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1、I C S 1 1 . 2 2 0 B 4 1 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 N Y/ T 7 6 5 -2 0 0 4 高致病性禽流感 样品采集、 保存及运输技术规范 2 0 0 4 - 0 2 - 1 7 发 布2 0 0 4 一 0 2 一 1 7 实施 中 华 人 民共 和 国农 业 部发 布 N Y / T 7 6 5 -2 0 0 4 前 j 一 曰 本标准中 附录A和附录B 为规范性附录。 本标准由中华人民共和国 农业部提出。 本标准由 全国 动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 农业部动物及动物产品 卫生质量监督检验测试中心、 农业部兽医
2、诊断中心。 本标准主要起草人：王玉东、 郭福生、 龚振华、 王宏伟、曲志娜、王娟、 刘俊辉、蒋正军。 N Y / T 7 6 5 -2 0 0 4 高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范 范围 本标准规定了 高致病性禽流感病料采集、 保存和运输的方法。 本标准适用于疑似高致病性禽流感禽样品的采集、 保存及运输。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 的修改单（ 不包括勘误的内 容） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日 期的引用文件， 其最新版
3、本适用于本标准。 N Y / T 7 6 8 高致病性禽流感人员防护技术规范 采样前的准备 采样要求 根据采样目 的， 采集不同类型和不同 数量的样品。 采样人员必须是兽医 技术人员， 熟悉采样器具的使用， 掌握正确的采样方法。 器具和试剂 器具 1 动物检疫器械箱、 保温箱或保温瓶、 解剖刀、 剪刀、 镊子、 酒精灯、 酒精棉、 碘酒棉、 注射器及针 2 样品容器（ 如西林瓶、 平皿、 1 . 5 m L塑料离心管、 1 0 m L玻璃离心管及易封口 样品袋、 塑料包 八了11 ； 11弓0矛JC了J八了0勺才J 3象3333主头3 装袋等） 。 3 . 2 . 1 . 3 试管架、 塑料盒
4、（ 1 . 5 m L小塑料离心管专用） 、 铝饭盒、 瓶塞、 无菌棉拭子、 胶布、 封口 膜、 封条、 冰袋。 3 . 2 . 1 . 4 采样刀剪等器具和样品容器须经无菌处理。 3 . 2 . 2 试剂 加有抗生素的p H 7 . 4 等渗磷酸盐缓冲液（ P B S） （ 配制方法见附录A ) . 3 . 3 记录和防护材料 不干胶标签、 签字笔、 圆珠笔、 记号笔、 采样单、 记录本等； 口 罩、 一次性手套、 乳胶手套、 防护服、 防护 帽、 胶靴等。 样品采集 4 . 1 基本要求 应从死禽和处于急性发病期的病禽采集样品， 样品要具有典型性。采样过程要注意无菌操作， 同时 避免污染环
5、境。 采样人员要按 N Y / T 7 6 8的要求加强个人防护。 4 . 2 病死禽 4 . 2 . 1 一般采集组织样品。取死亡不久的 5 只病死禽采样， 病死禽数不足5 只时， 取发病禽补齐5 只。 4 . 2 . 2 每只禽采集肠管及肠内容物 1 份； 肺和气管样品 1 份； 肝、 脾、 肾、 脑等各 1 份， 并分别采集。上 N Y / T 7 6 5 -2 0 0 4 述每个样品取样重量为1 5 g - 2 0 g ， 放于样品袋或平皿中。如果重量不够可取全部脏器（ 如脾脏） 。 4 . 2 . 3 不同禽只脏器不能混样， 同一禽只不同 脏器一般不能混样。 将样品封口， 贴好标签。
6、 4 . 3 病禽 无病死禽时， 采集病禽样品。 4 . 3 . 1 拭子样品 取 5 只病禽采样， 每只采集泄殖腔拭子和喉气管拭子各 1 个， 将样品端剪下， 分别置于含有抗生素 P A S的（ 加 1 . 0 m L -1 . 3 m L P A S ） 小塑料离心管中， 封好口， 贴好标签。 4 . 3 . 1 1 泄殖腔拭子采集方法 将棉拭子插入泄殖腔约 1 . 5 c m 一 2 c m， 旋转后沾上粪便。 4 . 3 . 1 . 2 粪便样品 小珍禽采泄殖腔拭子容易造成伤害， 可只采集5 个新鲜粪便样品（ 每个样品1 g - 2 g ) ， 置于内含有 抗生素P B S（ 加1 n
7、 止一 1 . 5 m l , P B S ） 的西林瓶中， 封好口， 贴好标签。 保存粪便和泄殖腔拭子的P B S 中 抗生素浓度提高5 倍（ 配制方法见附录A ) . 4 . 3 . 1 . 3 喉气管拭子采集方法 将棉拭子插入口 腔至咽的后部直达喉气管， 轻轻擦拭并慢慢旋转， 沽上气管分泌物。 保存喉气管拭 子的P B S 中 抗生素浓度（ 配制方法见附录A ) . 4 . 3 . 2 血清样品 采集 1 0 只 病禽的血样， 心脏或翅静脉采血， 每只病禽采血样 2 m L 一3 m L ， 盛于西林瓶中或 1 0 M L 离心管中， 经离心或自 然放置析出血清后， 将血清移到另外的西林
8、瓶或小塑料离心管中， 盖紧瓶塞， 封好 口， 贴好标签。不同 禽只的血样不能混合。 4 . 3 . 3 组织样品 当需要采集组织样品时， 将 5 只病禽宰杀， 组织样品采样方法同4 . 2。 4 . 4 整禽采样 4 . 4 . 1 适于禽主或兽医部门采样。 4 . 4 . 2 将病死禽或病禽装人塑料袋内， 至 少用两层塑料袋包装， 同时和血清样品一起用保温箱加冰袋 密封包装， 由采样人员 1 2 h内 带回或送到实验室。 4 . 4 . 3 要求死禽和病禽总数不少于 5只； 组织采样方法同4 . 2 0 4 . 4 . 4 血清样品不少于1 0 份， 每份不少于1 . 5 m L。采血方法同
9、4 . 3 . 2 0 4 . 5 采样单及标签等的填写 样品 信息详见附录 B， 采样单要用钢笔或签字笔逐项填写（ 一式三份） ， 样品标签和封条应用圆珠 笔填写， 保温容器外封条用钢笔或签字笔填写， 小塑料离心管上可用记号笔作标记。应将采样单和病史 资料装在塑料包装袋中， 随 样品 一起送到实验室。 4 . 6 包装要求 4 . 6 . 1 每个组织样品 应仔细分别包装， 在样品袋或平皿外面贴上标签， 标签注明 样品名、 样品编号、 采 样日 期等。 再将各个样品放到塑料包装袋中。 4 . 6 . 2 拭子样品小塑料离心管要放在特定的塑料盒内。 4 . 6 . 3 血清样品装于西林瓶时，
10、要用铝盒盛放， 盒内加填塞物避免小瓶晃动。若装于小塑料离心管中， 则放在塑料盒内。 4 . 6 . 4 包装袋外、 塑料盒及铝盒要贴封条， 封条上要有采样人签章， 并注明贴封日 期。标注放置方向， 切勿倒置。 N Y / T 7 6 5 -2 0 0 4 5 保存和运输 5 . ！ 样品置于保温容器中 运输， 保温容器必须密封， 防止渗漏。一般使用保温箱或保温瓶， 保温容器外 贴封条， 封条有贴封人（ 单位） 签字（ 盖章） ， 并注明贴封日 期。 5 . 2 样品应在特定的温度下运输， 拭子样品和组织样品要作暂时的冷藏或冷冻处理， 然后立即运送实 验室。 5 . 2 . 1 若能在 4 h
11、内送到实验室， 可只用冰袋冷藏运输。 5 . 2 .2 如果超过4 h ， 要作冷冻处理。应先将样品置于 一 3 0 冻结， 然后再在保温箱内加冰袋运输， 经 冻结的样品必须在2 4 h 内送到。 5 . 2 . 3 若2 4 h 不能送到实验室， 需要在运输过程中 保持一 2 0 以下。 5 . 3 血清样品要单独存放。若 2 4 h 内运达实验室， 在保温箱内加冰袋冷藏运输； 若超过 2 4 h ， 要先冷 冻后， 在保温箱内 加大量冰袋运输， 途中不能超过4 8 h o 5 . 4 各种样品到达实验室后， 若暂时不进行处理， 则应冷冻（ 最好一 7 0 或以下） 保存， 不得反复冻融。
12、N Y/ T 7 6 5 -2 0 0 4 附录A （ 规范性附录） p H 7 . 4 的等渗磷酸盐缓冲液（ P B S ） 的配制 A . 1 p H 7 . 4 的等渗磷酸盐缓冲液（ 0 . 0 1 n i o l / L , p H 7 . 4 , P B S ) Na C I 8 . 0 g K H Z P O 4 0 . 2 g N a 2 H P 0 4 1 2 H 2 0 2 . 9 g K C l 0 . 2 g 将上列试剂按次序加入定量容器中， 加适量蒸馏水溶解后， 再定容至1 0 0 0 m L ， 调州 至7 . 4 ， 高压 消毒灭菌 1 1 2 k P a 2 0
13、m in ， 冷却后， 保存于4 冰箱中备用。 A . 2 棉拭子用抗生素 P B S （ 病毒保存液） 的配制 取上述P B S 液， 按要求加人下列抗生素： 喉气管拭子用P B S 液中加入青霉素（ 2 0 0 0 I U / m L） 、 链霉 素（ 2 m g / m L ) 、 丁胺卡那霉素（ 1 0 0 0 I U / m L ) 、 制霉菌素（ 1 0 0 0 I U / m L ) a粪便和泄殖腔拭子所用的 P B S中 抗生素浓度应提高5 倍。加人抗生素后应调州 至7 . 4 。 在采样前分装小塑料离心管， 每管中加 这种P B S 1 . 0 m L - 1 . 3 m L
14、。采粪便时， 在西林瓶中 加 P B S 1 m L - - 1 . 5 m L， 采样前冷冻保存。 N Y / T 7 6 5 -2 0 0 4 附录B （ 规范性附录） 禽流感监测采样单 场名或禽主 禽别（ 划J）口 祖代口父母代口商品代 通讯地址邮编 联系人电话 传真 栋号样品名称品种日龄存养量采样数量 编号起止 既 往 病 史 及 免 疫 情 况 临 床 症 状 和 病 理 变 化 采 样 单 位 联系电话 被采样单位盖章或签名 年月日 采样单位盖章或签名 年月日 注： 此单一式三份， 第一 联采样单位保存， 第二联随 样品， 第三联由 被采样单位保存。 “ 编号起止” 统一用阿拉伯数字 1 , 2 , 3 , 表示 ， 各场保存原禽只编号。