IL1α刺激人牙龈成纤维细胞产生IL11和IL6的比较研究.pdf

《IL1α刺激人牙龈成纤维细胞产生IL11和IL6的比较研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《IL1α刺激人牙龈成纤维细胞产生IL11和IL6的比较研究.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、现代口 腔医学杂志2 0 0 6 年第2 0 卷第2 期J M o d e r n S t o m a t o l , M a r c h 2 0 0 6 , V o l 2 0 , N o . 2 1 5 7 I L一1 a 刺激人牙酿成纤维细胞产生 I L-1 1 和 I L- 6 的比较研究 和璐N a g a s a w a T I s h i k a w a I 摘要 目的比 较I L - l a 刺激牙跟成纤维细胞( h u m a n g i n g i v a l f i b r o b la s t , H G F ) I L - 1 1 和I L - 6 的表达和 调控。方

2、法收集细胞上清液， E L I S A法侧定I L - 1 1 / I L - 6 的水平; 提取细胞m R N A， 实时定量R T - P C R法分析 比一1 1 m R N A的表达。结果I L - l a 显著增加H G F I L -1 1 / I L - 6 的表达( P 0 . 0 5 ) 0 表 1 I L一l a刺激 H G F a 2 4小时 I L一l l mR N A的表达 空白对照 I ND I L一l a I L一l a + I ND 0 . 2 0士0 . 0 1 0 . 2 7士0. 0 1 1 . 9 3 士0 . 0 7 # 0. 8 8士0 . 1 7

3、1 . 4 2土0. 1 1 1. 4 3士0. 1 3 5 3 . 0 4士6 . 3 0 6 3 . 7 9土9 . 9 9 ， 与空白对照比较， P 0 . 0 5 ; #与加人p a l FA美欣( I N D ) 的 I L-l a 联合 刺激组比较， P 0 . 0 5 表 3 I L一l a 刺激H G F - 1 细胞株细胞 2 4 小时 上清液I L - 1 1 和I L一 6 的水平( X士 S 又 ) 组别I L 一 1 1 ( n g / 1 0 H G F s ) I L 一 6 ( n g / 1 0 S H G F s ) 空白对照 I ND I L一l a I

4、L一l a+ I ND 0 . 3 8土0 . 0 1 0 . 4 2士0 . 0 2 2 . 5 5 土0 . 2 3 “ # 0 . 8 2士0 . 0 7 0 . 8 4士0 . 1 9 1 . 0 4士0 . 0 9 1 0 2 . 1 1 土8 . 9 5 . # 4 9 . 7 3士3 . 3 8 ， 与空白对照比较， P 0 . 0 5 ; #与加人叫噪美欣( I N D ) 的 I L- l a 联冶 刺激组比较， P 0 . 0 5 表4 S t a u r o s p o r i n e ( S T A ) 对I L 一 1 “ 刺激H G F b 产生I L 一n八 L

5、一 6 的抑制作用 X士 S 刃 组别1 L 一 1 1 ( n g / 1 0 5 H G F s ) I L 一 6 ( n g / 1 0 5 H G F s ) 空白对照 5 TA I L一 l a I L一l a+S TA 0 . 0 9士0 . 0 4 0 . 0 9士0 . 0 4 2 . 2 7 士0 . 0 8 # 0 . 3 5士0 . 1 1 2 . 2 0士0 . 0 3 2. 4 8士0. 2 1 3 5 . 2 4士2 . 1 1 . 7 1士1 . 8 3 # 0 0 b 细胞株H G F - 2 ; ， 与空白对照组比较， P 0 . 0 5 ; #与加人S T

6、 A的联 合刺激组比较， P 0 . 0 5 , 表5 S t a u r o s p o r in e 对I L 一 1 “ 刺激H G F 产生I L - 1 1 / I L - 6 的抑制作用 X 1 S 刃 组别I L 一 1 1 ( n g / 1 0 5 H G F s ) I L 一 6 ( n g / 1 0 5 H G F s ) 空白对照 5 产 r A I L一l a I L一1 a + S TA 0 . 3 7士0 . 0 7 0 . 2 5士0 . 1 1 5 . 2 6 士0 . 5 5 “ # 2. 1 9士0. 1 6 2. 4 6士0. 1 2 2. 6 8士

7、0. 2 4 4 5. 1 0士4 . 7 4 4 5. 2 0士2. 9 0 c 细胞株 H G F - 3 ; 二与空白对照组比较 ， P 0 . 0 5 ; 甘与加人 S T A的联 合刺激组比较， P 0 . 0 5 0 讨论 组 别G A P D H m R N A ( 拷 贝 数 ) I L - I I m R N A ( 拷 贝 数 )I L - I 1 / G A P D H 倍比 空白 对照 l N D I L 一I n 1 1 一I a +I N D 1 . 0 1 8 x 1 0 8 1 . 2 1 8 x 1 0 8 1 . 5 2 4 x 1 0 8 8 . 3 7

8、6 x 1 0 7 2 . 6 6 5 x 1 0 5 1 . l 9 9 x 1 0 5 2 . 1 3 3 X 1 0 6 4 . 9 3 4 x 1 0 5 a 细胞株H G F一 5 ; I N D : 呵噪美欣; G A P D H: 葡萄糖醛酸一 3 一磷酸脱氢酶 A i l 美欣是非特异性的环氧化物酶抑制剂， 抑 制前列腺素生成。本研究从蛋白质和m R N A水平 都证实 I L一l a 显著促进 H G F产生 I L一1 1 , 叫噪美 欣对该作用明显抑制， 提示在该过程中I L 一1 1 的生 成受内源性前列腺素在转录水平上的正向调节。 M a t s u i 1 1 也从

9、蛋白质和分子水平都证实I L 一 1 。 与 T G F R 协同刺激肺成纤维细胞产生I L 一 1 1 ， 在转录 水 平 受内 源 性P G E : 的 正向 调 节。 M i n o r 4 ) 不 仅证实 I L - l a 和 T N F 。 协同刺激类风湿滑膜成纤维细胞 产生I L - 1 1 ， 并受到内源性P G E : 的正向调节， 还证 实I L 一 1 1 的基因表达过程经由P K C信号传导系统 介导。本研究中， s t a u r o s p o r i n e 是 P K C分子的非特 11535l 1 6 0 现代口 腔医学杂志2 0 0 6 年第2 0 卷第2

10、期J M o d e r n S t o m a t o l , Ma r c h 2 0 0 6 , V o l 2 0 , N o . 2 异性抑制剂， 加人后， 受测的两株细胞系的 I L- 1 1 的生成都受到显著抑制， 提示 I L 一l a 刺激H G F的 信号传导可能主要经由 P K C途径促进 I L一 1 1 m R N A的转录和基因表达。 H G F自身表达 I L - 6 ， 受 I L- 1 刺激后表达明 显增加， 已被广泛证实， 但P G E : 如何调节I L 一 1 对 I L - 6 生 成的 促进作用， 则尚 有争议。 T a k i g a w a 7

11、1 和N o g u c h i l 8 的 研究表明0 3 1 4 美欣能明 显增加I L - l a 甲诱导产生的I L 一 6 水平， 内源性P G E 2 抑制I L 一 1 诱导的H G F - I L 一 6 产生， 而C z u s z a k l 9 证实了 相反结果。迄今， 还没有直接证据解释该现象。本 研究的五株细胞系全部取于健康牙周组织， 加人叫 噪美欣后， 只有一株提示 I L一6的产生可能受内源 性P G E 2 轻微抑制， 其余都提示内源性P G E : 促进 I L - 1 诱导I L - 6 的水平增加。虽然本研究只在蛋 白 质水平对I L 一 6 的产生进行检

12、测， 但T a k ig a w a 7 1 的分子学研究已经证实， I L 一 1 刺激H G F 产生的I L 一 6 受内 源性P G 乓在转录后水平的负向调节， 提示 受刺激的H G F表达 I L一1 1 和 I L一6 增加的过程， 都受内源性P G F . z 的调节， 但两者的生成调控机制 显然不完全相同， 前者可能为转录水平上的正向调 节。S t a u r o s p o r i n e 的抑制试验进一步肯定了上述推 断， 提示 I L一l a 刺激 H G F增加表达 I L一6的过程 中， 可能有不依赖 P K C传导途径的信号传导方式。 不过， S t a u r o

13、 s p o r i n e 作为P K C信号传导的非特异性 阻制剂， 不仅对 P K C途径有影响， 还可能改变其它 的第二信使途径的表达， 并且， P K C的异构体很多， 如P K C z e t a 几乎不受其影响， 因此， 本研究结果只 能提示 I L一1 可能主要经 P K C途径活化并刺激产 生 I L - 1 1 的转录因子， I L一1 1 的产生机制确与 I L 一 6 存在不同。I L 一 1 a 刺激培养的滑膜成纤维细胞 生成 I L一 1 1 受到 P K C特异性抑制剂 G F 1 9 2 3 X的 抑制， 而I L 一 6 的 生 成几乎不受该抑制剂影响 4 1

14、 ; 同 样地作用于人骨髓基质细胞后， I L一1 诱导增加的 I L一1 1和 I L一6都明显受到 S t a u r o s p o r i n e的抑 制 3 1 ; 表明I L 一 6 和I L 一 1 1 的生成及调控还可能有 细胞特异性并因此产生区别。另一方面， I L一6和 I L - 1 1 生成机制的不同还可能与 H G F的异源性 ( h e t e r o g e n i t y ) 或亚群细胞的存在有关 1 2 1 0 总之， I L - 1 1 和I L - 6 尽管同属g p 1 3 0 蛋白受 体家族成员， 在 H G F中产生的量、 受内源性的前列 腺素调控、

15、 I L一1 刺激信号传导途径的调控却均有 不同， 因此， 两者在牙周疾病发展中的作用不完全相 似， 也进一步提示前列腺素在牙周组织的健康维护 或破坏中可能有的多重性， 尚需进一步研究。 参考文献 1 K o n g Y Y, Y o s h i d a H, S a r o s i I , e t a l . O P G L i s a k e y r e g u l a t o r o f o s t e o c l a s t o g e n e s i s , l y m p h o c y t e d e v e l o p m e n t a n d l y m p h o一n o

16、 d e o r g a n o g e n e s i s . N a t u r e 1 9 9 9 , 3 9 7 : 3 1 5 一3 2 3 . 2 N a k a s h i m a T, K o b a y a s h i Y, Y a m a s a k i S , e t a l . P r o t e i n e x p r e s s i o n a n d f u n c t i o n a l d i f f e r e n c e o f m e m b r a n e一b o u n d a n d s o l u b l e r e c e p t o r a

17、c t i v a t o r o f N F 一 k a p p a B l i g a n d : m o d u l a t i o n o f t h e e x p r e s s i o n b y o s t e o t r o p i c f a c t o r s a n d c y t o k i n e s . B i o c h e m B i o p h y s R e s C o mmu n . 2 0 0 0 , 2 7 5 : 7 6 8一7 7 5 . 3 Ki m G S , Ki m C H, C h o i C S , e t a l . I n v o

18、 l v e me n t o f d i f f e r e n t s e c o n d m e s s e n g e r s i n p a r a t h y r o i d h o r m o n e 一a n d i n t e r l e u k i n 一1 一i n d u c e d i n t e r l e u k i n 一6 a n d i n t e r l e u k i n一1 1 p r o d u c t i o n in h u m a n b o n e ma r r o w s t r o ma l c e ll s . J B o n e Mi

19、 n e r R e s . 1 9 9 7 , 1 2 : 8 9 6 一9 0 2 1 . 4 Mi n o T, S u g i y a m a E , T a k i H, e t a l . I n t e r l e u k i n一l a l p h a . a n d t u m o r n e c r o s i s f a c t o r a l p h a s y n e r g i s t i c a l l y s t i m u l a t e p r o s t a g l a n d i n 凡 一d e p e n d e n t p r o d u c t

20、i o n o f i n t e r l e u k i n一 1 1 i n r h e u m a t o i d s y n o v i a l f i b r o b l a s t s . A r t h r i t i s R h e u m. 1 9 9 8 , 4 1 : 2 0 0 4 一2 0 1 3 . J o h n s o n R B , Wo o d N, S e r i o F G. I n t e r l e u k i n 一1 1 a n d I L一1 7 a n d t h e p a t h o g e n e s i s o f p e r i o

21、 d o n t a l d i s e a s e . J P e r i o d o n t o l 2 0 0 4 , 7 5 : 3 7 一4 3. 和璐， N a g a s a w a T , I s h ik a w a I . I L 一 1 。 和T N F a 刺激牙眼成纤维 细胞产生 I L - 1 1 的研究. 中华口腔医学杂志， 2 0 0 4 , 3 9 : 4 8 8 一 4 9 1 . T a k i g a w a M, T a k a s h i b a S , T a k a h a s h i K, e t a l . P r o s t a g l a

22、 n d i n民 i n h i b i t s i n t e r l e u k i n一6 r e l e a s e b u t n o t i t s t r a n s c r i p t io n i n h u m a n g i n g i v a l f i b r o b l a s t s s t i m u l a t e d w i t h i n t e r l e u k i n一1 b e t a o r t u m o r n e c r o s i s f a c t o r 一a l p h a . J P e r i o d o n t o l .

23、1 9 9 4 , 6 5 : 1 1 2 2 一1 1 2 7 . N o g u c h i K, S h i t a s h i g e M, E n d o H, e t a l . B i n a ry r e g u l a t i o n o f in t e r l e u k in ( I L ) 一 6 p r o d u c t io n b y E P l a n d E P 2 / E P 4 s u b t y p e s o f P G E 2 r e c e p t o r s i n 1 L一 1 b e t a一 s t i m u l a t e d h

24、u m a n g i n g i v a l f i b rob l a s t s . J P e r io d o n t a l R e s . 2 0 0 2 , 3 7 : 2 9 一3 6 . C z u s z a k C A, S u t h e r l a n d D E , B i l l m a n MA, e t a l . P r o s t a g l a n d i n 几 p o t e n t i a t e s i n t e r l e u k i n 一1 b e t a i n d u c e d i n t e r l e u k i n 一6 p

25、 r o d u c t io n b y h u m a n g i n g i v a l f i b r o b l a s t s . J C l i n P e r io d o n t o l . 1 9 9 6 , 2 3 : 6 3 5 一 6 4 0. N a g a s a w a T, K o b a y a s h i H, K i j i M, e t a l . L P S一s t i m u l a t e d h u m a n g i n g i v a l f i b ro b l a s t s i n h i b i t t h e d i f f e

26、r e n t i a t i o n o f m o n o c y t e s i n t o o s t e o c l a s t s t h r o u g h t h e p r o d u c t i o n o f o s t e o p ro t e g e r i n . C l i n E x p I mmu n o l . 2 0 0 2 , 1 3 0 : 3 3 8 一3 4 4 . Ma t s u i S , Y a m a s h i t a N, Mi n o T, e t a l . R o l e o f t h e e n d o g e n o u

27、s p ro s t a g l a n d i n 凡 i n h u m a n l u n g f i b rob l a s t i n t e r l e u k i n一 1 1 p rod u c t i o n . R e s p i r Me d 1 9 9 9 , 9 3 : 6 3 7 一6 4 2 . I r w i n C R, P i c a r d o M, E l l i a s 1 , e t a l . I n t e r 一 a n d i n t r a 一s i t e h e t e ro g e n e i t y i n t h e e x p

28、r e s s i o n o f f e t a l一 l i k e p h e n o t y p i c c h a r a c t e r i s t i c s b y g i n g i v a l f i b r o b l a s t s : p o t e n t i a l s i g n i f i c a n c e f o r w o u n d h e a l i n g . J C e l l S c i 1 9 9 4 , 1 0 7 : 1 3 3 3 一1 3 4 6 . ( 本文编辑王好公) ( 收稿日 期 2 0 0 4 - 1 2 - 2 2 ) ( 修回日期2 0 0 5 - 0 3 - 2 8 )