ELISA法检测HIV抗体室内质量控制方法的探讨.pdf

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1、江苏预防医学2 0 0 6 年1 2 月第1 7 卷第4 期 J i a n g s u P r e v Me d , D e c e m b e r , 2 0 0 6 , V o l 1 7 , N o . 4 赵淑华等人报道了激素类除草剂2 一甲一4 氯苯氧 乙酸可使小鼠翠丸萎缩， 翠丸组织中L D H酶活性 显著性降低 2 1 。 李春阳等人发现磺酞脉类除草剂苯 磺隆对附肇的发育有影响阁。武惠珍等人研究表明 麦草绝+秀立津混合除草剂可造成小鼠翠丸生精上 皮变薄， 细胞排列紊乱， 支持细胞内出现巨大异噬 体叫。国外除草剂生殖毒性的报道主要集中在苯氧 梭酸类除草剂 2 , 4 一滴， 表现

2、为生精细胞和支持细 胞的退行性改变， 精子能力减弱和精子无尾 5 1 ， 还有 研究报道麟酸醋类除草剂草甘麟可对胚胎发育产生 影响， 出现脂质化。考虑到各类除草剂均可能出现 生殖毒性， 欧盟 未来化学品政策战略 白皮书提出 今后除草剂销量在1 0 0 吨以上的应提供生殖毒性资 料L 6 1 。 提示对高效毗氟氯禾灵的 雄性生殖毒性和胚 胎发育毒性尚需进一步深人研究， 在生产使用中更 要加强对育龄男性的劳动防护和健康监护。 综合各项指标， 高效毗氟氯禾灵g o d 大鼠亚慢 性经口毒性的最大无作用剂量 N O A E L雌性为 l m g / k g ， 推算人体的每人每日容许摄人量 A D I

3、 建 议为l 0 t c g / k g ， 可以 作为制订国家相关接触标准和 食物最大残留限量标准的参考依据。 参考文献 魏金锋， 杨惠芳， 徐根林. 除草剂喳禾灵亚慢性毒性研究 J . 中 国 劳 动 卫 生 职 业 病 杂 志， 2 0 0 0 , 1 8 ( 1 ) : 5 7 - 5 8 . 赵淑华， 李景舜， 白兰.除草剂2 一 甲一 4 氯苯氧乙酸对雄性小鼠 的毒作用 J . 环境与健康杂志， 2 0 0 3 , 2 0 ( 3 ) : 1 5 1 - 1 5 3 . 李春阳， 陈小玉， 许东， 等. 苯磺隆对大鼠生殖细胞毒性试验研 究 J . 河南科技大学学报( 医学版) ，

4、2 0 0 4 , 2 2 ( 3 ) : 1 6 1 - 1 6 2 . 武惠珍， 王贵娟， 刘贵生. 混合除草剂对小鼠辜丸超微结构的 毒性影响 J .电子显微学报， 2 0 0 4 , 2 3 ( 4 ) : 3 3 7 . T a k a h a s h i K L , A o y a m a H , H o j o H . C o m p a r a t i v e s t u d i e s o n t h e s p e r m a t o t o x i c e f f e c t s o f d i n o s e b a n d i t s s t r u c t u r a

5、 l l y r e l a t e d c h e m i c a l s J . R e p r o d T o x i c o 1 , 2 0 0 4 , 1 8 ( 4 ) : 5 8 1 - 5 8 8 . 胡启之. 全球化与毒理学试验方法的更新 J . 江苏预防医学， 2 0 0 4 , 1 5 ( 1 ) : 8 3 - 8 4 . 几J门1习.Jn月一IJ 110乙njJ一巴 尸IL尸ILlllL厂L厂L 二 毒 卫 卫与 水 釜 段 全 E L I S A法检测 H I V抗体室内质量控制方法的探讨 胡海洋 (江苏省疾病预防控制中心， 江苏 南京2 1 0 0 0 9 ) 1

6、 文献标识码】 B 【 中图分类号】 R -3 3 1 【 文章编号】 1 0 0 6 -9 0 7 0 ( 2 0 0 6 ) 0 4 -0 0 6 1 -0 3 【关 键 词 】 H I V抗体; 检测; 质量控制 随着艾滋病流行形势的日趋严峻， 新发现的感 染者数量不断增加， 艾滋病检测也显得越来越重要。 目 前国内检测 H I V抗体的方法主要是酶联免疫法 ( E L I S A ) a 2 0 0 4 年版的 全国艾滋病检测技术规 范 要求采用E L I S A法时必须要包含内 部和外部对 照质控血清， 其中外部对照质控血清是为了监控检 测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异，

7、通常为弱阳性对照， 以该试剂盒临界值( C u t - o f f 值) 的2 - v 3 倍为宜。目前江苏省有近4 0 0 家的艾滋 病筛查实验室， 有部分实验室由于检测的 样本量较 小而无法采用常规的L e v e 对e n n i n g s 质控图法( 质 控图法) 进行质控， 为解决这个问题， 可采用“ 即刻 法” ( 即C r u b b s 氏法) 来进行质控， 2 0 次以后再采用 质控图法进行质控 1 , 2 1 。具体的方法如下。 1 材料与方法 1 . 1 材料H I V抗体诊断试剂盒( 酶联免疫法， 法 国生物梅里埃公司， 批号: A 4 6 G A ， 效期: 2 0

8、 0 6 一 0 7 ) ; 血清样本为各市所送待复查样本; HI V外部对 照质控血清的制备: H I V抗体阳性和阴性血清， 5 6 C 3 0 m i n灭活， 3 0 0 0 r / m i n离心 1 5 m i n ， 用 H I V抗体阴性血清梯度稀释H I V抗体强阳 性血清 并标定， 按一年使用量配制， 用0 . 2 1 .m滤膜过滤除 菌， 再按一次E L I S A实验的用量分装、 标记、 封口、 于超低温冰箱冻存; 酶标仪( a n t h o s 2 0 1 0 ) ; 洗板机 ( a n t h o s f l u i d o ) 。 1 . 2 方法每批试剂开始

9、1 -2 0 次采用即刻法， 2 1 次开始用质控图法。每更换试剂批号或不同厂家试 剂均需重新进行质控。 收稿日期: 2 0 0 6 -0 6 -2 3 作者简介: 胡海洋( 1 9 8 1 一) ， 男， 江苏泅阳人， 技师。 6 2 江苏预防医学2 0 0 6 年 12月第17卷第4 期jP r e vMe d . 1 头 二c e mb e r ， 2 0 0 6 ， Vo l l 7 ， No . 4 ( 1) 即刻法: 将质控血清的5 / C O值( x ) 从小到 大排列: X ， ， X : ， X 3 X ， ( X l 为最小值， X 。 为最 大值) 。 计算 灭 和: 。

10、 计算5 几限 值和5 斤限 值。 将5 1 _L 限 、 S l-F限 与5 1 值表中的 数字比 较: 当 5 人 限 和5 斤限 珑 、 值时说明该值已在3 、 范围之外， 属“ 失控” 。 数值处于“ 告警” 和“ 失控” 状态应舍去， 需重新检测 该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数 值， 其他值仍可继续使用。 ( 续表) 次数5 / ( 义 5 1 卜 限5 1 下 限 00000八IJ00O00 只gJO计八污月了IAL月10巧舀b 11，自勺八OOd.j.性任J改Ll乃SJJ . q0乙9自，臼，白n乙9曰99妇9白Q山 11匀只J八乙一了7.q山一了八廿门了一0 行石

11、0口内勺任卜jOO叹甘9口Q。bOO njnj边任J工O内07.OCn己OJQ户 .-护. ，LI五，1，111，11.11111111 2 . 2 2 3 2 . 2 3 5 2 . 2 0 3 2 . 1 9 8 0 . 2 9 1 2 7 9 2 8 8 2 . 2 1 0 2 。 2 4 5 2 0 8 9 2 . 3 3 7 2 . 2 3 7 2 . 2 2 2 2 . 2 1 3 2 2 0 6 2 . 2 1 3 0 . 2 7 7 0 . 2 7 0 0 . 2 9 4 0 . 2 8 6 0 . 2 8 4 0 . 2 7 8 0 . 2 7 2 0 。 2 6 6 1 .

12、 2 9 6 1 . 3 9 4 1 . 2 4 0 1 . 2 7 1 1 . 3 4 8 1 . 3 5 7 1 . 3 6 7 1 . 3 2 4 1 . 3 2 0 1 ， 3 2 4 1 . 3 8 0 2 . 4 1 0 2 . 4 8 0 2 . 5 5 0 2 . 6 1 0 2 . 6 6 0 2 . 7 1 0 2 . 7 5 0 2 . 7 9 0 2 . 8 2 0 2 . 8 5 0 2 . 8 8 0 1内b月了内了nj10Jn钊八七 勺山J4八J了压几CO连孟 J任gJOn1.11曰了llCJO 9曰0山11n乙八乙n乙Q口110自 n划1口乙八JAL工匀舟OtI

13、CCO口0 1且，111，esl.11且1孟11.111口乙 5 1 上 限5 1 下 限 2750225017501250 _ X 最 大 值一 灭=X 一 X最小值 黔 ( 2) 质控图法: 将即刻法的质控血清的20个 5 / C O值， 求均数( X) 和标准差( 5 ) 。将X， X士2 5 ， 又 士 3 ， 分 别在质控框架图中 标示出 来。以5 / C O值 作纵坐标( Y轴) ， 每一次试验作横坐标(x 轴) ， 绘制 质控图。 从第 21 次起， 将每次质控血清的检测 结果依次点人该质控框架图中， 检验进人质控状态。 出现下列情况时， 应暂停检测查找原因: 出现一 次3 :

14、范围的变化、 连续两次出现同一方向2 : 范围 的变化、 连续4 次出现同一方向的 h范围的变化、 连续 10次结果都在 15范围内， 但落在均值线的同 一侧。 2 结果 2 . 1 即刻法检测结果“ 即刻法” 连续检测 3 次后， 即可对第 3 次结果进行质控， 比较5 几 _ 限 、 5 斤限 与 脚 、 值的大小关系来看该次试验是否“ 告警” 或“ 失 控” ， 如若“ 告警” 或“ 失控” ， 舍去该次试验的数据并 重新检测， 质控数据及结果均在控， 见表 1 。 2 . 2 质控图法以实验次数X 为横坐标， S/C ( 值 为纵坐标绘制质控图， 标示X ， X 士25， X 士35于

15、质控 图中， 从第 21次试验开始， 将每次的 5 / 刀值点人 质控图中， 检验是否在控， 质控图见图1 。 八 一 无， 八” 价 场 孔 互 V 叼几 妒脚 卫份胜 胜 勺热 洲 州 不 图 1 质控血清质控图 表 1 该批质控血清“ 即刻法” 质控结果 次数5 / ( 义 )灭sS I L 限5 1 一 限n Z 、n 3 s J任0以51口IOqd 内j4lJ工刁70C八 且39臼1五门乙，111 . 1111，1钾.1一esl 八OU0)庄几gJ nol了.1几j，.且 09臼，臼八j4 12 . 2 2 8 22 . 5 5 4 32 . 4 8 7 41 . 8 4 6 52

16、. 0 1 2 61 . 9 6 5 72 . 6 2 5 81 . 8 6 5 92 . 2 2 5 2 . 4 2 3 2 . 2 7 9 2 . 2 2 5 2 . 1 8 2 2 2 4 5 2 . 1 9 8 2 2 01 0 . 1 7 2 0 . 3 2 1 0 . 3 0 2 0 . 2 9 1 0 。 3 1 4 0 . 3 2 0 0 . 3 0 0 0 . 7 6 2 0 8 5 7 1 . 1 5 0 1 . 4 6 0 1 . 6 7 0 1 . 8 2 0 1 . 9 4 0 2 . 0 3 0 2 . 1 1 0 1 . 1 6 0 1 . 4 9 0 1 . 7

17、 5 0 1 . 9 4 0 2 . 1 0 0 2 . 2 2 0 2 . 3 2 0 3 讨论 ，Rp 刻法” 实际上是数据统计处理方法中， 应用 G r u b b s 易 叮 除异常值方法在免疫质控中的应用， 就是 用检验一个室内质控结果是否为异常值的方法来判 断其是否失控。经过尝试， “ 即刻法” 可以有效地应 用于E L ISA法检测 H I V抗体的室内质量控制， 在 样本量较少的艾滋病筛查实验室， 可避免其无法使 用常规的质控图法来进行质控的不足。但是在实际 应用中， “ 即刻法” 还存在着一些局限性， 例如在失控 判断和连续趋势性的判断上， 前 3 次结果对后续质 控结果影响

18、较大s， 4 。关于不能对第 1 、 2 次实验结 果进行质控， 可以采取以下方法: 当更换试剂批号 时， 在旧批号试剂结束前将新批号试剂部分孔位与 旧批号试剂同时试验 3 次， 两种试剂均加人同批号 质控血清和部分相同样本， 旧批号试剂的质控结果 点人质控图， 新批号的质控结果按照“ 即刻法” 分析， 从第 3 或第 4 次实验开始运用新批号试剂对标本进 行实验， 这样就可以对新批号试剂的第 1 、 2 次实验 结果进行质控圈。 实验的最终目的是要获得一个可靠的实验结 果， 这就需要建立一个全面的质量管理体系， 其中室 内质控是重要的组成部分。室内质控直接影响到实 验数据的可靠性， 不同批次

19、试剂所测的样本和质控 品的O D值有一定的差异; 不同批次的质控品的结 果也不一样。在更换试剂或质控品的批次时实验结 刁J刁J门esJ气weJ 9自几OA亡 rL厂LLesL厂L 果是处于不稳定状态的， 每次实验都应对结果进行 有效的质控分析。E L I S A试验的影响因素较多， 各 种影响因素均导致结果的不准确， 这样每次实验的 室内质控就显得尤其重要， 只有坚持并正确的对每 次实验进行质控并分析， 并且选用合适自己实验室 的质控方法， 才能确保实验数据的准确性和可靠性。 参考文献 版) M . 北京: 中国 疾病预防控制中心， 2 0 0 4 : 4 1 - 4 5 . 郑怀竞. 免疫学

20、检验室间质评与室内质控 MI . 北京: 北京医科 大学、 中国 协和医 科大学联合出版社， 1 9 9 7 : 3 8 - 6 1 . 赖玉洁. “ 即刻法” 室内质控的局限性 1 1 . 中国输血杂志， 2 0 0 4 , 1 7 ( 6 ) : 4 4 2 . 宋宏先， 张吉才， 郭建华. “ 即刻法” 室内质控存在的问题探讨 D l . 检 验医 学， 2 0 0 4 , 1 9 ( 3 ) : 2 6 9 . 李天君， 赵锋， 田庆华. “ 双质控” 法用于E L I S A试验室内质控 的探讨 i l . 中国输血杂志， 2 0 0 4 , 1 7 ( 6 ) : 4 4 3 .

21、1 中国疾病预防控制中心. 全国艾滋病检测技术规范( 2 0 0 4 年 一 毒 3M 与 水 釜段 全 环嗦酮原药致突变性研究 吕中明， 王丽云， 石根勇， 陈新霞， 凌宝银， 胡启之 (江苏省疾病预防控制中心， 江苏 南京2 1 0 0 0 9 ) 【 文献标识码】 B 中图分类号】 R -3 3 文章编号】 1 0 0 6 -9 0 7 0 ( 2 0 0 6 ) 0 4 -0 0 6 3 -0 3 【关 键 词 】 环嗓酮; 突变; 染色体畸变; 微核 环嗦酮( h e x a z i n o n e ) 原药， 又名林草净， 化学名 为3 一 环已基一 6 - ( 二甲基氨基) -

22、1 一 甲基一 1 , 3 , 5 一 三氮苯 - 2 , 4 - ( 1 H, 3 H ) 一 二酮， 是 1 9 7 6 年由美国杜邦( D u - P o n t ) 公司开发的芽后触杀性除草剂， 主要抑制植物 的光合作用， 使其代谢紊乱致死， 是一种优良的除草 剂， 广泛用于一年生和两年生杂草。为探讨其潜在 危害， 以保护环境及人体健康， 对其进行了致突变性 实验研究。 1 材料与方法 1 . 1 材料环嗓酮原药( 淡黄色结晶， 分子式为 C 1 2 H 2 o N 4 ( ) 2 ) ， 由江苏省某农药公司提供。试验动 物为I C R种小鼠( 体重2 5 - 3 0 g ) ， 由中

23、科院上海实 验动物中心提供。A m e s 菌种T A 9 7 , T A 9 8 , T A 1 0 0 和T A 1 0 2 由上海市疾病预防控制中心提供。 1 . 2 实验方法 根据国家有关标准进行C 1 7 ( 1 ) A m e s 试验: 预培养标准平板掺人法。采用 经鉴定符合要求的T A 9 7 , T A 9 8 , T A 1 0 0 和T A 1 0 2 标准突变型菌株， 用多氯联苯( P C B ) 诱导的大鼠肝 匀浆制备的S9混合液作为代谢活化酶系统， 在加和 不加 易 混合液条件下分别测试。试验设 8 , 4 0 , 2 0 0 , 1 0 0 0 和5 0 0 0

24、m g / 皿 5 个剂量组， 用无菌二甲 亚矾( D MS O ) 溶解。同时设自 发回变( 双蒸水) 和阴 性对照( D MS O) ; 阳性对照组: 2 - 氨基药( 2 - A F , 1 0 mg / 皿) 、 敌克松( D e x o n , 5 0 m g / i ll . ) 、 1 ， 8 一 二经基葱 醒( 5 0 m g / 皿) 。 每个试验浓度均设3 个平行样品， 试验结果以试验样品的回变菌落数超过自发回变菌 落数的2 倍以上， 并呈剂量效应关系( 阳性) 来判定。 ( 2 ) 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验: 健康小 鼠5 0 只， 雌雄各半， 按体重随机分为5 组，

25、 每组 1 0 只， 雌、 雄小鼠3 个剂量组分别为 1 5 0 , 3 0 0 , 6 0 0 和 1 0 0 , 2 0 0 , 4 0 0 m g / k g ， 阴性对照组用玉米油， 阳性对 照组用5 0 m g / k g 的环磷酞胺腹腔注射。按上述剂 量分别灌胃两次， 间隔2 4 h ， 于末次给药后 6h 处死 动物， 常规取骨髓制片， G i e m s a 染色， 油镜下每只动 物镜检1 0 0 0 个嗜多染红细胞， 计算微核率， 数据采 用泊松分布U检验进行统计学处理。 ( 3 ) 小鼠肇丸染色体畸变试验: 健康雄性小鼠 2 5 只， 分为 5 组， 3 个剂量组分别为 1 0 0 , 2 0 0 , 4 0 0 m g / k g ， 连续灌胃5 天， 每天 1 次， 阴性对照组用玉 米油， 阳性对照组用丝裂霉素C ( MMC ) ， 一次腹腔 注射2 . 5 m g / k g ， 于第1 次给药后1 3 天杀鼠。动物 处死前6 h 腹腔注射秋水仙素5 m g / k g 体重， 取肇 丸， 剥除被膜， 拉开曲精细管， 低渗、 固定、 软化、 制 片， G i e m s a 染色， 每只动物观察 1 0 0 个处于终变期 收稿日 期: 2 0 0 6 -0 6 -0 6 作者简介: 吕中明( 1 9 6 9 -) ， 男， 江苏泅阳人， 副主任医师。