导师。国务院学位委员会 药学科评议组成员 中国图书分类号?()“； ? )“!“!； ? )“,-； ? )-%“； ? )-%- 文献标识码A文章编号!$!(!） ， 静脉栓塞 致死， 无菌条件下， 断头开颅剥去硬脑膜。小心取出 整个脑组织， 放入冰浴的缓冲液 （55+3QK !： *6.3 !)$，H.3 #，.6.3“$%，/;.3“!)，;3RS+T2 #，B4C4G !$，UB ,-） 中， 在实体显微镜下轻轻分离出整个基 底动脉， 并剥离周围粘连组织和系膜， 然后将整条血 管剪成长约 $“ 55 的小环，
2、 离心弃去上清液， 加入 ! 53 含如下成分的消化液 （55+3QK !） ： *6.3 !)$， H.3 #，.6.3“$“，/;.3“!)，;3RS+T2 #，B4C4G !$， 胶原酶$型 （$# ; QK !） ， 弹性酶 （$# ; QK !） ， 透明 质酸酶 LE(G 型 （$# ; QK !） 及脱氧核糖核酸酶%型 （$! ; QK !） 。在室温下放置 ! V， 然后用特制的吸 管吹打该消化液， 用力大小适中， 吹打约 !# O !, 次， 绝大部分平滑肌细胞能被酶从血管环上消化下来， 光镜下呈不规则的长柱状。此时立即加入含体积分 数为 !$W小牛血清的 F/4/MJ!“
3、培养液 ! 滴以终 )%中国药理学通报!“#$% 洗 ) 次， 用消化液 （“?AB C ) /DE -. ) )“，调 PO 5JQ!F% +!E 的 4+ / 直径的 培养皿中， 室温负载 1“ /AB。之后将玻片取出固定 于具流入和流出两孔的灌流室的底部 （灌流室容积 约 +“!E） 。实验开始前先用测定液恒温 （456） 灌 流约 + 7 )“ /AB， 以保证染料充分酯化。 2J! C A的 测定是通过生物荧光双波长影像分析系统进行的。 信号经视频获取器数字化后存于电脑的硬盘。影像 捕获及处理均通过 %NRJSELD 软件 （,BATNJE A/J0AB0 2DP，,;F） 控制。实
4、验开始前先用鼠标随机选择 4 7 + 个细胞， 然后开始记录， 每个细胞都有一对 41“ B/ 和 4U“ B/ 的强度 . 时间曲线， 同时得到二者的 比值 . 时间曲线， 即各时刻的瞬即 JRAD 值。采用 V41“ V4U“， 即 JRAD 值的改变来表示 2J! C A。所有实验 均观察阻断剂对激动剂引起外 2J! C内流的影响， 所 以均在平台期给药。 !W(试剂(LJQ!F%， 牛血清白蛋白 （:;F） 购于 :DNXAB0N %JBBXNA/ 公司 （YN/JB?） ； $%F） ； ;K(H4H+ 购于 :AD/DE NNJMX -JZ 公司 （,;F） ；2?MEDPAJDB
5、AM JMA8 （29F） ， $V$;，BA/D8APABN （BA/） ， 胰蛋白酶 （=?PAB） ，O， 3 等购于 ;A0/J 公司 （,;F） ， I99: 购于 NNJMX :ADMXN/AMJE VBRNBJRADBJE 公司 （,;F） 。其它 试剂均为国产市售分析纯。 (LJQ!F%， 29F，$V$;，I99: 等用 $%;3 （;A0/J 公司） 溶解， 制备 )“ /DE-. )储存液， ;K(H4H+ 用双蒸水溶解， 制备 )“ /DE -. )储存液， 上述药物 均分装后于 . !“6冻存， 临用前再用双蒸水稀释成 相应浓度； +QO= 用双蒸水溶解。 !W)仪器
6、单细胞内 2J! C测定： 成像系统 IA_DB N 5+a OA0X VBRNBAR? -A0XR 2H5 （OJ/J/JRL 9XDRDBQ AM），IA_DB EA8N ;93= （$AJ0BDRAM VBRL/NBR，VBM） ，软件处理系统 %NRJ V/J0AB0 ;NAN 1JE V/J0AB0 2DPDJRADB） 。 !W*数据处理数据以! b “ 表示， # 代表不少于 4 次不同实验中的细胞数。药物对 2J! C内流的抑制 率以对 V41“ V4U“， 即对 JRAD 值 （） 的抑制率 （#） 表示， 放在所有数据后的括号内。抑制率以 （加阻断剂之 前平台相 值 . 加
7、药之后平台相 值） （加阻断剂 之前平台相 值 . 静息 值） * )“#表示。组间 和同组用药前后的差异用 $ 检验进行统计学分析。 #结果 #W!兔脑椎基底动脉平滑肌细胞的鉴定倒置显 微镜下观察， 可见细胞呈贴壁生长， 细胞呈长梭型或 椭圆型， 可有几个突起， 放射状生长， 成束的细胞平 行排列； 电镜下显示胞体 （“代） 内富含肌丝， 肌束间 可见许多密体， 是平滑肌细胞的典型表现； 培养细胞 爬片进行的肌动蛋白免疫细胞化学染色显示， 5# 的细胞染色为阳性， 细胞核外周及细胞质呈棕黄色， 这是平滑肌细胞具有肌动蛋白表达的表现。 #+#*,-. 和 $/0 触发的兔脑血管平滑肌细胞 $%
8、# 4EF （1A!B+9 CD $ ）“3 (:9):G; + 4EF （1A!B+9 CD $） +34567 “G*8+3* “3 4567“:B “3 (:9):G; G5I 5 GEGA#)00?GER“ N U$:(; ? （$A!B+9 CD $）53; 4EF （1A!B+9 CD $ ）“3 (:9):G; 0 ? .） ， 对 %() *内流的最大抑制分别为 （?. ?） A和 （=/ )） 。说明 -B-7 抑制 !“ #$和 %? ; /0123.4.;? ; /0123.4.7.(.2 敏感的 $%?!+5 AB ）1/7 0-C （$?!+5 AB ）“/ (65)
9、6D7 81*“51D 1D)D9 *+)E 6*(5 (55* ： ABCDCE% BFGHBICED； #：$HEGFEJB%JCHE3BFKLHEKF GMBNF （! + “ ）HO !“# HE 2345 %EI $“ CEIMGFI $%7.(.2 在一定浓度范围内对 TA$ 有相对 选择性阻断作用， 作为常用的 TA$ 阻断剂在文中浓 度依赖性降低 2345 和 $“ 触发的 $%?A0/0! 分别与 1213、 7 0F:9； 程文英， 女， +M 岁， 研究员， 博士生导师 Q0%N 等 -研究报道， ./01 能刺激 正常小鼠的骨髓有核细胞和外周血白细胞数增加。 ./01
10、是否直接作用于造血干祖细胞促进其增殖以 及对人骨髓细胞的作用效果， 国内外还未见报道。 本文通过观察国内合成的 /01 对正常小鼠造血系 统的作用和对小鼠骨髓粒系祖细胞集落形成的影 响， 初步探索 ./01 促造血活性的作用环节， 并进一 步观察 ./01 对体外培养人骨髓粒系祖细胞增殖作 用的影响， 研究 ./01 在促进体外扩增造血干祖细 胞应用中的可能性， 并可作为检测 ./01 生物活性 的方法， 具有直观、 简便的优点。 !材料和方法 !“!药品与试剂./01 由中科院上海生化所合成 提供， 分子量为! M“$M， 用生理盐水配成所需浓 AB9；“WXW? JD2 Y11I EDEK
11、EAB2 MU ED J F:DFBDA=JAE:DU GJ. U=AB= EDEKEAB2 K WXW? := Y11I JAB= AB 9JE9J; EDEKEAE:D K ?L_5(+$+M ?L_5(+$+M J;.: U=AB= EDEKEAB2 AB 4J“ ZED;U GEF J2 KBBD EDEKEAB2 K WXW? := Y11I #$%#U ED FU;AU=B2 =JKKEA KJ.E;J= J=AB= .9:A 9U.F;B FB;. E. =B;JAB2 A: D:DU2B. 4%,4 JD2 D:D8FJDDB; E. =B;JAB2 A: AE. 4J“ ZED;U !“# $%J= J=AB=；.9:A 9U.F;B FB;.； 4J“ ZFJDDB;.；F;:=E2B FJDDB; K;:FaB=.；M&SN；41, (-中国药理学通报!“#$%&% “()*(+,-,.#+(- /0-%1#$“#$ bJD； !* （!） ： -( V (“