HE切片中苏木素沉渣去除方法探讨.pdf

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1、附装置, 以去除血液中的残留MB。 本试验中, 笔者还探索了将金丝桃素和核黄素用作 光敏剂, 来灭活血液中的指标病毒, 其使用浓度分别达 到2 0m o l/L与4 0m o l/L, 是M e r u l e d o和C a b i n 24 等报道的有效使用剂量的1 0倍以上。其对血液中噬菌 体f 2的灭活为1 2个对数级, 与研究者报道的当两种 药物浓度为1m o l/L时可灭活5个对数及以上的H I g 等病毒有差异, 这种差异可能与光敏剂来源、 血液浓度 和照射光源的性质( 波长、 强度) 的差异有关, 将对此做 进一步观察, 以客观评价金丝桃素和核黄素的光化学效 应对血液中病毒的灭

2、活作用。 噬菌体f 2通常被用作试验指标病毒。其培养、 扩 增、 计数方便, 试验周期短, 在病毒灭活方法的初步筛 选阶段将其作为试验病毒是有明显优势的。但从本 试验中可以看到, 噬菌体f 2对光化学效应的抵抗力明 显高于H I g和日本脑炎病毒。因此, 在试验中应当 根据实际应用目标, 引入相关病毒进行试验, 以得到 确切数据。 致谢: ( 本试验得到军事医学科学院全军艾滋病检测中心 李敬云主任及鲍作义老师的大力支持和指导, 特此致谢! ) 参考文献 1 C o r b i nf . P a t h o g e n i n a c t i v a t i o no f b l o o d c

3、 o m p o n e n t s: c u r r e n t s t a t u s a n d i n t r o d u c t i o no f a na p p r o a c hu s i n gr i b o f l a v i na s ap h o t o s e n s i t i z e rJ. I n t JH e m a t o l,2 0 0 2A u g,7 6(2) :2 5 3 -2 5 7 . 2 G o o d r i c hR P. T h e u s e o f r i b o f l a v i n f o r t h e i n a c t i

4、 v a t i o no f p a t h o g e n s i n b l o o dp r o d u c t sJ. g o e S a n g,2 0 0 0,7 8(2) :2 1 1 -2 1 5 . 3 M i s k o v s k yP . H y p e r i c i n -an e wa n t i v i r a l a n da n t i t u m o rp h o t o s e n s i t i z e r: m e c h a n i s mo f a c t i o na n di n t e r a c t i o nw i t hb i o

5、l o g i c a lm a c r o m o l e c u l e sJ. C u r rD r u gT a r g e t s,2 0 0 2,3(1) :5 5 . 4 P r i n c eAM,P a s c u a lD,M e r u e l oD, e ta l . S t r a t e g i e s f o re v a l u a t i o n o fe n v e l o p e dv i r u si n a c t i v a t i o ni nr e dc e l lc o n c e n t r a t e su s i n g h y p e

6、r i c i nJ. P h o t o c h e mP h o t o b i o l . 2 0 0 0f e b,7 1(2) :1 8 8-1 9 5. 5 D e g a rS,L a v i eG,M e r u e l oD. P h o t o d y n a m i c i n a c t i v a t i o no fr a d i a t i o n l e u k e m i av i r u sp r o d u c e df r o mh y p e r i c i n-t r e a t e dc e l l sJ. g i r o l o g y, 1 9

7、 9 3D e c,1 9 7(2) :7 9 6 -8 0 0 . 6 M e r u l e d oD,L a v i eG,L a v i eD,e ta l . T h e r a p e u t i ca g e n t sw i t h d r a m a t i ca n t i r e t r o v i r a la c t i v i t ya n dl i t t l et o e i c i t ya te f f e c t i v e d o s e s:A r o m a t i cp o l y c y c l i c d i o n e s,h y p e r

8、 i c ia n dp s e u d o h y p e r i c i n J. P r oN a t lA c a dS c id S A,1 9 9 8,8 5:5 2 3 0. 7 M o h rH. M e t h y l e n eb l u ea n dt h i o n i n e i np a t h o g e n i n a c t i v a t i o no f p l a s m aa n dp l a t e l e tc o n c e n t r a t e sJ. T r a n s f u s A p h e r e s i sS c i, 2 0 0

9、 1D e c,2 5(3) :1 8 3-1 8 4. 8 H o r n s e yg S,D r u m m o n dO y,Y o u n gD,e ta l . Ap o t e n t i a l l yi m p r o v e d a p p r o a c ht o m e t h y l e n eb l u ev i r u si n a c t i v a t i o no fp l a s m a:t h e M a c o P h a r m aM a c o -T r o n i cs y s t e mJ. T r a n s f u sM e d,2 0 0

10、 1f e b,1 1(1) :3 1 - 3 6 . 9 萨姆布鲁克, 弗里奇, 曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南 M.北京: 科学技术出版社, 1 9 9 6,1 2 7. 1 0 G r i n b e r gL N,R a c h m i l e w i t zE A,N e w m a r kH. P r o t e c t i v ee f f e c t so f r u t i na g a i n s th e m o g l o b i no e i d a t i o nJ. B i o c h e m P h a r m a c o l,1 9 9 4 A u g1 7,4

11、 8(4) :6 4 3 -6 4 9 . 1 1 朱晓薇.贯叶金丝桃研究进展: 药代动力学、 药效学和临 床应用J.国外医药.植物药分册, 1 9 9 8,1 3(5) :2 1 0. 收稿日期: 2 0 0 5-0 6-0 7 HE切片中苏木素沉渣去除方法探讨 狄宝安1, 杨举伦1, 李棠丽1, 李 霞1, 李 涛1, 蔡 琳1, 戴 芳1, 宋蜀伶1 (1.成都军区昆明总医院病理科, 云南 昆明 6 5 0 0 3 2) 摘要 目的: 探讨去除HE染色切片中苏木素沉渣的方法。方法: 采用下列三种方法去除HE染色切片中的苏木素沉渣 并比较其效果: (1) 陈旧苏木素染色液加热至4 0; (

12、2) 滤纸过滤陈旧苏木素染色液; (3) 石蜡切片经1. 0%N a OH浸泡8 m i n、1. 0%N a HC O3浸泡2m i n、2 0 0d/m l糜蛋白酶浸泡8m i n后在陈旧苏木素染色液中染色。此外, 在A B/P A S染色 前和染色后用1. 0%N a OH、1. 0%N a HC O3、2 0 0d/m l糜蛋白酶浸泡切片, 观察该化学处理对粘液染色效果的影响。结 果: 经过1. 0%N a OH、 1. 0%N a HC O3或2 0 0d/m l糜蛋白酶浸泡的切片,HE染色后无苏木素沉渣附着; 陈旧苏木素染 色液加热后染色, 切片中仍有大量苏木素沉渣附着, 过滤后染

13、色则切片中苏木素沉渣消失。在A B/P A S染色后、 苏木素 衬染前1. 0%N a OH、1. 0%N a HC O3或2 0 0d/m l糜蛋白酶处理切片, 粘液区呈强阳性染色;A B/P A S染色前用上述方法 处理切片, 粘液染色强度略有减弱。结论: 陈旧苏木素染色液过滤经1. 0%N a OH、 1. 0%N a HC O3、2 0 0d/m l糜蛋白酶浸 泡均可有效去除HE染色切片中的苏木素沉渣。 关键词 HE染色; 苏木素沉渣;A B/P A S染色 中图分类号 R - 3 6 1. 2 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 4-0 1 8 8(2 0 0 5)0 5-0 4

14、9 5-0 4 E l i m i n a t i o no fh e m a t o x y l i ns e d i m e n t s i nH Es e c t i o n s D IB a o - a n 1,YANGJ u - l u n1,L IT a n g - l i1,L Ih i a1,L IT a o1,C A IL i n1,D A If a n g1, S ONGS h u - l i n g 1 1: D e p a r t m e n t o fP a t h o l o g y, K u n m i n gG e n e r a lH o s p i t a

15、l o fC h e n g d uM i l i t a r yC o mm a n d,K u n m i n g,6 5 0 0 3 2. 594 西南国防医药2 0 0 5年第1 5卷第5期 A b s t r a c t O b j e c t i v e:T oe e p l o r e t h eg o o dm e t h o d so f e l i m i n a t i o no fh e m a t o e y l i ns e d i m e n t s i nHEs e c t i o n s .M e t h o d s:T h r e em e t h o d

16、s a s f o l l o ww e r e e m p l o y e d t oe l i m i n a t e t h eh e m a t o e y l i ns e d i m e n t s i nHEs e c t i o n s:1. O v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns o l u t i o nw a sh e a t e d t o4 0; 2. O v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns o l u t i o nw a s f i l t r a t e db yf i l t e rp

17、 a p e r;3. T h es e c t i o n sw e r em a r i n a t e d i n1% N a OHf o r8m i n,i n2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r1. 0% N a C O 3f o r8m i nf o r 2m i nb e f o r e t h e s t e po f o v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns t a i n i n g . P r e -m a r i n a t e d t h e s e c t i o n s i n1. 0% N

18、 a OH,2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r1. 0% N a HC O 3w e r eu s e df o rA B/P A Ss t a i n,a n dt h es t a i n i n g i n t e n s i t yw a sc o m p a r e dw i t ht h e s e c t i o n sw h i c hh a sm a r i n a t e d i n1. 0% N a OH,2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r 1. 0% N a HC O 3a f t e rA

19、 B/P A Ss t a i n.R e s u l t s:N oh e m a t o e y l i n s e d i m e n tw a ss e e n i n t h eHEs e c t i o n sw h i c hw e r e s t a i n e d i n f i l t r a t e do v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns o l u t i o n,b u t a l o t o f h e m a t o e y l i ns e d i m e n t s w e r ep r e s e n t i nt h

20、 eHEs e c t i o n sw h i c hw e r es t a i n e d i nh e a t e do v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns o l u t i o n. T h e r ew a sa l s on oh e m a t o e y l i ns e d i m e n t i nt h eHEs e c t i o n sw h i c hw e r ep r e-p r o c e s s e di n1. 0% N a OH,2 0 0 d/m lc h y m o t r y p s i no r1. 0%

21、 N a HC O 3.S t r o n g l yp o s i t i v eA B s t a i n i n gw a ss h o w e d i n t h em u c u s a r e ao f t h e s e c t i o n sw h i c hw e r em a r i n a t e d i n1. 0% N a OH,2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r 1. 0% N a HC O 3 a f t e r t h es t e po fA B/P A Ss t a i n i n g .H o w e v e r,t

22、 h ei n t e n s i t yo fA Bs t a i n i n gh a dal i t t l eb i tr e d u c t i o ni nt h o s es e c t i o n sw h i c hw a sp r e- m a r i n a t e di n1. 0% N a OH,2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r 1. 0% N a HC O 3b e f o r e t h e s t e po f o v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns t a i n i n g .C

23、 o n c l u s i o n: f i l t r a t i n go v e r -u s e dh e m a t o e y l i ns o l u t i o no rp r e -m a r i n a t i n gs e c t i o n s i n1. 0% N a OH,2 0 0d/m l c h y m o t r y p s i no r1. 0% N a HC O 3c a n e f f e c t i v e l ye l i m i n a t eh e m a t o e y l i ns e d i m e n t s i nHEs e c t

24、 i o n s . K e yw o r d s:HEs t a i n i n g,h e m a t o e y l i ns e d i m e n t,A B/P A Ss t a i n i n g HE染色是最基本的病理组织学染色, 以其效果 稳定、 色彩艳丽的特点深受病理医生的欢迎。但新鲜 配制的苏木素染色液在使用一段时间后往往有结晶 析出, 在苏木素染色过程中粘附于组织上, 特别是有 粘液的部位, 严重影响病理观察和结果判断。因此, 去除苏木素沉渣是病理技术工作中急待解决的问题。 本文探讨去除HE染色中苏木素沉渣的方法。 1 材料与方法 1. 1 材料 (1) 已使用两个月的

25、陈旧苏木素染色液 5 0 0m l(E h r l i c h苏木素液) ; (2)1. 0% N a OH1 0 0m l; ( 3)1. 0%N a HC O31 0 0m l; (4)2 0 0u/m l糜蛋白酶溶 液8 0m l; ( 5) 正常大肠壁组织、 大肠癌组织、 软骨粘液 纤维瘤组织及胃印戒细胞癌组织的石蜡切片若干张; ( 6) 常规HE及A B/P A S染色的试剂和设备。 1. 2 方法 1. 2. 1 加热溶解苏木素沉渣 将陈旧苏木素染色液 在4 0烤箱中加热至4 0后行常规HE染色, 以未 加热的苏木素染色液为对照。 1. 2. 2 过滤去除苏木素沉渣 将陈旧苏木素染

26、色液 滤纸过滤后行常规HE染色, 以未过滤的苏木素染色 液为对照。 1. 2. 3 化学处理降低组织中粘液的吸附力 上述组 织切片脱蜡水化后分成三组, 分别采用三种方法处 理: ( 1)1. 0%N a OH溶液浸泡8m i n; (2)2 0 0u/m l糜 蛋白酶液浸泡8m i n; ( 3)1. 0%N a HC O3溶液中浸泡2 m i n。处理后的切片用自来水洗23m i n后行HE染 色( 其中苏木素染色在陈旧苏木素染色液中进行) , 以 未经处理的切片为对照。 1. 2. 4 1. 0%N a OH、1. 0%N a HC O3及2 0 0u/m l糜 蛋白酶浸泡对粘液染色的影响

27、 取上述切片三组, 第 一组脱蜡水化后分别在1. 0%N a OH溶液、 2 0 0u/m l 糜蛋白酶液浸泡8m i n, 在1. 0%N a HC O 3溶液中浸泡 2m i n, 自来水洗23m i n后行A B/P A S染色和苏木 素衬染; 第二组在A B/P A S染色后、 苏木素衬染前分 别在1. 0%N a OH溶液、 2 0 0u/m l糜蛋白酶液浸泡8 m i n, 在1. 0%N a HC O3溶液中浸泡2m i n; 第三组为 对照组, 行常规A B/P A S染色, 陈旧苏木素衬染。 2 结果 2. 1 加热、 过滤和组织切片化学处理去除苏木素沉 渣的效果 用陈旧苏木

28、素染色液对正常大肠壁组织、 大肠癌组织、 软骨粘液纤维瘤组织及胃印戒细胞癌组 织的石蜡切片进行HE染色, 可见切片上有粘液的部 位( 腺腔内、 腺上皮及粘膜上皮内、 粘膜表面覆盖的粘 液中、 癌性腺体内、 软骨粘液纤维瘤的粘液区) 出现大 量苏木素沉渣, 而无粘液的部位如大肠的肌层、 肿瘤 的纤维间质内则很少出现苏木素沉渣。沉渣弥漫分 布, 大者掩盖数个细胞, 小者似核分裂像( 图12) 。 陈旧苏木素染色液经4 0加热后对上述切片染 色, 切片上仍有大量苏木素沉渣附着。但用过滤后的 陈旧苏木素染色液染色, 则切片中不出现苏木素沉渣 ( 图3) 。上述切片脱蜡、 水洗后在1. 0%N a OH

29、溶液、 2 0 0u/m l糜蛋白酶溶液或1. 0%N a HC O3溶液中浸 泡后在陈旧苏木素染色液中染色, 切片上也无苏木素 沉渣附着( 图4) 。加热、 过滤和化学切片化学处理去 除苏木素沉渣的效果比未经处理的对照组( 陈旧苏木 素) 的效果好。 2. 2 化学处理组织切片对粘液染色的影响 四种组织 切片常规A B/P A S染色显色, 细胞内和细胞外粘液均呈 强阳性( 亮蓝色) 。上术切片经1 . 0 %N a O H溶液、 糜蛋白 酶溶液或1 . 0 %N a H C O 3溶液浸泡后进行A B /P A S染色 和苏木素衬染, 可见切片中无苏木素沉渣沉着, 但粘液染 色(A B/P

30、 A S染色) 强度略有降低, 由亮蓝色变为浅蓝色。 694 西南国防医药2 0 0 5年第1 5卷第5期 如果切片在A B/P A S染色后再进行1 . 0 %N a O H溶液、 2 0 0u/m l糜蛋白酶溶液或1 . 0 %N a H C O3溶液浸泡和苏 木素衬染, 则粘液呈亮蓝色且无苏木素沉渣附着( 图5) 。 三种化学方法处理组织切片对A B/P A S染色效果明显好 于未经处理的常规染色对照组。 图1 正常肠壁组织陈旧苏木素染色, 在粘膜上皮、 腺上皮、 腺腔及粘膜表面等富于粘液的部分见大量苏木素沉渣, 而 固有层、 粘膜下层等无粘液的区域未见沉渣 HEc1 0 0 图2 软骨

31、粘液纤维瘤陈旧苏木素染色, 在粘液区见大量苏 木素沉渣 HEc1 0 0 图3 正常大肠壁组织陈旧苏木素过滤后染色, 肠壁全层均 无苏木素沉渣 HEc1 0 0 图4 软骨粘液纤维瘤经1. 0%N a OH浸泡后用陈旧苏木 素染色, 未见苏木素沉渣 HEc1 0 0 图5 正常大肠壁组织A B/P A S染色后经1. 0%N a OH浸 泡后行陈旧苏木素衬染, 粘膜区呈亮蓝色, 未见苏木素沉 渣 HEc1 0 0 3 讨论 HE切片中的苏木素沉渣长期困扰着病理医生和 技术员。笔者在会诊中曾发现有的病理医生将切片 中的苏木素沉渣当作病理性分裂而将良性病变误诊 为恶性病变。通常情况下, 制片技术员

32、试图采用更换 苏木素染色液解决这一问题。但苏木素价格很贵, 经 常更换苏木素染色液将增加病理检查成本, 且配制过 程复杂, 费时费力。因此有必要寻找去除HE切片中 苏木素沉渣的方法。 苏木素沉渣来源大致有两种: 一是苏木精在染液 中氧化剂( 氧化汞或磺酸钠) 的强烈氧化作用下形成 金属离子化合物, 在染液表面形成一层反光膜 15; 二 是在媒染剂( 硫酸铝钾或硫酸铝) 作用下形成氢氧化 铝结晶 5。目前文献中报道去除苏木素沉渣的方法 就是针对这两种沉渣形成机制设计的 11 2。通过改 变配方中的氧化剂种类( 氧化汞改用碘酸钠) 或减少 配方中氧化剂的剂量, 以减少表面氧化膜的形成 15; 或是

33、通过减少媒染剂的剂量以减少染液中沉淀的形 成 2,57。本文探讨在不改变染色配方的基础上去除 794 西南国防医药2 0 0 5年第1 5卷第5期 HE切片中苏木素沉渣的方法。 工作中发现, 切片中有粘液的部位及能分泌粘液 的腺体细胞上粘附的苏木素沉渣特别多, 而无粘液的 肌组织、 纤维组织等部位苏木素沉渣很少或没有, 从 而推测苏木素沉渣的数量可能与组织的物理粘附力 有关。如果用化学方法降低组织的粘附力, 可能会避 免苏木素沉渣在切片上沉积。据研究, 组织中的粘液 的主要成分是糖蛋白及粘多糖 1 31 4。粘多糖又分为 酸性、 中性还有混合性粘多糖 1 3。N a OH能破坏组织 中粘液的超

34、微结构降低其粘附力。N a HC O 3可以降 低粘液的吸附力及分泌物的表面张力。本实验结果 显示, 含粘液的切片经1. 0%N a OH浸泡8m i n、 1. 0% N a HC O3浸泡2m i n、2 0 0u/m l糜蛋白酶溶液浸泡8 m i n后再进行HE染色, 均能有效地去除切片上的苏 木素沉渣。为了观察上述化学处理对粘液染色效果 的影响, 本实验分别在A B/P A S染色前和染色后用上 述溶液浸泡切片, 结果发现: 在A B/P A S染色后浸泡 切片, 粘液染色效果不受影响, 而A B/P A S染色前浸 泡切片粘液染色略有降低, 提示,A B/P A S染色过程 中如果用

35、陈旧苏木素衬染, 切片处理应在A B/P A S染 色后、 苏木素衬染前进行。 此外, 本文还探讨了陈旧苏木素染色液加热和过 滤对于去除苏木素沉渣的作用。结果显示, 加热并不 能有效溶解染液中的苏木素结晶, 切片中仍有大量苏 木素沉渣附着, 而滤纸过滤陈旧苏木素染色液可以去 除切片上的苏木素沉渣, 效果与切片经降低粘液粘附 力处理后再进行HE染色相同。但过滤须每天进行, 否则切片中仍有苏木素沉渣出现; 而且每过滤一次, 染色液的体积约减少3 0. 0%, 导致成本增高。 参考文献 1 王美娥, 潘惠娟. H a r r i s苏木素染液配制的改良J.中国 卫生检验杂志, 2 0 0 4,1 4

36、(1) :1 0 7. 2 张橞, 陈云方.哈瑞氏苏木素染液瓣氧化配方及染色效果 观察J.诊断病理学杂志, 1 9 9 8,5(1) :4 7. 3 董金伟.苏木素配法的改进J.诊断病理学杂志,1 9 9 4, 3:1 7 8. 4 骆新兰.氧化剂的量对苏木精染液质量的影响J.临床 与实验病理学杂志, 2 0 0 1,1 7(1) :8 6. 5 周秀荣.介绍一种苏木精新配及染色效果观察J.诊断 病理学杂志, 1 9 9 9,6(3) :1 8 5. 6 杨枫, 魏艳华.介绍一种改良的G i l l苏木素液J.临床与 实验病理学杂志, 1 9 9 9,1 5(3) :2 7 4. 7 李文,

37、张赛霞.常用苏木素几种配方和染色结果的比较 J.解剖学杂志, 2 0 0 0,2 3(4) :3 9 3. 8 袁苏娟, 马恒辉.常规HE染色苏木素液配制改良法J. 现代医药卫生, 2 0 0 4,2 0(1 5) :1 5 2 6. 9 陈 明 涛.微 波 辐 射 新 法 苏 木 素 的 速 染 J.浙 江 肿 瘤, 1 9 9 9,5(3) :1 4 2. 1 0 王群姬.吉尔氏半氧化苏木素配制法改进J.温州医学 院学报, 1 9 9 8,2 8(1) :2 9. 1 1 高长利.半氧化苏木素溶液配制法改良法J.中国医科 大学学报, 1 9 9 8,2 7(2) :2 2 0. 1 2 李

38、继军. H a r r i s苏木精染液配制改良法J.诊断病理学 杂志, 2 0 0 1,8(4) :2 3 9. 1 3 王泊沄, 李玉松, 黄高昇, 等. 病理学技术 M : 第1 版.北京: 人民卫生出版社, 2 0 0 0,1 5 1. 收稿日期: 2 0 0 5-0 3-0 7 受血者输血前检测梅毒抗体结果分析 戴 莹1, 桑胜云1, 王桂华1 (1.成都军区昆明总医院输血科, 云南 昆明 6 5 0 0 3 2) 摘要 目的: 通过分析三种方法(T Rd S T法、E L I S A法、T P HA法) 检测受血者输血前梅毒抗体的结果, 了解各法在临床 应用中的特点, 以提高输血安

39、全系数和减少因输血引起的医疗纠纷和提供可靠的诊疗依据。方法:7 7 3 3份标本中,3 1 0 4 份行T Rd S T法检测, 4 6 2 9份行E L I S A法检测;4 6 2 9份标本中9 8份O D值( 光密度值) 在C O(c u to f f) 值附近的标本再 行E L I S A法双孔复试和T P HA法确证试验。结果:T Rd S T法与E L I S A法检测阳性率差异显著(u =1 1. 4 1,P0 j 0 1) ; E L I S A法与T P HA法两阳性率之间存在显著性差异( x 2=5. 8 1 8 1, P0 j 0 5) 。结论: 有必要采用与献血员体检试剂敏 感性和特异性相同的试剂, 以掌握患者输血前梅毒感染情况; 受血者梅毒抗体的检验方法应采用特异性高、 结果判定客 观的酶联免疫法; 实验室应备两种以上能相互弥补优缺点的特异性抗体检测方法试剂盒, 加强临界值标本复检, 力求结 果准确。 关键词 受血者; 输血; 梅毒 中图分类号 R 3 7 7. 1 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 4-0 1 8 8(2 0 0 5)0 5-0 4 9 8-0 3 894 西南国防医药2 0 0 5年第1 5卷第5期

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