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1、文章编号 1007-3949 （2006） 14-02-0103-04 实验研究 Compound 48/80 对载脂蛋白 E 基因敲除小鼠 颈总动脉套环诱导斑块的影响 唐雅玲，王双，杨永宗，许增祥，叶旭，孙玉慧，彭茜，彭旷 （南华大学心血管病研究所， 湖南省衡阳市 421001） 关键词 病理学与病理生理学； Compound 48/80 对斑块的影响； 甲苯胺蓝染色法； 肥大细胞； 载脂蛋白 E 基因敲除小鼠； 颈总动脉套环术； 类胰蛋白酶 摘要 目的采用肥大细胞脱颗粒剂 Compound 48/80 作用于颈总动脉套环的载脂蛋白 E 基因敲除小鼠， 以探讨肥大细胞脱颗粒对动脉粥样硬化斑块
2、的影响及其可能作用机制。方法载脂蛋白 E 基因敲除小鼠高脂高 胆固醇饲料喂养， 行右颈总动脉套环术后分为实验组和对照组， 分别腹腔注射 Compound 48/80 或 D-hank s。第 4 次 注射后 30 min， 安乐死， 取材。全自动生物化学分析仪测定血清中脂质含量， 比色法测定血清中类胰蛋白酶活性， 苏 木素伊红染色观察颈总动脉病理改变， 甲苯胺蓝肥大细胞染色， 免疫组织化学检测平滑肌肌动蛋白和巨噬细胞 特异性抗原在斑块内的表达。结果Compound 48/80 对血清脂质水平无明显影响。Compound 48/80 明显刺激肥大 细胞脱颗粒 （80.6% 17.8%比 13.5
3、% 4.1%， P 0. 05， 表 1） 。 401ISSN 1007-3949 Chin J Arterioscler，Vol 14，No 2 表 1. 各组血清脂质含量的比较 （x s，mmol/ L，n = 20） 分组TGTCHDLCLDLC 对照组1.30 0.3712.74 0.930.46 0.1212.02 0.91 实验组0.94 0.2211.74 3.560.53 0.0611.01 4.13 2.2Compound 48/80 对载脂蛋白 E 基因敲除小鼠 血清类胰蛋白酶活性的影响 对照组和实验组血清类胰蛋白酶活性分别为 0. 36 0.10 u/ L 和 0.57
4、0.13 u/ L， 两者存在明显差异 （P 0.05） ， Compound 48/80 增加载脂蛋白 E 基因敲 除小鼠血清类胰蛋白酶活性。 2.3颈总动脉一般形态学检查结果 对照组、 实验组未套环侧颈总动脉内膜下均无 明显病理改变 （斑块面积均为 0） ， 而两组套环侧颈总 动脉内膜下均有斑块形成。对照组和实验组斑块最 大横截面积分别为 8 600 2 800 m 2 和 58 500 7 500m2， 颈总动脉最大狭窄程度分别为 41% 12%和 81% 15% （P 0.05， 图 1） ， Compound 48/80 增大斑块面积， 并使管腔狭窄程度加重。 图 1. 套环及 Co
5、mpound 48/80 对颈总动脉斑块面积及狭窄程度的影响 （ 20）A 和 B 为对照组和实验组未套环侧颈总动脉，C 和 D 为对照组和实验组套环侧颈总动脉。 2.4Compound 48/80 对颈总动脉外膜肥大细胞脱颗 粒的影响 对照组和实验组套环侧颈总动脉外膜脱颗粒的 肥大细胞百分率分别为 13.5% 4.1% 和 80.6% 17.8% （P 0.01，图 2） 。 2.5Compound 48/80 对颈总动脉斑块内平滑肌细胞 和巨噬细胞数量的影响 对照组和实验组套环侧颈总动脉斑块内 SMA 积分光密度分别为 522 137 iu 和 1219 364 iu， Mac3 积分光密
6、度分别为 169 38 iu 和 426 133 iu （P 0. 05， 图 3） 。 图 2. Compound 48/80 对套环侧颈总动脉外膜肥大细胞脱颗 粒的影响 （ 100）A 为对照组， 未见肥大细胞脱落的颗粒； B 为 实验组， 可见肥大细胞脱落的颗粒。 图 3. Compound 48/80 对套环侧颈总动脉斑块内平滑肌细胞和巨噬细胞的影响 （ 20）A 和 B 为对照组和实验组套环侧颈总动 脉斑块内 SMA 免疫组织化学染色， 可见胞浆内含有棕黄色颗粒的平滑肌细胞。C 和 D 为对照组和实验组套环侧颈总动脉斑块内 Mac3 免疫组织 化学染色， 可见胞浆内含有棕黄色颗粒的巨
7、噬细胞。 501CN 43-1262/ R 中国动脉硬化杂志 2006 年第 14 卷第 2 期 3讨 论 肥大细胞是一种参与炎症免疫应答反应的炎症 细胞， 近年研究发现， 动脉粥样硬化斑块病灶的外膜 和内膜肥大细胞数量增多， 在主动脉背侧 （易形成动 脉粥样硬化病变） 的肥大细胞数量显著高于腹侧部分 （不易形成动脉粥样硬化病变） ， 提示肥大细胞与动脉 粥样硬化的早期形成密切相关， 他们认为肥大细胞释 放的介质可能参与动脉粥样硬化形成过程。 载脂蛋白 E 基因敲除小鼠是动脉粥样硬化易感 动物， 在高脂高胆固醇饲料喂养下出现了高脂高胆固 醇血症， 同时通过颈总动脉套上 0.3 mm 内径的硅胶
8、 管， 造成管腔狭窄， 导致血流动力学改变， 从而促进套 环侧颈总动脉斑块快速形成。 Compound 48/80 是肥大细胞脱颗粒剂， 它能刺激 肥大细胞产生胞吐作用， 释放多种活性介质如组胺、 类胰蛋白酶、 胃促胰酶、 硫酸软骨素蛋白多糖和少量 肝素蛋白多糖等物质， 作用于上述动物模型， 从而使 套环侧颈总动脉斑块最大横截面积、 颈总动脉最大狭 窄程度增加， 其机制主要归结于斑块内平滑肌细胞和 巨噬细胞数量明显增加。有资料表明， 肥大细胞脱颗 粒释放的胃促胰酶可促进血管紧张素转化为血管 紧张素， 而血管紧张素对平滑肌细胞增殖有显著 的促进作用； 而且， 在心血管疾病中， 血管紧张素生 成主
9、要来源于胃促胰酶转化途径， 而不是血管紧张素 转换酶的转化途径 8。因此， 应当用胃促胰酶抑制剂 （而不是血管紧张素转换酶抑制剂） 以及血管紧张素 受体拮抗剂抑制平滑肌细胞增殖以减小斑块面积。 肥大细胞脱颗粒释放多种趋化因子， 如巨噬细胞趋化 蛋白 1、 巨噬细胞炎性蛋白 1和巨噬细胞炎性蛋白 1等。在趋化因子家族中， 巨噬细胞趋化蛋白 1、 巨 噬细胞炎性蛋白 1和巨噬细胞炎性蛋白 1都属于 CC 型趋化因子， 主要作用于单核细胞， 使外周血单核 细胞迁入血管内膜， 转化为巨噬细胞， 构成动脉粥样 硬化早期的重要事件 9。巨噬细胞在斑块内聚集， 除 了直接增大斑块面积外， 其作为斑块内最主要
10、的炎性 细胞 （占斑块内炎性细胞的 80% 左右） ， 分泌的多种 炎性介质对动脉粥样硬化的发生和发展起着更重要 的作用。由此可见， 肥大细胞诱导巨噬细胞在斑块内 聚集， 可通过炎症瀑布效应促进斑块的发展。 本研 究 应 用 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 剂 Compound 48/80 证实， 肥大细胞可促进斑块内平滑肌细胞增 殖、 巨噬细胞聚集， 增大斑块面积， 加重管腔狭窄程 度， 从而使动脉粥样硬化性病变不断发展。因此， 应 用肥大细胞膜稳定剂将为动脉粥样硬化防治提供一 个新思路。 参考文献 1 Kovanen PT.Role of mast cell in atherosclerosi
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