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1、2 8 实用中医内科杂志 J O U R N A LO FP R A C T I C A LT R A D I T I O N A LC H I N E S EI N T E R N A LM E D I C I N E O c t 2009 V 0 1 2 3N o 1 0 H P L C 法测定金银冠心口服液中绿原酸含量的研究 崔斌，朱庆松，李明姬，指导：朱寅圣 ( 延边大学医学部，吉林廷吉1 3 3 0 0 0 ) 擅 要： 目的 采用高效液相色谱法测定金银冠心液中绿原酸的含量。 方法 用Y M C P a c k0 S D Ac 。色谱柱 ( 2 S O m m 4 6 m m5 W
2、i n ) ，甲醇一水一冰醋酸( 2 2 ：7 8 ：1 ) 为流动相，流速0 8 m L m i n ，检测波长3 2 7 n m 。 结果 绿原酸 在0 5 7 5 - 2 3 p , g 范围内呈良好线性关系( r = 0 9 9 9 9 ) ，平均回收率为1 0 0 0 1 ( B S D = 1 6 8 ，n = 5 ) 。 结论 本方法简 便、快速、可靠，可用于金银冠心液的质量控制。 关键词：金银冠心液；H P I C ； 绿原酸 中图分类号：R 一3 3 文献标识码：Ad o i ：1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 1 - 7 8 1 3 2 0 0 9 1
3、 0 1 4 D e t e r m i n a t i o no fC h l o r o g e n i ca c i di nJ i n Y i n G u a n X i ns o l u t i o nb yH P L C C U IB i n ，Z H UQ i n g s o n g ，L IM i n g j i ，A d v i s o r ：Z H UY i n s h e n g ( C o H e g eo fP h a r m a c yY a n b i a nU n i v e r s i t y ，Y a n j i1 3 3 0 0 0 ，J i l i n
4、，C h i n a ) A b s t r a c t ： O b j e c t i v e T od e t e r m i n eC h l o r o g e n i ca c i dc o n t e n ti nJ i n Y i n G u a n X i ns o l u t i o nb yH P L C M e t h - a d s T h ed e t e r m i n a t i o nw a sc a r r i e do u tw i t hY M C P a c kO S D AC 堪c o l u m n ( 2 5 0 m mX4 6 m m5 岬) w
5、 i t h m e t h a n o l ：w a t e r ：a c e t i ca c i d ( 2 2 ：7 8 ：1 ) a 8t h em o b i l ep h a s e ；t h ef l o wr a t ew a s0 8 m l r a i n 一，t h ed e t e c t i v e w a v e l e n g t hW a ss e t a t3 2 7 n m R e s u l t s T h eC h l o r o g e n i ca c i dc u r v ew a sl i n e a ro v e rt l l er a n
6、g eo f0 5 7 5 2 3 山g ( r = 0 9 9 9 9 ) 。t h ea v e r a g er e c o v e r yw a s1 0 0 0 1 ( R s D = 1 6 8 ，n = 5 ) C o r w l u s i o n s n em e t h o d w a ss i m p l e ，r a p i d ，a c c u r a t ea n dr e l i a b l e ，I tc a nb eu s e df o rq u a l i t ) ，c o n t r o lo fJ i n Y i n G u a n X i ns o l
7、 u t i o n K e yW o r d s ：J i n Y i n G u a n X i ns o l u t i o n ；H P L C ；c h l o r o g e n i ca c i d 本方由金银花、当归、丹参等五味药组成，具有清 热解毒、活血通络、益气养血、行气止痛等功效。笔者 采用H P L C 法测定方中君药金银花的有效成分绿原 酸的含量，为金银冠心口服液的质量控制提供可靠的 检测手段。 1 仪器、药品及试剂 高效液相色谱仪( 日本岛津) ；分析天平( 上海上 平仪器公司) ；电子天平( 上海精科) 。绿原酸对照品 ( 中国药品生物检定所，1 1 0 7 5
8、3 2 0 0 4 1 3 ) ；甲醇( 色 谱纯) ；其他试剂均为分析纯；金银冠心液( 本教研室 自制) 。 2 方法与结果 2 1 溶液的制备 2 1 1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照 品2 3 m g ，置2 0 m L 量瓶中，加5 0 甲醇溶解并稀释 至刻度，摇匀即得0 11 5 m g m L 绿原酸对照品溶液。 2 1 2 供试品溶液的制备精密吸取金银冠心液 4 m l 置5 0 m L 量瓶中，加入3 0 m L 的5 0 甲醇，超声处 理3 0 m i n ，放冷，用5 0 甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0 4 5 t r m 的滤膜滤过，作为供试品溶液。 基金项目：金银冠
9、心口服液是延边大学与延边州合作开发项目 编号为“延大科合字( 2 0 0 4 ) 第2 l 号延大科合字 ( 2 0 0 5 ) 第2 4 号” 2 1 3 阴性对照品溶液的制备取空白制剂按供 试品制备方法制备阴性供试品溶液。 2 2 色谱条件与系统适应性试验 Y M C P a c kO S D AC I 。( 2 5 0 m mX4 6 m m 5 岬) ；流动相：甲醇一水一冰醋酸( 2 2 ：7 8 ：1 ) 1 ；流 速：0 8 m L m i n ；检测波长：3 2 7 n m ；进样量l O 止；柱温 2 0 0 C 。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性 对照品溶液各1 0
10、p t L ，记录色谱图，结果如图1 。可 见，绿原酸色谱峰形对称，供试品色谱图中绿原酸峰 能与其它成分很好地分离，阴性对照品溶液无干扰。 0加3 00 2 03 00 51 0 1 5T 2 02 53 03 5 绿原酸对照品色谱图A供试品色谱图B阴性对照品色谱图C 2 3 线性范围精密吸取绿原酸对照品溶液5 、 7 5 、1 0 、1 5 、2 0 止按上述色谱条件测定峰面积，以峰 面积为纵坐标，进样量为横坐标，经线性回归处理，回 归方程为Y = 1 7 6 6 0 2 x 一1 4 6 9 6 9 ( r = 0 9 9 9 9 ) ，表明绿 原酸的进样量在0 5 7 5 2 3 p ,
11、 g 范围内与吸收度峰面 积呈良好的线性关系。 2 4 精密度试验精密吸取绿原酸对照品溶液重 万方数据 2 009 年 第2 3 卷第l O 期 实用中医内科杂志 J O U R N A LO FP R A C T I C A LT R A D I T I O N A LC H I N E S EI N T E R N A LM E D I C I N E 2 9 苦参碱和氧化苦参碱对小鼠免疫功能的实验研究 王进，朱萱萱，邱召娟，张忠华 ( 南京中医药大学附属医院，江苏南京2 1 0 0 2 9 ) 摘要： 目的 探讨苦参碱和氧化苦参碱对免疫功能的作用。 方法 采用对T 淋巴细胞酯酶染色率和溶
12、血素抗体 生成的方法。 结果 苦参碱和氧化苦参碱均可明显减少T 淋巴细胞酯酶染色率；但可明显促进溶血素抗体形成。 结 论 苦参碱和氧化苦参碱可明显降低T 淋巴细胞功能，对体液免疫功能呈增强作用。 关键词：免疫功能；苦参碱；氧化苦参碱 中圈分类号：R - 3 3 文献标识码：Ad o i ：1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 1 - 7 8 1 3 2 0 0 9 1 0 1 5 E x p e r i m e n t a lS t u d yo fM a t r i n ea n dO x y m a t r i n eo nt h el m m u n eF u n c
13、t i o ni nM o u s e W A N GJ i n ，Z H UX u a n x u s n ，Q I UZ h a o j u 鲫，e ta l ( R e s e a r c hc e n t e ro fJ i a n g S uP r o v i n c i a lH o s p i t a lo fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ， C h i n aP h a r m a c e u t i c a lU n i v e r s i t y ，N a n j i n g2 1 0 0 2 9 ，J
14、i a n g s u ，C h i n a ) A b s t r a c t ： O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t ee f f e c to ft h em a t r i n ea n do x y n m t l “ i n eo nt h ei m m u n ef u n c t i o n M e t h o d s E s t e r a s es t a i n i n go fTl y m p h o c y t e sa n da n t i b o d y p r o d u c i n gh e m o l y s i
15、 nm e t h o d “R e s u l t s M a t r i n e a n do x y m a t r i n eT l y m p h o c y t e sC a nb es i g n i f i c a n t l yr e d u c e dr a t eo fe s t e r a s es t a i n i n g ；b u tc o u l ds i g n i f i c a n t l y p r o m o t et h ef o r m a t i o no fh e m o l y s i na n t i b o d y C o n c l u
16、 s i o n M a t r i n ea n do x y m a t r i n ec a ns i g n i f i c a n t l yr e d u c eT l y m p h o c y t ef u n c t i o n ，a n dh u m o r a li m m u n ef u n c t i o nw a se n h a n c e d K e yW o r d s ：I n ：l n l u n ef u n c t i o n ；n m t r i n e ；o x y m a t r i n e 苦参碱和氧化苦参碱是两种从苦豆子根部发现 的生物碱，
17、主要植物来源为苦参，也可从其它植物山 豆根中提取，苦参中含有大量的生物碱，其中含量最 高的是苦参碱和氧化苦参碱，占药材总重的2 ，同 时还有其它相近的生物碱，如槐果碱、异苦参碱、槐啶 碱等，关于苦参碱和氧化苦参碱对免疫功能的影响有 不同的报道，一般认为有双向免疫调节作用，在低浓 度可刺激淋巴细胞增殖，高浓度时则抑制。为进一步 探讨苦参碱和氧化苦参碱对免疫功能的作用，进行以 下实验研究。现介绍如下： 复迸样5 次，1 0 止次，测峰面积，结果B S D 为 0 8 4 ，表明仪器的精密度良好。 2 5 重现性试验取同一批样品5 份，按供试品溶 液制备项下制备，测定峰面积，计算含量，结果B S D
18、 为1 4 0 ( 珏= 5 ) ，表明重现性良好。 2 6 稳定性试验取1 份样品，按供试品溶液制备 项下制备，分别予0 、2 、4 、6 、8 、1 2 h 迸样，测定峰面积， 结果R S D 为1 4 0 ( r , = 6 ) ，表明样品在1 2 h 内稳 定。 2 7 加样回收率试验精密吸取已知含量的样品 适量，共5 份，分别精密加入绿原酸对照品溶液适量， 按供试品制备方法和色谱条件测定，测得平均回收率 为1 0 0 0 1 ，R S D 为1 6 8 。结果见表1 。 2 8 样品测定取3 批样品，按供试品溶液制备项 下制备，分别迸样，测定，计算含量。结果绿原酸含量 分别为2 1
19、3 4m s m L ( R S D 为0 5 7 ) 、2 0 8 6m g m L ( R S D 为0 9 1 ) 、2 1 3 7 ( R S D 为2 1 2 ) 3 小结 取绿原酸对照品加甲醇稀释至适宜浓度，照紫外 分光光度法在2 0 0 4 0 0 h i l l 波长范围内测定吸光度， 表1绿原酸回收率测定结果( n = 5 ) 。样品含量对照品加测得量回收率 平均回R S D 缗号( m g m L ) A f t ( = g ) ( r a g )( )收率( )( ) l2 1 4 72 9 05 0 5 91 0 0 2 4 22 1 2 32 9 05 1 3 61
20、0 2 2 6 32 1 0 52 9 05 0 2 21 0 0 3 41 0 0 0 11 醴 42 1 3 22 9 04 9 0 99 7 5 5 52 1 0 52 9 04 9 8 7 9 9 6 5 结果对照品溶液在2 1 7 r i m 、3 2 7 a m 处吸收值相近。结 合药典，测定波长选择为3 2 7 n m 。 实验中用乙腈：0 4 磷酸( 1 3 ：8 7 ) 1 2 ，甲醇：水： 冰醋酸( 2 2 ：7 8 ：1 ) 为流动相。结果表明：甲醇：水： 冰醋酸( 2 2 ：7 8 ：1 ) 时色谱峰对称性良好。 参考文i f = I 刘芳高效液相色谱法测定双黄连E l 服液中绿原酸的含量 J 湖 北中医杂志，2 0 0 3 ，2 5 ( 9 ) ：4 6 2 朱啸风，孙钦美，刘景俊银黄口服液中黄芩苷和绿原酸含量的测 定 J 齐鲁药事，2 0 0 4 ，2 3 ( 6 ) ：2 5 ( 收稿日期：2 0 0 9 0 5 1 6 ) 万方数据