《HEPAH和HEPAL肝癌荷瘤小鼠CD8CD28T细胞和肿瘤新生淋巴管的研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HEPAH和HEPAL肝癌荷瘤小鼠CD8CD28T细胞和肿瘤新生淋巴管的研究.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、收稿日期: 2 0 0 5 - 0 1 - 2 1 基金 项 目:浙 江 省 教 育 厅 资 助 项 目(编 号: 4 1 9 1 5 3 - G2 0 3 8 3 ) 作者简介:杨泽然( 1 9 6 6 - ) ,男,江西九江人,浙江大学细 胞生物学研究所副教授,博士生,从事肿瘤病理和细胞衰老 研究. *通讯作者 He p A - H和He p A - L肝癌荷瘤小鼠C D 8 +/ C D 2 8 +T细胞和肿瘤新生淋巴管的研究 杨泽然1,金秀国2,李继承1 * ( 1 .浙江大学细胞生物学研究所,浙江 杭州3 1 0 0 3 1 ; 2 .舟山人民医院,浙江 舟山3 1 6 0 0 0
2、) 摘要:目的研究不同淋巴转移潜能肝癌( He p A- H和He p A- L )荷瘤小鼠体内C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细胞和肿 瘤新生淋巴管,探讨与肿瘤淋巴转移的关系。方法用两种来源相同,而淋巴转移能力不同的小鼠肝癌细胞亚系, He p A- H(高淋巴转移)和He p A- L (低淋巴转移) ,小鼠皮下接种,制备荷瘤动物模型。采用抗小鼠C D 8 、 C D 2 8荧光标 记单克隆抗体,流式细胞术定量检测小鼠外周血和肿瘤组织内C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细胞数量; 应用5 -核苷酸酶-碱 性磷酸酶双重组化染色法,观察肿瘤新生淋巴管。结果肿瘤皮下接种后1 4天,
3、 He p A- H组荷瘤小鼠外周血C D 8 +/ C D 2 8 +T淋巴细胞数量明显低于正常对照组( P 0 . 0 5 ) 。He p A- H组 肿 瘤 组 织 内 C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细胞数量明显低于 He p A- L组 ( P0 . 0 5 ) (表1 ,图1 ) 。 表1两种细胞系荷瘤小鼠外周血和肿瘤组织内 C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细数量比较 细胞鼠数 C D 2 8 +/ C D 8+T淋巴细胞( %) 外周血肿瘤组织内 He p A- H65 . 8 5 2 . 7 0 * 2 . 4 2 1 . 0 6 * He p A- L68 .
4、 2 5 3 . 5 65 . 3 8 2 . 1 5 对照组 69 . 8 9 1 . 2 1- *He p A- H与对照组比较, P0 . 0 5 ;*He p A- H与 He p A- L比 较, P 0 . 0 5 2 . 2 两种肝癌亚系肿瘤组织新生淋巴管两种细 胞亚系均可诱导肿瘤内新生淋巴管(图2 a ) 。He p A- H肿瘤内最高淋巴管密度为( 3 1 . 3 6 4 . 9 1 ) / 2 0 0 视 图1 a He p A- H外周血, C D 8 +/ C D 2 8 +细胞 5 . 4 % 图1 b He p A- L外周血, C D 8 +/ C D 2 8 +
5、细胞 8 . 6 % 图1 c对照组外周血, C D 8 +/ C D 2 8 +细胞 9 . 4 % 图1 d He p A- H肿瘤组织, C D 8 +/ C D 2 8 +细胞 1 . 9 % 图1 e He p A- L肿瘤组织, C D 8 +/ C D 2 8 +细胞 5 . 2 % 野,而He p A- L为( 2 0 . 4 3 4 . 9 5 ) / 2 0 0视野,两者间 差异具有显著性( P0 . 0 1 ) 。肿瘤周围也可见淋巴 管(图2 b ) ; He p A- H肿瘤周围最高淋巴管密度为 ( 1 4 . 5 0 1 . 5 1 ) / 2 0 0视野,而He p
6、 A- L为( 1 1 . 3 3 1 . 8 6 ) / 2 0 0视野,两者差异具有显著性( P0 . 0 1 ,表 2 ) 。HE染色可见肿瘤周围淋巴管内瘤栓( He p A- H 组) (图3 ) 。 表2两种细胞亚系荷瘤小鼠肿瘤内淋巴管数量比较 细胞 鼠数 (只) 淋巴管数量( x - s ) 肿瘤组织内肿瘤周围组织 He p A- H63 1 . 3 6 4 . 9 1 * 1 4 . 5 0 1 . 5 1 * He p A- L62 0 . 4 3 4 . 9 51 1 . 3 3 1 . 8 6 *与He p A- L比较, P 0 . 0 1 3 讨论 研究表明,肿瘤对宿主
7、细胞免疫功能具有抑制 作用。尽管肿瘤细胞表达特异性抗原,但绝大多数肿 瘤宿主的免疫系统无法有效地清除肿瘤细胞。近来 631J o u r n a l o f P r a c t i c a l O n c o l o g yV o l . 2 1 N o . 22 0 0 6 图2 a He p A- H肿瘤内淋巴管 ( *)呈深棕色,血管( )呈暗 红 色( 5 - Na s e - AL P a s e双重染 色, 1 5 0 ) 图2 b He p A- H肿瘤周围淋巴 管( *)呈深棕色,血管( )呈 暗红色( 5 - Na s e - AL P a s e双重 染色, 1 5 0 )
8、 图3 He p A- H肿瘤组织( T) , 瘤周淋巴管内见瘤栓( E ) ( HE 染色, 3 0 0 ) 的研究认为,肿瘤免疫原性低下的原因之一,可能是 缺乏共刺激分子的表达。多数情况下,单有肿瘤抗 原,特别是弱的肿瘤抗原还不能有效地刺激机体的 免疫反应;只有同时存在第二信号的刺激,才可产生 有效的免疫反应。第一信号的产生依赖于T细胞受 体与结合于MHC分子上抗原肽的相互作用。第二 信号的产生有赖于抗原提呈细胞上共刺激分子。肿 瘤宿主体内共刺激分子表达异常,可使肿瘤逃避机 体免疫杀伤。体内T细胞的C D 2 8是共刺激分子的 一 种,通过与位于抗原提呈细胞的特异性配体B 7 - 1 (
9、C D 8 0 )和B 7 - 2 ( C D 8 6 )相互作用,可提供T细胞活 化所必须的第二信号 2 3 。 肿瘤发生淋巴转移并在局部淋巴结形成转移 灶,必须首先逃避T细胞的杀伤作用。He p A- H和 He p A- L是来源相同而转移能力不同的亲淋巴转移 He p A肝癌细胞亚系。低转移亚系He p A- L , 由单细 胞分离(克隆)培养获得;高转移亚系He p A- H,由单 细胞分离(克隆)培养联合局部淋巴结转移灶连续接 种筛选获得。本实验中,用He p A- H和He p A- L制作 荷瘤动物模型,观察荷瘤小鼠体内C D 8 +/ C D 2 8+ T 淋 巴 细 胞 变
10、 化。结 果 表 明,与 He p A- L组 比 较, He p A- H组肿瘤组织内C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细胞数 量明显降低;同时, He p A- H组外周血C D 8 +/ C D 2 8+ T淋巴细胞数量明显低于正常对照组; C D 8 +T淋巴 细 胞包括 C D 8 +/ C D 2 8+的细胞毒 T淋巴细胞 和 C D 8 +/ C D 2 8-的抑制性 T淋巴细胞两个亚群, 而细 胞毒T淋巴细胞是机体抗肿瘤免疫的主要效应细 胞。本实验结果提示,与低淋巴转移He p A- L肿瘤相 比,高淋巴转移He p A- H肿瘤对机体细胞免疫功能 具有更强的抑制作用,这
11、可能是He p A- H亚系高淋 巴转移表型的重要原因之一。临床研究也提示,一些 恶性肿瘤病人体内C D 8 +/ C D 2 8+T淋巴细胞数量明 显降低 4 。 肿瘤侵入肿瘤内或肿瘤周围淋巴管是肿瘤经淋 巴转移的首要条件。已经证明,肿瘤能分泌多种生长 因子,如VE G F - C和VE G F - D等诱导肿瘤内新生淋 巴管;肿瘤细胞VE G F - C 、 VE G F - D表达与肿瘤诱导 新生淋巴管和肿瘤淋巴转移能力呈正相关 5 6 。本 实验显示,高淋巴转移能力肝癌亚系He p A- H肿瘤 内和肿瘤周围淋巴管数量明显高于低淋巴转移能力 肝癌亚系He p A- L ;而且, He
12、p A- H肿瘤周围淋巴管 内可见有癌栓。本实验结果提示, C D 8 +/ C D 2 8+T淋 巴细胞数量低下、新生淋巴管形成是影响恶性肿瘤 亲淋巴转移特性的重要因素之一。 参考文献: 1 杨泽然,李继承.两种不同淋巴转移能力小鼠肝癌细胞 亚系的建立和生物学特性 J .实验生物学报, 2 0 0 3 , 3 6 ( 2 ) : 9 9 -1 0 4 . 2 Ha r d i n gF A, Al l i s o nJ P . C D 2 8 - B 7i n t e r a c t i o n sa l l o w t h ei n d u c t i o no f C D 8 + c y
13、 t o t o x i cTl y mp h o c y t e si nt h e a b s e n c eo f e x o g e n o u sh e l p J . JE x pMe d , 1 9 9 3 , 1 7 7 ( 6 ) : 1 7 9 1 -1 7 9 6 . 3 Ha r d i n gF A, Mc Ar t h u rJ G, G r o s sJ A, e ta l . C D 2 8 - me d i a t e ds i g n a l i n gc o - s t i mu l a t e smu r i n eT c e l l sa n d p
14、r e v e n t si n d u c t i o n o fa n e r g yi n T- c e l lc l o n e s J . Na t u r e , 1 9 9 2 , 2 5 6 ( 6 3 7 0 ) : 6 0 7 -6 0 9 . 4 Ma r t i n e z - E s c r i b a n oJ A,He r n a d e z - C a s e l l e sT, C a mp i l l oJ A, e ta l . C h a n g e si nt h en u mb e ro fC D( 8 0 + ) ,C D 8 6( + ) a n
15、 d C D 2 8( + ) p e r i p h e r a lb l o o d l y mp h o c y t e s h a v e p r o g n o s t i c v a l u e i n me l a n o ma p a t i e n t s J . Hu m I mmu n o l , 2 0 0 3 , 6 4 ( 8 ) : 7 9 6 -7 8 0 . 5 Ma t t i l aMM, R u o h o l aJ K, Ka r p a n e nT, e t a l . VE G F - C i n d u c e dl y mp h a n g
16、i o g e n e s i si sa s s o c i a t e dwi t hl y mp h n o d eme t a s t a s i s i no r t h o t o p i c MC F - 7t u mo r s J . I n t J C a n c e r , 2 0 0 2 , 9 8 ( 6 ) : 9 4 6 -9 5 1 . 6 S t a k e rS A,C a e s a rC ,B a l d wi n ME ,e ta l .VE G F - D p r o mo t e st h eme t a s t a t i cs p r e a do f t u mo rc e l l sv i at h e l y mp h a t i c s J . Na t u r eMe d , 2 0 0 1 , 7 ( 2 ) : 1 8 6 -1 9 1 . 731 实用肿瘤杂志2 0 0 6年第2 1卷第2期