DNA分子标记在实验动物遗传分析中的应用.pdf

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1、2 0 0 8 年l O 月 第1 8 卷第1 0 期 中国比较医学杂志 C H I N E S EJ O U R N A LO FC O M P A R A T I V EM E D I C I N E O c t o b e r 2 0 明 V 0 1 1 8N o 1 0 席t 目情畸e 鸭 g 综述与专论g 谭斗；奢盼、e 分、! ；爷亡石、凹 D N A 分子标记在实验动物遗传分析中的应用 陈丙波，张聪，王根，黄戎娟 ( 第三军医大学实验动物中心，重庆4 0 0 0 3 8 ) 【摘要】D N A 分子标记技术很多基本都是建立在R F L P 、P C R 和重复顺序的基础上的。本文

2、重点介绍了限制 性片段长度多态性( a r l J P ) 标记、随机扩增多态性D N A ( R A P D ) 标记、微卫星D N A ( S 1 R ) 标记、D N A 指纹( D F P ) 标记、扩 增片段长度多态性( A F L P ) 标记等几种重要的D N A 分子标记技术的定义、结构、分布、组成、保守性、优点及丰富的 多态性等。并重点介绍了微卫星D N A ( 铘) 标记在分子遗传监测、遗传多样性分析和遗传血缘关系及个体识别等 领域的应甩。 【关键词】D N A 标记；遗传；实验动物 【中图分类号】R 3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 1 7 8 5 6 1 2

3、 0 0 8 ) 1 0 0 0 7 0 - 0 5 A p p l i c a t i o no fD N AM a r k e r sf o rG e n e t i cA n a l y s i si nL a b o r a t o r yA n i m a l s C H E NB i n g b o 。Z H A N GC o n g 。W A N GG e n ，H U A N GR o n g - j u a n ( L a b o r a t o r yA n i m a lC e n t e r ，T h eT h i r dM i l i t a r yM e d i c

4、 a lU n i v e r s i t y ，C h o n g Q i n g4 0 0 0 3 8 ，C h i n a ) I A b s t r a c t 】 M o s tD N Al 瑚t r k e r $ mb a s e do nr e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m s ( R F L P ) ，p o ly m e r a s ec h a i n r e a c t i o n ( P C R ) a n ds e q u e n c er e p e a t T

5、 h i sp a p e ri n t r o d u c e dd e f i n i t i o n ，s t r u c t u r e ，d i s t r i b u t i o n s ，c o m p o s i t i o n ，c o n s e r v a t i o n ， a d v a n t a g ea n dp o l y m o r p h i s mo fR F L P ( r e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m s ) 。r a n d o ma m p

6、 l i f i e dp o l y m o r p h i s mD N A ( R A P D ) ； s h o r tt a n d e mr e p e a t ( S T B ) ，D N Af i n g e r p r i n t i n g ( D F P ) 。a n da m p l i f i e df r a g m e n t l e n g t hp o l y m o r p h i s m ( A F L P ) 。a n da l s o i n t r o d u c e da p p l i c a t i o n s0 fS T Ri ng e n

7、e t i cd e t e c t i o n ，g e n e t i cp o l y m o r p h i ca n a l y s i s ，b l o o dr e l a t i o n s h i pa n a l y s i s IK e yw o r d s 】D N A ；G e n e t i c ；L a b o r a t o r yA n i m a l s 作为易于识别的基因型表现形式，遗传标记在 动物种质资源的研究和育种工作中有着十分重要的 地位。目前，应用较为广泛的遗传标记有形态标记、 细胞标记、生化标记和分子标记。形态标记指动物 的外部特征，细胞标记主要

8、是染色体的核型和带型， 生化标记主要包括同工酶和贮藏蛋白。这3 种标记 都是基因表达的结果，是对基因的间接反映，标记数 目有限，多态性较差，易受环境条件的影响。而 D N A 分子标记是直接在D N A 分子上检测生物间的 差异。是在D N A 水平上遗传变异的直接反映。D N A 分子标记能对不同发育时期的个体、任何组织器官 甚至细胞作检测，数量极多，遍及整个基因组，多态 性高，遗传稳定，不受环境及基因表达与否的限制。 D N A 分子标记从它诞生之日起，就引起了生物学家 极大的兴趣，现已广泛应用于基因标记、遗传连锁分 析、构建遗传图谱、遗传疾病的诊断、法医学鉴定、亲 缘关系和物种的鉴定以及

9、动植物的遗传育种研究 中【卜1 3 。在经历了短短几十年的迅猛发展后，分子 标记技术日趋成熟。现已出现的D N A 分子标记技 术有几十种，基本都是建立在R F L P 、P C R 和重复顺 序的基础上的。下面就几种重要的D N A 分子标记 技术以及微卫星D N A 标记技术在实验动物遗传研 究中的应用加以介绍。 1D N A 分子标记技术 1 1 限制性片段长度多态性( R F L P ) 标记 【通讯作者】陈丙波( 1 9 6 4 - ) ，男。教授硕士导师，研究方向：D N A 分子多态标记。电话：0 2 3 - 6 8 7 5 2 0 5 2 。 万方数据 中国比较医学杂志2 0

10、0 8 年I O 月第1 8 卷第1 0 期C h i nJC o m pM e d ，O c t o b e r2 0 0 8 V 0 1 1 8 N o 1 0 7 1 限制性片段长度多态性( r e s t r i c t i o nf r a g m e n t l e n g t hp o l y m o r p h i s m s ，R F L P ) 标记是2 0 世纪8 0 年代初 发展起来的第一代分子标记技术( B o t s t e i n ，e ta 1 ， 1 9 8 0 ) 。它利用限制性内切酶可以识别并催化裂解 基因组内某些特异D N A 序列的原理，来检测基因组

11、内特定D N A 片段的差异，这种差异反映了生物基因 水平上的变异。R F L P 标记的数目多呈孟德尔式遗 传，非等位基因的R F L P 之间互不干扰，大多数 R F L P 标记在任何分离群体中都能区分纯合基因型 与杂合基因型。R F L P 技术是一种能够有效检测 D N A 多态性的分子生物技术，R F L P 检测的是基因 组D N A 经限制性内切酶酶切后形成D N A 片段的多 态性。因此在研究群体遗传与系统演化等领域中应 用较多。 R F L P 是第一代分子标记技术，在遗传分析中得 到了广泛应用。训，与传统的遗传标记相比，R F L P 标记具有下列优点：( 1 ) R F

12、 L P 标记无表型效应，其检 测不受外界条件、性别及发育阶段的影响；( 2 ) R F L P 标记等位基因间是共显性的，非等位基因间不存在 上位效应，互不干扰；( 3 ) R F L P 起源于基因组D N A 的自然变异，这些变异在数量上几乎不受限制，可以 选取足够数量能代表整个基因组的R F L P 标记。 R F L P 标记也有其自身的不足，R F L P 与内切酶 的选用密切相关，只能选用一定的内切酶，某个位点 才可能表现出多态性；而且它不能检测出酶切后相 同长度D N A 片段内的碱基变异另外，多态性检出 率低，用放射性标记的探针进行分子杂交，不但程序 复杂繁琐，而且放射性对人

13、体有害- 。 1 2 随机扩增多态性D N A ( R A P D ) 标记 R A P D 技术是1 9 9 0 年发明发展起来的。它以 P C R 技术为背景，以人工合成的碱基顺序随机排列 的寡核苷酸单链为引物，对所研究的基因组D N A 进 行聚合酶链式反应( p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，P C R ) 扩增，产生多态性的R A P D 片段，这些扩增片段的多 态性反映了基因组相应区域的多态性阻“引。R A P D 检测分为个体D N A 和池D N A 两种方法，个体间 R A P D 分析能够反映出个体间和群体内的遗传变异

14、 程度，而池D N A 法则重点突出群体间遗传差异。 R A P D 标记与其它分子标记相比，其优点主要 表现在：第一，R A P D 技术可以在对物种缺乏分子生 物学研究资料的情况下，对其进行D N A 多态性分 析；第二，R A P D 引物可用于不同生物基因组多态性 的研究因此，R A P D 引物可以在规模生产形成商 品，这大大降低了研究费用第三，R A P D 技术以一 系列随机引物对基因组进行检测，因而能检测多个 基因位点，覆盖率比较大，并且引物越多，覆盖面越 广，遗传信息也随之增加，因此R A P D 多态信息含量 ( P I G ) 值波动较大，在0 2 珈9 之间；第四，R

15、A P D 技 术操作快速、简便，不依赖基因组遗传信息，因此在 遗传研究中被广泛使用。 R A P D 标记也有不足的一面。首先是显性遗 传，不能识别杂合子位点，这使得遗传分析相对复 杂；其次，由于随机引物较短，因而对一些P C R 因素 更敏感，重复性较差。一般来说，对于特定的仪器设 备，对其反应条件反复进行优化，可以得到较可靠的 结果1 川。 1 3 微卫星D N A 【S T R ) 标记 S T R 标记( s h o r tt a n d e mr e p e a t ) 又称简单重复序 列( s i m p l es e q u e n c er e p e a t ，S S R

16、) ，是指以少数几个核 苷酸( 1 。6 个，多数为2 。4 个) 为单位多次串联重 复的D N A 序列。这种序列存在于几乎所有真核生 物的基因组中，且呈随机均匀分布。它的本体的拷 贝数在物种间，甚至种内不同个体间存在高度变异 而具有长度多态性。微卫星D N A 作为一种遗传标 记，与其他分子标记相比，具有如下优点：( 1 ) 微卫星 D N A 数量多且均匀分布在大多数真核生物的基因 组中。据估计，真核生物平均每5 0 - - 1 5 0 k b 就存在 一个微卫星位点。它的这一特点为整个基因组中定 位更多的基因提供了极大的方便，这是其他方法所 远远不及的。( 2 ) 微卫星D N A 具

17、有丰富的多态性。 微卫星D N A 标记由核心序列和两侧保守的侧冀序 列构成。保守的侧翼序列使微卫星特异地定位于染 色体某一区域，核心序列重复数的差异则形成微卫 星的高度多态性。这种多态性的信息量( P I G ) 是比 较丰富的，一般在0 7 以上。( 3 ) 微卫星D N A 标记 易于检测。一般来说，微卫星D N A 的长度为2 0 0b p 左右，这就很容易进行P C R 扩增，P C R 扩增的高度 灵敏性、高度特异性及操作简便省时使微卫星标记 的检测十分方便，而且准确。( 4 ) 微卫星D N A 标记 具有保守性。微卫星D N A 标记在哺乳动物物种间， 特别是一些紧密相关的物种

18、如牛与羊、马属动物以 及鸡与火鸡间具有一定程度的保守性。( 5 ) 微卫星 D N A 标记呈共显性遗传。微卫星D N A 标记的等位 基因遵循盂德尔遗传规律，能够稳定地从上一代传 给下一代，并且等位基因间呈共显性遗传。因此从 子代可追寻亲代的等位基因，并易于区分纯合型与 万方数据 7 2 中国比较医学杂志2 0 0 8 年l O 月第1 8 卷第1 0 期 C h i nJC o m pM e d 。O c t o b e r2 0 0 8 ，V 0 1 1 8 N o 1 0 杂合型。 当然微卫星D N A 生物技术也有其缺点，即微卫 星标记的获得要建立、筛选基因组文件和克隆、测 序，实验

19、工作量比较大、费时。但是，由于侧翼序列 的保守性，可选用近缘物种的微卫星标记，另一方 面，可通过G e n b a n k 在有关基因序列中寻找微卫星 标记引。 1 4D N A 指纹( D F P ) 标记 D N A 指纹技术( D N Af i n g e r p r i n t i n g ) 是利用微卫 星D N A 作探针，探测不同生物的卫星区，产生相应 的D N A 指纹图谱的杂交方法。在8 0 年代，人类遗 传学家发现，在人体基因组中含有许多分散的具有 串联重复单位的小卫星( m i n i s a t e l l i t e ) ，一般含1 1 6 0 个碱基对，由于重复单位

20、的数字不同和重复拷贝 数的等位性不同，使其表现出高度多态性。J e f f e r y s 等( 1 9 9 1 ) 发现，同一家族的小卫星位点的基本序列 单位，都含有一个1 1 。1 6 个碱基对的相同核心序列 ( c o r es e q u e n c e ) ，由核心序列串联重复构成的人源小 卫星探针，可以同时与众多的基因组的酶切D N A 片 段杂交，得到具有个体特异性的D N A 图谱。不同生 物、同一生物的不同品种，甚至同一品种的不同个 体，其所含小卫星各异，杂交产生的D N A 图谱各不 相同，就象人的指纹一样，所以，把这种具有个体特 征和种属特性的D N A 图谱称之为D N

21、 A 指纹图谱。 D N A 指纹图具有高度的特异性，不同个体或群体有 不同的D N A 指纹图H 。7J 。 D N A 指纹技术的一般过程是：6 5D N A 用限制性 内切酶消化，电泳分离，再转移至膜，用小卫星、微卫 星或合成的寡核昔酸探针以及其他探针予以探测， 形成个体特异性杂交图谱 D N A 指纹具有以下特点：( 1 ) 简单的遗传方式。 D N A 指纹图中的图带可以遗传，这不同于人的指 纹。D N A 指纹图带遵循简单的孟德尔遗传方式。 后代图中的每一条带都可以在双亲之一的图中找 到，除非是因为基因突变而产生个别新带。( 2 ) 体细 胞稳定性。从大量的研究中发现，D N A

22、指纹图带能 够稳定的从上一代传给下一代，子代D N A 指纹图中 的每一条图带均能在双亲的图带中找到，完全符合 孟德尔遗传规律。D N A 指纹图还具有体细胞稳定 性，即从同一个体中不同组织如血液、精液、毛发、肌 肉等产生的D N A 指纹图完全一致。D N A 指纹是分 子水平上进行的检测，其分析结果不受环境和发育 阶段的影响，同一个体的不同组织( 无病变) 、不同年 龄阶段产生的D N A 指纹图完全相同归一引。( 3 ) 多位 点性。由于基因组中存在着上千个小卫星位点，某 些位点的重复单位含有相同或相似的核心序列，在 一定的杂交条件下，一个小卫星探针可以同时与多 个小卫星位点上的等位基因

23、杂交，产生1 0 。2 0 多条 带，每条可分辨的带代表个位点。而一个常规探 针所产生的图谱一般由1 2 条带组成，仅代表一个 位点。可见，D N A 指纹图能够更全面的反映基因组 的变异性怕圳。( 4 ) 高度变异性。D N A 指纹图的变 异性主要取决于两个因素，一是可分辨的图带数；二 是各条图带在群体中出现的频率。倪锦堂( 1 9 9 2 ) 对 1 5 0 个无关个体的D N A 指纹图分析表明两个个体图 谱具有相同的概率为3 、7 1 0 。1 4 ，可见D N A 指纹图 具有高度的个体特异性1 2 圳。( 5 ) 一定的物种特异 性和个体识别性。同一探针在不同的种( 品种) 动物

24、 上产生的D N A 指纹图，在带数、带的深浅和分布上 具有不同特点。用不同的探针获得同一个体的 D N A 指纹图有很大差异，其信息量可以累加“j 。 1 5 扩增片段长度多态性( A F L P ) 标记 扩增片段长度多态性( a m p l i f i e df r a g m e n tl e n g t h p o l y m o r p h i s m ，A F L P ) 是在P C R 和R F L P 的基础上发 展起来的新一代分子标记技术。包括三个步骤：( 1 ) D N A 被限制性内切酶切割，然后与A F L P 接头 ( a d a p t e r ) 连接；( 2

25、) 利用P C R 方法，通过变性、退火、 延伸循环，选择性扩增成套的限制性片段，经过多次 循环，可使目的序列扩增到0 5 ，1 弘g ；( 3 ) 利用聚丙 烯酰胺凝胶电泳分离扩增的D N A 片段。 A F L P 兼有R F L P 和R A P D 两者的优点，被认为 是迄今为止最有效的分子标记怛。6 】。它既克服了 R F L P 技术复杂，R A P D 稳定性差、标记呈等显性遗 传的缺点，同时又兼有二者之长，具有分辨率高、稳 定性好、高效率和高灵敏度等优点。其优点主要表 现在( 1 ) A F I _ P 具有R A P D 检测D N A 的多态性非常 高效的优点，可在短期内获

26、得大量的多态性D N A 片 段，在典型的A F L P 反应中，利用聚丙烯酰胺凝胶电 泳一次可检测1 0 0 1 5 0 个扩增产物；( 2 ) A F L P 具有 R F L P 检测可靠的优点，限制性内切酶识别序列专一 性决定了检测的可靠性。在A F L P 和R F L P 技术中。 由于采用的限制性内切酶及选择碱基的种类、数目 有很多，在理论上，A F L P 标记数目是无限的；( 3 ) A F L P 可分析不同复杂程度的基因组D N A ，且不需预 知基因序列特征，检出的多态位点可以覆盖整个基 因组D N A ，又可以分析克隆D N A 大片段；( 4 ) A F L P 万

27、方数据 中国比较医学杂志2 0 0 8 年1 0 月第1 8 卷第l O 期C h i nJc pM e d 。o c t o b e r2 0 0 8 V d 1 8 N o 1 07 3 技术不需要制备探针进行分子杂交，操作简单，易于 标准化和自动化；( 5 ) A F L P 标记呈典型的孟德尔方 式遗传，可作为物理图谱和遗传图谱的联系桥梁，用 于构建基因组的高密度连锁图谱；( 6 ) A F L P 对模板 浓度不敏感，允许一定程度的共扩增；( 7 ) R F L P 可以 进行定量分析，也可作为等显性标记。 2 微卫星标记在实验动物遗传分析中的应用 2 1 分子遗传监测 在传统的遗传

28、监测方法中，形态学标记是利用 外部形态，即利用表现型来进行检测，但表现型易受 外界环境因素的影响；细胞学标记大多数情况下都 要求对细胞进行培育，并进一步制备染色体而且此 类标记数目相对较少。免疫学标记仅能测定一个近 交系是否具备同源性，无法确定基因的纯合性；生化 标记信息含量低，根据某些生物化学标记，诸如同工 酶所进行的遗传检测分析，只能检测编码区的基因 座位，且该方法受现在酶电泳和染色方法所限。微 卫星D N A 多态性标记是选择该位点两侧的侧翼序 列为引物，进行锚定P C R 扩增，重复性高，可比性 强。在D N A 水平上，利用D N A 多态性测定品种或 品系间差异，要比其他标记更稳定

29、，不易受外界因素 干扰，能准确、客观地反映遗传差异。因此，微卫星 D N A 多态性标记在遗传监测方面是较理想的方法。 多态性标记，在实践中一方面监测是否发生遗传污 染，另一方面可以同时确定样本的品系。目前在利 用微卫星D N A 多态性标记进行遗传监测方面的研 究常见报道。欧阳兆和等1 选用我国常用的1 0 个 品系的近交系小鼠B A L B c 、C 5 7 B U6 J 、A M M S P I 、 C 3 H ，H e 、D B A P 2 N 、1 2 9 P s v 、F v B P N 、6 1 5 、T A I 、T A 2 。 筛选的1 6 对微卫星引物( 位点名称为：D 1

30、 M i t 3 6 5 、 D 2 M i t 3 0 、D 3 M i t 5 1 、D 4 M i t 2 3 5 、D 5 M i t 4 8 、D 6 M i t l 0 2 、 D 7 M i t 2 8 1 ，D 8 M i t l l 3 ，D 9 M i t 2 3 ，D I O M i t l 8 0 ，D 1 1 M i t l 2 8 ， D 1 2 M i t l 4 7 、D 1 3M i t 8 8 、D 1 4 M i t l 0 2 、D 1 5 M i t 5 、 D 1 7 M i t 3 6 ) 进行了D N A 多态性分析，并与目前常规 应用的生化标记

31、分析法进行了比较。除了 D 8 M i t l l 3 、D 1 3M i t 8 8 外，其余1 4 对引物均具有稳定 扩增效果，同一品系内电泳带型一致，表明所检测的 小鼠在研究位点上表现为纯合，遗传背景均一，没有 发生遗传污染或遗传变异，这与生化位点检测结果 一致。1 4 个位点在不同品系之间具有显著多态性 ( 等位基因数目为2 5 个) ，并能特异地反映出l O 个近交系小鼠的品系特性，可作为近交系小鼠遗传 监测的微卫星位点，用于常规检测小鼠品系遗传质 量和背景分析等。陈振文等旧币J 为了解和掌握国 内B A L B c 小鼠遗传质量状况。验证微卫星标记技 术在近交系小鼠遗传检测中应用的

32、可靠性，应用所 筛选的小鼠不同染色体上的1 4 个微卫星基因座，通 过P C R 扩增对全国7 个地区1 1 个B A L B c 小鼠群 体进行遗传质量分析。结果7 个B A L B c 小鼠群体 在1 4 个基因座均呈现一条清晰条带，且群体间呈单 态性。4 个群体有8 个基因座在群体内表现杂合或 呈多态性，从而了解了我国B A L B C 小鼠的遗传状 况。牛荣等刮采用l O 对微卫星引物对B A L B ， C 2 n u 2 n u 、D B M2 、S C I D 、W 3 9 、T A 2 、6 1 5 六种近交系 小鼠进行遗传监测，试图寻找相关品系遗传监测的 基因位点和应用于实际

33、监测。除1 个位点表现为单 态性外，其余9 个微卫星位点均表现出多态性。其 中D 2 M i t 3 、D 3 M i t l 5 、D 3 M i t l 7 、D 3 M i t l 8 等4 个位点多 态性显著，这4 个位点适宜用于小鼠遗传监测。说 明微卫星D N A 多态性标记适用于近交系小鼠遗传 监测，有助于遗传监测从表现型过渡到D N A 水平。 随着不同实验动物染色体高密度微卫星标记图谱的 构建，以及实验技术的改进，统计方法的完善，微卫 星标记将会在实验动物学研究领域获得更广泛的应 用。 2 2 遗传多样性分析 实验动物遗传多样性一般指品种内个体在 D N A 水平上的差异。利用

34、微卫星标记，检测个体基 因型，统计群体中的微卫星位点等位基因的数目和 频率，结合分子遗传学和数量分类学原理，计算各个 品种的遗传变异程度、生存稳定性，初步评估品种的 遗传多样性及品种间的亲缘关系与分化关系。李瑞 生等 2 采用微卫星D N A 技术，对S H R 、S H R S P 、 W K Y 、F 3 4 4 、R C S 、L EW 等6 个近交系大鼠群体进行 D N A 多态性分析，结果不同品系个体之间具有显著 多态性，同一群体不同个体之间均未差异；对1 0 个 位点的相似系数进行统计，结果S H R 与S H R S P 、S H R 和F 3 4 4 间相似系数较高为0 7 0

35、 8 ，而W K Y 与 L E W 、F 3 4 4 间及L E w 与R C S 间的相似系数较低为 0 1 。 李亮等纠对四川地方乌骨鸡5 个群体的遗传 多样性进行了检测，发现四川5 个乌骨鸡群体遗传 多样性比较丰富，群体平均杂合度为0 5 3 8 到 0 6 6 5 ，5 个群体间的遗传距离有一定的差异。R i m 等旧1 推荐在家禽或家畜品种资源分类、遗传多样性 评估和保存时使用微卫星。N d 等还提出利用微卫 万方数据 7 4 中国比较医学杂志2 0 0 8 年l O 月第1 8 卷第1 0 期C h i nJC o m pM e d O c t o b e r2 0 0 8 ，V

36、 0 1 1 8 N o 1 0 星位点重构系统发生树。这些均是应用微卫星位点 的多态性及高突变率测定群体间的遗传相关性。樊 斌等引用2 7 个微卫星基因座测得湖北省3 个主要 地方猪种通城猪、清平猪和阳新猪的平均P I C ( 多态 信息含量) 分别为0 7 49 、0 6 9 8 、0 6 2 7 ，这可能和3 种小型猪的近交程度较高有关。杨澜利用5 对牛微 卫星引物和1 0 对绵羊微卫星引物分析了5 个中国 地方山羊品种的遗传多样性川。 2 3 遗传血缘关系及个体识别 在实验动物育种中必须搞清楚实验动物的亲子 关系，这样才能利于根据亲属信息准确选留个体并 能按照要求进行生产。现在可借助多

37、个微卫星标记 位点在群体中的等位基因频率，通过计算排除率 ( e x c l u s i o np r o b a b i l i t y ) 便可进行亲子鉴定和血缘控 制。宋国华等”。( 1 9 9 6 ) 用5 个微卫星位点多态性研 究家鸡品种的遗传结构和亲缘关系发现：微卫星位 点的基因频率能反映品种间的特异性。M a r t i n e z 等3o 通过对4 个微卫星位点的检测，分析C a u c a s i a n 白种人不同人群的遗传差别。E l y 通过对5 个微卫 星位点的检测，研究了人与猩猩的遗传距离。微卫 星D N A 标记可区分出纯合子和杂合子。如某一个 体染色体对的相对性

38、位点上两侧序列间所包含的微 卫星重复单位数相同，则个体在该位点上的基因型 是纯合的；若微卫星重复单位数不同则表现为杂合 基因型。以微卫星的侧翼序列为引物进行P C R 扩 增，然后用聚丙烯酰胺凝胶分离P C R 产物，纯合型 表现为一条带，杂合型表现为两条带。T a s c o n 等2 】 研究表明，组合使用5 个微卫星位点( 每个位点有6 个以上的等位基因) 时排除率为9 8 ，而使用1 0 个 这样的微卫星时排除率可高达9 9 9 9 。 参考文献： 1 】霍金龙，张娟，罗古月微卫星D N A 标记技术及其在猪近交 系遗传检测中的应用前景 J 动物医学进展，2 0 0 4 ，2 5 (

39、6 ) ： 5 9 6 1 【2 李瑞生，陈振文，欧阳兆和。等近交系大鼠D N A 指纹图和徼 卫星D N A 多态性的分析 J 实验动物科学与管理2 0 0 3 2 0 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 ( 2 ) ：1 3 9 1 3 1 欧阳兆和陈振文，李瑞生。等微卫星D N A 多态性在十种 近交系小鼠遗传监测中的应用研究 J 中国比较医学杂志， 2 0 0 4 ，1 4 ( 2 ) ：7 1 7 3 徐其放。刘运忠，朱世杰徽卫星座位对实验动物b e a g l e 犬 的遗传分析 J 中国实验动物学报，2 0 0 6 ，1 4 ( I

40、 ) ：2 7 3 1 宋国华，刘田福，张建红徽卫星D N A 分子标记及其在实验 动物遗传分析中的应用 J 山西医科大学学报2 0 0 4 ，3 5 ( 4 ) ： 3 8 1 3 8 3 陈振文。欧阳兆和。董罡，等用微卫星标记技术对国内 B A L B e 小鼠遗传质量的分析 J 遗传，2 0 0 4 ，2 6 ( 6 ) ：8 4 5 8 4 8 刘荣宗。康梦松近交系实验动物遗传质量监测之遗传标记 类型的探讨 J 遗传，1 9 9 5 ，1 7 ( 增刊) ：6 0 6 2 S e h n a h e lR D ，W a r dT J ，D e r rJ N V a l i d a t

41、i o no f1 5m i c r a t e l l i t e sf o r p a r e n t a g et e s t i n gi nN o r t hA I n e n c a nb i s o n ，B i s o nb i s o na n dd o m e s t i c c 矗t d e 1 A n i m a lG e n e t i c s 2 0 0 0 ，3 1 ：3 6 0 3 6 1 R i t zL R G l o w a t z k iM L 。M H u g I lD E P h y l o g e n e t i ca n a l y s i so

42、 ft h e t r i b eB o v i n iu s i n gm i a n 眦n i t 【JJ A n i m a lG e n e t i c s ，2 0 0 0 ，3 1 ： 1 7 8 一l 驺 张文艳，龚春梅，魏云林，等一种新的近交系实验动物遗 传监测方法及小鼠性别相关R A P D 标记的发现 J 中国实验 动物学报。1 9 9 6 ，2 9 ( 1 ) ：5 9 6 9 李瑞生，陈振文，宋德光，等P C R 扩增近交系大鼠微卫星位 点D N A 多态性的研究 J 遗传。2 0 0 1 ，2 3 ( 6 ) ：5 3 9 5 4 3 T a s e o nC D 。

43、L i t t l e j o h nl i P A l m e i d aA R ，e ta 1 G e n e t i cv a r i a t i o n w i t h i nt h eM e r i n os h e e pb r e e d ：a n a l y s i so fe h m e l yr e l a t e dp o p u l a t i o n s u s i n gm i c r o s a t e l l i t e s J A n i m a lG e n e t i c s ，2 0 0 0 ，3 1 ：2 4 3 2 5 1 r t i l l e g

44、A M ，D e l g a d oJ v ，R o d e rA G e n e t i cs t n l e t u r e0 ft h e I n h e r e i a np i sb r e e du s i n gm l c r o s a t e l l i t e s J A n i m a lG e n e t i c s ， 2 0 0 0 。3 1 ：2 9 5 3 0 1 牛荣，商海涛，魏泓，等版纳小耳猪近交系5 家系3 5 个微 卫星座位的遗传分析 J 遗传学报，2 0 0 1 ，2 8 ( 6 ) ：5 1 8 5 2 6 李亮，朱庆四川地方乌骨鸡种群遗传变异的卫星D N A 分析 J 四川畜牧兽医。2 0 0 2 ，2 9 ( 8 ) ：2 6 2 9 樊斌，李奎，彭中镇，等湖北省三品种猪2 7 个徽卫星位点 的遗传变异 J 生物多样性，1 9 9 9 ，7 ( 2 ) ：9 1 9 7 杨澜利用微卫星标记分析五个中国地方山羊品种的遗传多 样性 J 华中农业大学畜牧兽医学报，1 9 9 9 6 6 6 8 ( 修回日期伽o s - o s - o l 万方数据